新制柴连汤加减治疗兔细菌性角膜炎的实验研究

许 静 赵海霞

细菌性角膜炎是由细菌感染引起的，以角膜上皮缺损及缺损区下角膜基质坏死为表现的化脓性角膜炎，是主要的致盲眼病之一〔1〕。造成角膜炎的细菌种类众多，其中以微球菌科（主要是葡萄球菌属和微球菌属）、链球菌属、假单胞菌属及肠杆菌科为主，约87%的细菌性角膜炎是由上述4类细菌所致〔2-4〕。本病属于中医“凝脂翳”范畴，多因黑睛表层损伤，风热邪毒乘隙袭入，若素有漏睛，邪毒已有蕴伏，或因脏腑蕴热，火热上攻，更易发病，为眼科疑难重病之一〔5〕。本文以兔为实验模型，研究新制柴连汤煎剂配合抗生素滴眼液治疗细菌性角膜炎的效果。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康无眼疾的成年新西兰白兔40只（80只眼），体重2～3 kg，雌雄不限。采购自内蒙古医学院附属医院动物实验中心，实验期间动物分笼饲养，环境良好，饮食正常。

1.2 实验试剂

金黄色葡萄球菌菌种（ATCC25923），菌种浓度2.5×1010CFU/ml（购自南京便诊生物有限公司，产品货号：BKTW 23103）；荧光素染色条（购自山东博士伦福瑞达制药有限公司，国药准字H20093096）。

1.3 实验药品和主要仪器

中药选择新制柴连汤加减〔6-7〕：柴胡 10 g、黄芩10 g、黄连 5 g、 赤芍 10 g、蔓荆子 10 g、栀子 10 g、龙胆 5 g、木通 5 g、甘草 5 g、荆芥 5 g、防风 5 g、金银花15 g、蒲公英 15 g、连翘 10 g、白芷 10 g（本院中药房）。0.3%氧氟沙星滴眼液（山东博士伦福瑞达制药有限公司），0.3%妥布霉素滴眼液（安徽华源医药股份有限公司），0.5%丁卡因滴眼液（本院）。YZ2手持眼科裂隙灯（河北康明医疗器械贸易有限公司）。

1.4 动物模型的制备

实验兔予耳缘静脉注射盐酸氯氨酮（0.2 ml/kg）麻醉，眼部予0.5%丁卡因滴眼液表面麻醉，待角膜反射消失后，置开睑器开睑，用4号半针头将0.1 ml菌种浓度为2.5×1010CFU/ml的金黄色葡萄球菌菌液自角膜近中央处注入角膜实质层内，造成约4～5 mm的白色菌斑（造模成功的标志〔8-9〕）。所有实验兔双眼进行实验。

1.5 分组处理

接种后的兔随机分成2组：中药治疗组20只（40只眼），对照组20只（40只眼），分笼饲养。造模24 h后给药。中药治疗组给予0.3%氧氟沙星滴眼液、0.3%妥布霉素滴眼液交替点眼，每天5～6次，每次1～2滴，同时给予新制柴连汤加减煎剂，取汁30ml，早晚分2次灌服〔10〕。对照组给予0.3%氧氟沙星滴眼液和0.3%妥布霉素滴眼液交替点眼，每天5～6次，每次1～2滴，同时取30 ml生理盐水，早晚分2次灌服。

1.6 观察指标与疗效评价

于造模后24 h，以及治疗后第3、9、14天进行裂隙灯检查并做评分。采用McNeill[11]角膜病变程度分级方法记录病变程度。0分：角膜实质层透明清晰，光泽无混浊；1分：角膜轻度水肿，虹膜纹理清晰可见。2分：角膜水肿，混浊，虹膜纹理仍可窥见；3分：角膜明显混浊，但可见到瞳孔缘，角膜表面见少量散在飘浮脓液；4分：角膜严重混浊，前房结构无法窥见，前房及层间积脓。

疗效标准：治疗后第14天进行疗效评价。参照《中医病证诊断疗效标准》〔12〕拟定疗效标准。治愈：流泪畏光等症状消失，角膜溃疡愈合，荧光素染色阴性。好转：症状减轻，角膜溃疡面变小变浅，荧光素染色缩小＞2/3。无效：治疗后病情无变化或加重。

1.7 统计学分析

采用SPSS 13.0统计软件进行分析，角膜评分数据用均数±标准差表示，两样本均数比较用t检验，疗效比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组治疗前后角膜评分比较

造模24 h及治疗后第3天，2组角膜评分接近，差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后第9天和第14天，中药治疗组角膜评分均小于对照组，2组差异有统计学意义（P＜0.05）（表 1）。

表1 2组细菌性角膜炎兔不同时间角膜病变程度评分比较（±s）

表1 2组细菌性角膜炎兔不同时间角膜病变程度评分比较（±s）

注：与对照组比较，①P＜0.05（两独立样本t检验）

不同时间点角膜病变程度评分造模后24 h治疗第3天 治疗第9天 治疗第14天中药治疗组 40 3.1±0.72 2.9±0.63 1.86±0.79① 0.78±0.98①对照组 40 3.2±0.76 2.95±0.60 2.13±0.79 1.5±1.38组别 眼数/只

2.2 2组疗效比较

中药治疗组：治愈32只眼，好转6只眼，无效2只眼，总有效率95%；对照组：治愈28只眼，好转4只眼，无效8只眼，总有效率80%，2组差异有统计学意义（χ2=4.114，P=0.044）。

3 讨论

细菌性角膜炎是一种常见的严重威胁视力的角膜疾病，发病急、进展快、来势猛、变化多端，如不能进行及时有效的治疗，可发生角膜溃疡穿孔，甚至眼内感染，最终眼球萎缩〔13〕。虽然广谱抗菌药物对细菌性角膜炎有较好的疗效，但由于耐药菌株逐年增多，临床上细菌培养及药敏试验相对滞后，往往延误治疗，使感染得不到有效控制，导致病情进一步发展〔14〕。常见的致病菌中，葡萄球菌属引起的细菌性角膜溃疡较多，其中以表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌最为多见〔15〕。金黄色葡萄球菌在葡萄球菌属中致病力最强，属凝固酶阳性葡萄球菌，产生金黄色色素，能分解甘露醇，主要通过外毒素致病〔16-17〕；致病力取决于其产生毒素和酶的能力，也与入侵细菌的毒力和数量有关，可产生血浆凝固酶、溶血毒素、杀白细胞素等。金黄色葡萄球菌可见于正常结膜囊，在正常免疫情况下暂时存在，当角膜上皮有损伤或因其他疾病等原因使机体抵抗力降低时，可侵入角膜使局部感染。临床症状一般为眼痛、畏光、异物感、结膜充血，分泌物增多等。角膜溃疡多呈孤立的圆形或椭圆形，灰白或奶白色外观，一般溃疡比较浅表，与周围正常组织的边界比较清楚，水肿与浸润程度较轻，可以引起轻中度的前房反应。

新制柴连汤出自清代黄耐庵编著的《眼科纂要》，为祛风清热之良方，方中加入金银花、蒲公英、白芷、连翘，则泻火解毒效果更佳。《原机启微》认为“翳犹疮也”，治疗当以清热解毒退翳医疮为法。本实验中，根据角膜注射细菌的造模方法，应属于凝脂翳病因中所讲的黑睛表层损伤，风热邪毒乘隙袭入；又因其发病时间短，病位较浅，依据中医辨证论治，应为风热表证，治宜驱风清热解毒，故选用新制柴连汤加减方。

方中柴胡、防风、荆芥、蔓荆子祛风散邪止痛，黄连、黄芩、栀子、龙胆、蒲公英清肝泻火退赤，苦寒清热解毒，泻三焦之火而解毒疗疮；赤芍配木通清热活血、退赤止痛，与疮家圣药连翘合用，清热解疮毒效力更佳，且栀子具有降温消炎止痛，止血等作用〔18〕；白芷、防风祛风散邪，退翳明目，取“火郁发之”之意，且白芷有较好的止痛、止泪作用，尚有疗疮之效〔19〕；甘草清热解毒，调和诸药。综合全方，共奏泻火解毒、疏风散热利湿之功。现代药理研究表明，金银花、蒲公英、黄连、黄芩、栀子、连翘、赤芍等具有抗病原体作用，对多种致病菌有抑制或杀灭作用，其中金银花、黄连、黄芩、连翘等还具有抗毒素作用，白芷、防风、甘草亦具有抗菌作用〔20〕，金银花、黄连、黄芩、连翘、甘草等具有调节免疫功能的作用。

本实验的结果显示，新制柴连汤加减煎剂配合抗生素滴眼液治疗细菌性角膜炎，能有效缓解症状，并能有效促使炎症反应减轻，相对单纯抗生素治疗，可以缩短溃疡愈合时间，缩短病程，提高疗效，其治疗效果明显优于对照组。需要说明的是：①该方用于由火热邪毒导致的风热表证型的角结膜炎应该更为合适；②本实验研究仅研究了针对金黄色葡萄球菌性角膜炎的效果，对于其它致病菌导致的角膜炎尚缺乏实验依据；③方剂中的有效成分及杀菌抑菌的机理还不清楚。实验中的不足，还有待于进一步地研究来完善。

[1] 惠延年.眼科学[M].北京：人民卫生出版社，2001：82.

[2] 梁艳闯，王智群，李然，等.细菌性角膜炎病原学及耐药性分析[J].眼科研究，2007，25（4）：306-307.

[3] 刘祖国.眼表疾病学[M].北京：人民卫生出版社，2003：369-381.

[4] 朱志忠.实用眼表病学[M].北京：北京科学技术出版社，2004：84-94.

[5] 李强，张友胜.中医药治疗细菌性角膜炎研究进展[J].中国中医药信息杂志，2005，12（12）：104-105.

[6] 曾庆华.中医眼科学[M].北京：中国中医药出版社，2006：165.

[7] 侯家玉.中药药理学[M].北京：中国中医药出版，2001.

[8] 薛亚光，孙玉鸿，李树民.大蒜素滴眼液对家兔细菌性角膜炎的影响[J].黑龙江医药科学，2009，32（3）：37-38.

[9] 周玲生，周路坦.豚鼠真菌性角膜炎模型的建立及病理观察[J].眼科新进展，2010，1（1）：28-30.

[10] 刘亚男.中西医结合治疗细菌性角膜炎36例[J].河北中医，2009，31（8）：23-24.

[11] McNeill JI，Kaufman HE.Local antiviral in a herpes simplex stromal keratitis model[J].Arch Ohthalmol， 1979， 97（4）：727-729.

[12] 国家中医药管理局.中医病证诊断疗效标准[M].南京：南京大学出版社，1994：103.

[13] 刘中文，杨涛，谭洪辉.中西医结合治疗细菌性角膜炎[J].中国中医现代远程教育，2008，6（6）：522-523.

[14] 秦士英，钟新娜.龙胆泻肝汤加减治疗角膜溃疡病[J].上海中医药杂志，2002，8（12）：35-36.

[15] Wu PZ，Zhu H.Comparison of potential pathogenic traits of staphylococci thatcontribute to co meal ulceration and inflammation[J].Oust N Z J Ophthalmology， 2005， 27（3-4）： 234-236.

[16] O’Callaghan RJ，Allegan MC，Moreau JM，et al.Specific roles of alpha-toxin andbeta-toxic during staphylococcus aurous corneal infection[J].Infect Immune， 2004， 65（5）：1571.

[17] OmuraS，Morimoto S.Research and development of clarithromycin[J].Yakugaku Zasshi， 2003， 112（9）： 593-614.

[18] 周素文，肖文华，周大庆，等.水栀类与山栀类栀55.

[19] 侯家玉.中药药理学[M].北京：中国中医药出版社，2001.

[20] 李宁泽，苏莲杰，苏云明，等.散翳睛明液治疗病毒性角膜炎的急性毒性试验[J].哈尔滨医科大学学报，1999，33（2）：11.