银屑宁胶囊对心得安致豚鼠银屑病样皮损IL－2、TNF－α水平的影响

刘俊峰 朱 璐 广州中医药大学第二临床医学院（广州510000）

银屑病俗称“牛皮癣”，中医称“白疕”，是一种慢性复发性炎症性皮肤病。近年来中医药在银屑病的治疗中逐渐显出优势，其具有改善病情，延缓复发，副作用小的特点。本实验通过对豚鼠耳部外涂心得安乳膏诱发银屑病模型的实验研究，选用临床有效制剂“银屑宁胶囊”进行干预，研究其可能的作用机制。

1.材料及方法 1.1 实验材料 1.1.1 动物来源：清洁级豚鼠60只，雌雄各半，体重300g±50g，由西安交通大学实验动物中心提供。动物合格证号：医动字第08－019号。

1.1.2 实验用药：心得安片（盐酸普萘洛尔片），10mg/片，国药准字：H61022221，由陕西中医学院附属医院制剂室配置成5%心得安乳剂备用。

银屑宁胶囊（主要组成：生地、玄参、丹皮、赤芍、丹参、板蓝根、土茯苓、乌蛇）由陕西中医学院附属医院提供。按照文献方法[1]，遵照人与动物体重折算等效计量表，折算成豚鼠用量，用蒸馏水将药物配制成生药含量为0.22g/mL的药液，冰箱保存备用。

复方青黛胶囊（主要组成：青黛、马齿苋、白芷、土茯苓、紫草、贯众、蒲公英、丹参等），国药准字号Z20010157。用蒸馏水将药物配制成生药含量为0.44g/mL、0.22g/mL、0.11g/mL的药液，冰箱保存备用。

1.1.3 主要试剂：IL－2试剂盒，由北京福瑞生物有限公司提供；TNF－α试剂盒，由北京福瑞生物有限公司提供。

1.1.4 主要实验器材：GTZA型精密天平；BX－50奥林巴斯显微镜；TDL－45H低温高速离心机，FM－2000全自动γ免疫计数器.

1.2 实验方法 1.2.1 分组：将60只豚鼠适应性喂养1周，随机分为6组，每组10只，A组：正常组，B组（模型组）、C组（复方青黛胶囊组，以下简称青黛胶囊组）、D组（银屑宁大剂量组，以下简称银大组）、E组（银屑宁中剂量组，以下简称银中组）、F组（银屑宁小剂量组，以下简称银小组）。

1.2.2 造模：按文献方法[2]将5%心得安乳剂均匀涂于B、C、D、E、F组豚鼠双侧耳背皮肤（1cm2用药0.3g，用玻璃棒涂匀），厚度约1.0mm，每日3次，连续2周。

1.2.3 给药：造模完成后，A组、B组用生理盐水灌胃，每次1mL，每日2次；C组灌服生药含量为0.22g/mL复方青黛丸药液，D、E、F组分别灌服0.44g/mL、0.22g/mL、0.11g/mL的银屑宁药液，1mL/次，每日2次，连续用药4周。

1.2.4 观察指标：①肉眼观察一般情况和豚鼠双耳形态镜下观察。②治疗4周后，手术切取各组豚鼠左侧耳部标本，光镜下观察病理变化。③采用放免法测定皮损IL－2、TNF－a水平。用药4周后，手术切取各组豚鼠右侧耳部标本，用预冷生理盐水冲洗，拭干，切取0.4g，放入有1.0mL生理盐水的试管内，用高速分散机以10000rpm匀浆2次，每次10s，匀浆后，用3500rmp离心15min，取上清液，用放免法测定IL－2、TNF－a的含量（由陕西中医学院第二附属医院同位素室检测）。

2 实验结果 2.1 肉眼观察 2.1.1 一般情况：空白组豚鼠精神好，反应敏捷，好斗，毛发浓密有光泽，紧贴皮肤，饮食、二便正常。所有造模动物造模1周后均出现精神较差，反应较空白组迟钝，喜卧，进食减少，毛发无光泽，易脱落。2周后造模动物上述症状加重并出现搔抓耳部现象。经治疗4周后银屑宁胶囊大、中剂量组和复方青黛胶囊组豚鼠上述症状明显减轻。

2.1.2 豚鼠双耳形态：造模1周后，模型组动物耳背部涂药部位毛发部分脱落无毛根，局部皮肤红肿，触之皮温较正常组动物稍高。2周后红肿加重，并覆有少量极细小银白色鳞屑。正常组豚鼠双耳毛发正常无脱落。用药期间，模型组症状无明显变化；银屑宁胶囊大、中剂量组和复方青黛胶囊组治疗组症状逐渐改善，四周后红肿基本消失，鳞屑减少。

2.1.3 镜下观察：光镜下正常组豚鼠耳背皮肤可见菲薄的角质层，颗粒层约1～3层，棘层细胞约3～5层，基底层为单层柱状细胞，表皮突平坦；毛细血管扩张不明显；真皮浅层稀疏散在的淋巴细胞浸润。模型组镜下均可见到不同程度的角化过度、棘层肥厚，乳突内有炎细胞浸润，部分标本见到了广泛或灶状角化不全，颗粒层变薄或消失。表皮突延伸呈棒状，乳突上伸呈杵状变，毛细血管扩张、充血。血管周围可见单一核及多形核细胞浸润。治疗后银屑宁胶囊大、中剂量组和复方青黛胶囊组皮损组织病理明显改善。

2.2 皮损组织内IL－2水平的检测 从表1可知：与正常组比较，模型组IL－2含量明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组相比，青黛胶囊组、银大组、银中组IL－2含量均降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）；青黛胶囊组、银大组、银中组之间比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。

表1 皮损组织中IL－2含量测定结果

2.3 皮损组织中TNF－α含量测定 从表2可知：与正常组相比，模型组TNF－α含量明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型组相比，青黛胶囊组、银大组、银中组含量均降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）；青黛胶囊组、银大组、银中组之间比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。

表2 皮损组织中TNF－α含量测定结果

3 讨 论 Gaylard[3]等用心得安涂药于豚鼠皮肤，造成皮肤角化过度，角化不全和棘层肥厚等银屑病样皮损，此方法已被国内学者多次重复，证实在豚鼠皮肤引起银屑病样皮损具有可重复性。此外，该病理改变在不接受心得安乳剂刺激的情况下能维持2周不消退[4]。在银屑病的发病过程中，T细胞的活化及其引起的后续免疫炎症反应是银屑病发生和发展的关键环节。以Th为主的T淋巴细胞是主要的炎症细胞，Th细胞可分成两个亚群Thl和Th2，在银屑病的研究中证实了Thl细胞占优势，针对Th1细胞超强作用下的IL－2，TNF－α分泌，参与了疾病的发生和发展过程，作为暴露的病理性靶位因子而成为抗银屑病药物治疗的作用靶位[5，6]。

本实验研究中经过银屑宁胶囊治疗后模型皮损中IL－2、TNF－α的水平含量明显降低，银屑宁胶囊发挥作用的可能机制是通过抑制Thl细胞的超强作用，降低IL－2和TNF－α的分泌水平，一定程度上有利于促进Thl/Th2两个亚群的平衡，进而降低了由于失衡产生的免疫炎性反应造成银屑病的病理损害。

寻常型银屑病早期发病以血热为主，早期合理的清热解毒凉血，病情会顺势而消[7]。银屑宁胶囊由生地、玄参、丹皮、赤芍、丹参、板蓝根、土茯苓、乌蛇等组成，是在已故著名老中医郭仲轲教授治疗银屑病经验方“生元饮”的基础上，结合现代药理研究成果及多年临床经验研制而成，全方具有凉血活血，清热解毒，疏风止痒之功。本实验主要从细胞因子水平研究了该药治疗银屑病的机制，结果研究表明银屑宁胶囊可能降低皮损组织IL－2、TNF－a的含量，这可能是银屑宁胶囊治疗银屑病的机制之一。

[1]施新猷.医用实验动物学[M].西安：陕西科技出版社，1989：152.

[2]黄 畂，张淑芝，孙 令.心得安涂药造成豚鼠耳部银屑病样病理变化[J].中华皮肤科杂志，1991，24（2），96－97.

[3]Garlarde PM.Psoriasiform changes in guinea－pig skin form propranolol[J].clin Exper Dermatol，1978，3（3）：157－160.

[4]王懿娜，方 红，张幸国，等.紫杉醇溶液外用治疗豚鼠耳部银屑病样病理改变的疗效观察[J].中华皮肤科杂志，2004，37（3）：156158.

[5]Caldarola G，De Simone C，Carbone A，Tulli A，Amerio P，Feliciani C.TNFalpha and its receptors in psoriatic skin，before and after treatment with etanercept[J].Int J Immunopathol Pharmacol，2009，22（4）：961－6.

[6]施惠娟，周 茹，金少举，等.氧化苦参碱对银屑病小鼠模型血清中IL－2、IL－10、TNF－α水平的影响[J].华西药学杂志，2010，25（4）：418－420.

[7]赵振波.银屑病中医治疗体会[J].陕西中医，2009，30（1）：124.