15味中草药对5种临床分离菌株的体外抑菌效果观察

李成叶，王德海

(华中农业大学动物医学院，湖北武汉430070)

中草药作为一种无污染、绿色、天然的药物，具有多能性、稳定性和资源广泛、价格低廉等特点，且不易产生耐药性，毒副作用小，已经证实多种中草药及其成分具有良好的抑菌或抗菌作用［1-4］，其作为替代抗生素解决抗药性和药物残留等方面的优势越来越受到人们的重视。利用中草药防治动物疾病，既是饲养动物的需要，也是人们生活保健的需求。

本实验以栀子、艾叶、百部、黄连、贯众、鱼腥草、夏枯草、蒲公英、大青叶、黄柏、黄芩、紫草、金银花、败酱草、连翘等15味中草药对临床分离的5株临床分离细菌(金黄色葡萄球菌、白葡萄球菌、链球菌、鸡大肠杆菌、仔猪大肠杆菌)的体外抑菌效果进行观察，从而为临床应用和科学研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试菌株 金黄色葡萄球菌菌株分离自患葡萄球菌性关节炎鸡的关节部位;白葡萄球菌分离自患葡萄球菌病鸭的肝脏部位;鸡大肠杆菌分离自患大肠杆菌病鸡的肝脏部位;链球菌分离自患链球菌性关节炎猪的关节部位;仔猪大肠杆菌分离自患大肠杆菌病仔猪的十二指肠部位。

以上菌株由华中农业大学动物医学院病理教研室分离、鉴定、保存，临用前分别将供试菌株在基础培养基上培养18 h，用生理盐水洗下菌苔，稀释至浓度为1.2×1010CFU/mL的菌悬液，备用。

1.2 试剂及药品

1.2.1 供试中草药 栀子、艾叶、百部、黄连、贯众、鱼腥草、夏枯草、蒲公英、大青叶、黄柏、黄芩、紫草、金银花、败酱草、连翘均购于湖北省武汉市天然药物医疗研究院。

临用前将各种中草药分别称取10 g，放入三角烧瓶中，加水100 mL浸泡30 min后加热煮沸30 min，滤纸过滤取药液，药渣按以上方法再次浸泡、煮沸，合并两次药液，加热煮沸浓缩至10 mL，即得每mL含1 g生药的药液。经115℃高压灭菌30 min并补足水分后备用。

1.2.2 基础培养基 将15 mL、pH 7.4的灭菌基础培养基倾注于培养皿中，37℃培养24 h，观察无菌生长后，4℃冰箱保存备用。

1.3 试验设计 按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)要求进行试验设计，并经适当改进。吸取20 μL制备的菌悬液加入制备的基础培养基表面，均匀涂布，于室温下干燥3～5 min后，用外径6 mm的硬塑料管将涂布有菌悬液的基础培养平板等间距对称打孔4个，挑出孔中培养基，并在酒精灯火焰上对培养平板封底，将各种供试中草药用蒸馏水稀释成1.00 g/mL、0.75 g/mL、0.50 g/mL、0.25 g/mL、0.10 g/mL、0.05 g/mL 等6 个浓度，吸取药液50 μL加入孔中，每种中草药每个浓度设4个重复，然后将培养平板放入37℃温箱培养18 h后用游标卡尺测量抑菌圈直径，同种中草药同一浓度取其抑菌圈直径的平均值，此即各种中草药在不同浓度下对供试菌株的抑菌效果。1.4 抑菌效果判断 参考NCCLS推荐的标准进行判断。以抑菌圈直径＞20 mm为极敏，15～20 mm之间为高敏，10～15 mm之间为中敏，抑菌圈直径＜10 mm为低敏，无抑菌圈为耐药。

2 结果与分析

2.1 供试中草药对临床分离金葡菌的抑菌效果详见表1。

表1 15味中草药对鸡关节源性金葡菌的体外抑菌效果观察

由表1可知，15种中草药在1.00 g/mL浓度下除艾叶外对金黄色葡萄球菌都表现为极敏。其中，供试菌株对0.05g/mL浓度以上的金银花，0.25 g/mL浓度以上的百部，0.50 g/mL浓度以上的黄芩，及0.75 g/mL浓度的栀子、贯众、鱼腥草、夏枯草、大青叶、败酱草和连翘都表现为极敏。供试菌株表现为高敏的中草药有0.05 g/mL浓度以上的百部和夏枯草，0.10 g/mL浓度以上的贯众、鱼腥草、大青叶和黄芩，0.25 g/mL浓度以上的栀子、紫草、败酱草和连翘及0.50 g/mL浓度以上的艾叶、黄连、蒲公英和黄柏。表现为中敏的中草药有0.05 g/mL浓度以上的黄连、贯众、鱼腥草、蒲公英、大青叶、黄芩、紫草、败酱草和连翘，0.10 g/mL浓度以上的栀子和艾叶及0.25 g/mL浓度以上的黄柏。表现为低敏的有0.05 g/mL浓度的栀子，0.10 g/mL浓度以下的黄柏。而金黄色葡萄球菌对0.05 g/mL浓度的艾叶表现为耐药。

2.2 供试中草药对临床分离白葡菌的抑菌效果详见表2。

表2 15味中草药对鸭肝脏源性白葡菌的体外抑菌效果观察

由表2可知，15种中草药在1.00 g/mL浓度时除栀子外对白葡萄球菌都表现为极敏。其中对0.10 g/mL浓度以上的黄芩和金银花，0.50 g/mL浓度以上的艾叶、百部、贯众、大青叶、紫草和败酱草，0.75 g/mL浓度以上的黄连、夏枯草和连翘也表现为极敏。而0.05 g/mL浓度以上的贯众、大青叶、紫草、黄芩和金银花，0.10 g/mL浓度以上的百部、鱼腥草、夏枯草和败酱草，0.25 g/mL浓度以上的艾叶、黄连和连翘，蒲公英和黄柏分别在0.50 g/mL、0.75 g/mL浓度以上时都表现为高敏。对1.00 g/mL浓度的栀子表现为中敏，同样表现为中敏的还有0.05 g/mL浓度的百部、鱼腥草、夏枯草、败酱草和连翘，0.10 g/mL浓度的黄连、蒲公英和连翘，0.25 g/mL浓度的蒲公英和黄柏及0.50 g/mL浓度的黄柏。供试菌株对0.75 g/mL和0.50 g/mL浓度的栀子，0.10 g/mL浓度的艾叶，0.05 g/mL浓度的黄连和蒲公英均表现为低敏。对0.25 g/mL浓度以下的栀子，0.10 g/mL浓度以下的黄柏及0.05 g/mL浓度的艾叶表现为耐药。

2.3 供试中草药对临床分离链球菌的抑菌效果详见表3。

表3 15味中草药对猪关节源性链球菌的体外抑菌效果观察

由表3可知，供试链球菌菌株对1.00 g/mL浓度的鱼腥草、大青叶、黄柏、紫草和连翘，以及0.50 g/mL浓度以上的百部和金银花均表现为极敏。对1.00 g/mL浓度的艾叶、贯众、蒲公英、黄芩和败酱草，0.75 g/mL 浓度的黄柏，0.50 g/mL 浓度以上的大青叶，0.25 g/mL浓度以上的百部、紫草和连翘及0.10 g/mL浓度以上的鱼腥草和金银花均表现为高敏。表现为中敏的药物有0.75 g/mL浓度以上的栀子和艾叶，0.50 g/mL浓度以上的黄连、蒲公英和败酱草，0.25 g/mL浓度以上的大青叶和黄柏，0.05 g/mL浓度以上的贯众、鱼腥草、紫草、金银花和连翘。而对0.50 g/mL浓度的栀子和艾叶，0.25 g/mL浓度的蒲公英和败酱草，0.10 g/mL浓度的百部和大青叶，0.05 g/mL浓度的大青叶均表现为低敏。表现为耐药的中草药有夏枯草，0.75 g/mL浓度以下的黄芩，0.25 g/mL浓度以下的栀子、艾叶和黄连，0.10 g/mL浓度以下的蒲公英、黄柏和败酱草。

2.4 供试中草药对临床分离鸡肝脏源性大肠杆菌的抑菌效果 详见表4。

表4 15味中草药在不同浓度下对鸡肝脏源性大肠杆菌的体外抑菌效果

由表4可知，供试大肠杆菌菌株只对1.00 g/mL浓度的败酱草和连翘，0.75 g/mL浓度以上的大青叶和黄芩表现为极敏。而对1.00 g/mL浓度的栀子、艾叶、百部、蒲公英和黄柏，0.50 g/mL浓度以上的大青叶和紫草，0.25 g/mL浓度以上的连翘，0.10 g/mL浓度以上的黄芩表现为高敏。而对1.00 g/mL浓度的夏枯草，0.75 g/mL浓度以上的栀子、百部和黄连，0.50 g/mL浓度的艾叶，0.25 g/mL浓度的大青叶，0.10 g/mL浓度以上的蒲公英、紫草和败酱草及0.05 g/mL浓度以上的黄芩和连翘表现为中敏。而对0.25 g/mL浓度的艾叶，0.10 g/mL浓度的大青叶和0.05 g/mL浓度的蒲公英、紫草和败酱草表现为低敏。而对贯众、鱼腥草和金银花及0.75 g/mL浓度的夏枯草，0.50 g/mL浓度的栀子、百部、黄连和黄柏及0.10 g/mL浓度的艾叶和0.05 g/mL浓度的大青叶均表现为耐药。

2.5 供试中草药对仔猪肠源性大肠杆菌的抑菌效果 详见表5。

表5 15味中草药对仔猪十二指肠源性大肠杆菌的体外抑菌效果观察

由表5可知，供试大肠杆菌菌株只对1.00 g/mL浓度的大青叶、连翘、金银花及0.50 g/mL浓度以上的败酱草表现为极敏。对1.00 g/mL浓度的艾叶和蒲公英，0.75 g/mL浓度以上的栀子、大青叶和紫草，0.50 g/mL浓度以上的金银花、黄芩及0.25 g/mL浓度的败酱草、0.10 g/mL浓度以上的连翘表现为高敏。表现为中敏的药物有1.00 g/mL浓度的贯众和黄柏，0.75 g/mL浓度以上的百部、黄连和夏枯草，0.50 g/mL浓度的栀子和大青叶，0.25 g/mL浓度以上的蒲公英，0.10 g/mL浓度以上的黄芩和0.05 g/mL浓度以上的紫草、连翘、败酱草和金银花。表现为低敏的药物有0.75 g/mL浓度的艾叶，0.50 g/mL浓度的黄连，0.25 g/mL浓度的大青叶和0.10 g/mL浓度以下的蒲公英。表现为耐药的中草药有鱼腥草，0.75 g/mL浓度以下的贯众和黄柏，0.50 g/mL浓度以下的艾叶、夏枯草和百部，0.25 g/mL浓度以下的栀子和黄连，0.10 g/mL浓度以下的大青叶和0.05 g/mL浓度的黄芩。

3 小结与讨论

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐青霉素链球菌(PRP)已成为目前一些大型综合医院常见的院内感染菌，常表现为多重耐药性［5］。大肠杆菌是兽医临床常见的病原菌之一，由于该病一直依靠抗生素进行控制，耐药性越来越严重。为保证食品安全和生产效益，不用抗生素提高畜禽的抗病力不仅有利于动物健康、动物福利和生产效率，而且还可提高畜禽生产中的微生物安全。

本试验所选用的15味中草药为临床用于疾病防治的常用药物，经实验室前期验证，在疾病防治方面疗效确切，如用于奶牛乳房炎、仔猪腹泻及鸡葡萄球菌病等的防治方面，都显示了明显效果。由于中草药天然性和多能性的特点，在临床应用中一方面对相关疾病具有防治作用，同时又可调控机体的平衡，起到调节脏腑和阴阳平衡的作用，有助于提高畜禽自身的免疫力和生产力，因此利用中草药防治动物疾病，已成为当前畜牧兽医界的一个热点课题。

本次试验结果显示，不同种类中草药对不同菌株的抗菌效果不同，且对G+菌株和G－菌株的抑菌效果有明显差异，百部、金银花、鱼腥草、连翘、黄柏、紫草、大青叶等7味中草药对G+菌株抑菌效果明显，败酱草、大青叶、金银花和连翘则对大肠杆菌具有明显的体外抑菌效果。这可能与药物本身所含成分有关外，药物的作用机制(如影响细菌细胞壁或抑制细菌内某些酶，如DNA聚合酶、RNA聚合酶等的活性)发挥了重要作用。在15味中草药中，对大肠杆菌的抑菌效果较差的贯众和鱼腥草，对G+则具有明显的抑菌效果，出现这种结果的原因可能与细菌自身所含有的脂多糖、磷脂、蛋白质和脂蛋白复合物组成的三层外胞壁结构有关。因此，在中草药饲料添加剂的配伍方面，除对分离菌株进行生化分析外，还应进行药物敏感性的试验研究。

［1］陈泳，李洪，张丽华，等.3594株病原菌的分布及耐药性研究［J］.中国医院用药评价与分析，2011，11(4):350－352.

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