青年乳腺癌中XIAP、Smac、Caspase-3的表达及其与HER2的相关性研究

刘志英，肖 刚，刘铁菊

（1.河北省唐山市妇幼保健院普外科，河北唐山063000；2.天津医科大学病理教研室，天津300070）

青年乳腺癌中XIAP、Smac、Caspase-3的表达及其与HER2的相关性研究

刘志英1，肖 刚1，刘铁菊2

（1.河北省唐山市妇幼保健院普外科，河北唐山063000；2.天津医科大学病理教研室，天津300070）

乳腺肿瘤；诊断；免疫组织化学

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。一般认为35岁以下青年乳腺癌患者在生物学行为及预后方面不同于其他年龄段患者，因此将之定义为青年乳腺癌［1-2］。作者对本院近年来收治的35岁以下乳腺癌病例进行回顾性分析，重点分析凋亡效应因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、X连锁凋亡抑制蛋白（X-1inked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）及其抑制因子第二个线粒体衍生的半胱天冬蛋白酶激活剂（second mitochon-driaderived activator of caspase，Smac）的表达情况及其与人表皮生长因子2（human epiderma1 growth factor receptor 2，HER2）过表达的关系，从细胞凋亡的角度阐述青年乳腺癌的分子生物学特征，以期为青年乳腺癌的诊断和治疗提供新的靶点和思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料：河北省唐山市妇幼保健院2000年1月—2007年1月共收治≤35岁青年乳腺癌32例，均为女性，年龄23～35岁，平均31.8岁，均由病理证实。病理类型，浸润性导管癌25例，浸润性小叶癌6例，典型髓样癌1例。术前均未接收放化疗。以同期住院≥40岁的乳腺癌中随机抽取的44例作为对照组，年龄40～73岁，平均52.1岁。

1.2 主要试剂：试验用的XIAP、Smac、Caspase-3兔抗人单克隆抗体及免疫组化试剂盒均购自上海天呈生物用品超市，HER2鼠抗人单克隆抗体及试剂盒购自福建迈新生物公司。

1.3 主要仪器与器材：超净工作台（苏州涂化设备公司）；微波炉（松下公司）；冰箱（海尔公司）；显微镜（日本NIKON公司）。

1.4 试验方法：采用免疫组织化学SP法，石蜡切片，常规脱腊至水，用3%的H2O2阻断内源性过氧化物酶10min，枸橼酸盐抗原热修复，小牛血清封闭10min，加入一抗HER2为即用型试剂，XIAP、Smac、Caspase-3的稀释浓度分别为1∶200、1∶100、1∶100。4℃孵育过夜，加入二抗温育20min（室温），链亲合素-过氧化物酶溶液温育30min（室温），DAB显色15min，苏木素对比染色后，脱水，透明，封片。用已知阳性标本切片和PBS分别做阳性和阴性对照。

1.5 统计学方法：应用SPSS13.0软件包进行数据分析，计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验，相关性采用Spearman等级相关处理。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 结果判断：所有免疫组织化学阳性均呈棕色显色，HER2阳性物定位于细胞膜及细胞浆上。Caspase-3以胞浆或胞核染成棕黄色为阳性表达，Smac抗原阳性反应为位于细胞质内和（或）细胞膜上的棕黄色均匀细颗粒，XIAP染色以细胞质着色为阳性细胞判定标准。根据阳性细胞数和着色深度计分，每例均随机观察计数5个高倍视野（×400），确定其每个视野的阳性率，取平均数，按下列计分，阳性细胞≤5%为0分，＞5%～25%为1分，＞25%～50%为2分，＞50%～75%为3分，＞75%为4分。阳性细胞表达的着色深度，基本不着色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。将2项积分相乘，≥1为阳性，＜1为阴性。

2.2 XIAP、Smac、Caspase-3表达：32例青年乳腺癌组中XIAP阳性表达25例（78.1%），Smac阳性表达11例（34.4%），Caspase-3阳性表达10例（31.3%）；44例对照组中XIAP阳性表达24例（54.5%），Smac阳性表达27例（61.4%），Caspase-3阳性表达25例（56.8%）。2组阳性表达差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 2组XIAP、Smac、caspase-3表达比较（例数，%）

2.3 XIAP、Smac、caspase-3表达与HER2过表达的相关性：青年乳腺癌XIAP表达与HER2过表达呈正相关（rs=0.70，P＜0.01），Smac、Caspase-3表达与HER2过表达无相关性（rs=0.12、0.14，P＞0.05）。

3 讨 论

XIAP作为一种细胞凋亡抑制蛋白，它不仅抑制Caspases的活性使细胞凋亡受阻，同时还调节着细胞分裂、细胞周期及信号传导等多个重要环节，与肿瘤的发生发展关系密切［3］。在已经发现的凋亡抑制蛋白家族的成员中，它被认为是作用最强的一种，与多种恶性肿瘤的发生发展高度相关。Smac是一种可以减弱XIAP功能的蛋白质［4］，能消除XIAP对Caspases的抑制作用而激活Caspases酶原，同时增加Caspases酶的活性。Caspase-3在细胞凋亡中处于核心位置，其高表达可引起细胞的凋亡，被称为死亡蛋白。XIAP的BIR结构又是Caspase和Smac结合的结构基础［5］。因此，XIAP、Smac和Caspase-3在细胞凋亡的共同途径中有着极其重要的作用。

本研究结果显示，青年乳腺癌和中老年乳腺癌XIAP阳性率分别为78.1%（25/32）和54.5%（24/ 44），Smac阳性率分别为34.4%（11/32）和61.4% （27/44），Caspase-3阳性率分别为31.3%（10/32）和56.8%（25/44），青年乳腺癌XIAP表达明显高于中老年乳腺癌，Smac和Caspase-3表达明显低于中老年乳腺癌，差异有统计学意义（P＜0.05）。XIAP、Smac和Caspase-3的表达异常可能在癌细胞对抗各种凋亡诱导因素、拮抗癌细胞凋亡和癌细胞增殖过程中发挥重要作用，从而有助于青年乳腺癌这一特殊类型乳腺癌的发生和发展。

本研究还发现XIAP表达与HER2过表达存在正相关性，提示HER2基因对XIAP表达可能存在正反馈调节，HER2表达增加直接或间接引起XIAP的表达增加，从而拮抗细胞的凋亡，促进青年乳腺癌的发生发展及恶性增殖。

总之，研究XIAP、Smac和Caspase-3在青年乳腺癌中的表达不但对青年乳腺癌患者的预后有重要的参考价值，而且也为寻找青年乳腺癌的发病机制、改进治疗方法提供有益的帮助。

【参考文献】

［1］ 季永领，杜向慧.青年乳腺癌的研究进展［J］.中国癌症防治杂志，2010 2（3）：244-246.

［2］ COLONNA M，DELAFOSSE P，UHRY Z，et a1.Is breast cancer incidence increasing among young women？An ana1ysis of the trend in France for the period 1983-2002［J］.Breast，2008，17（3）：289-292.

［3］ WANG ZH，CHEN H，GUO HC，et a1.Enhanced antitumor efficacy by the combination of emodin and gemcitabine against human pancreatic cancer ce11s via downregu1ation of the expression of XIAP in vitro and in vivo［J］.Int J Onco1，2011，39（5）：1123-1131.

［4］ YANG D，ZHAO Y，LI AY，et a1.Smac-mimetic compound SM-164 induces radiosensitization in breast cancer ce11s through activation of caspases and induction of apoptosis［J］.Breast Cancer Res Treat，2012，133（1）：189-199.

［5］ GONZÁLEZ-LÓPEZ M，WELSH K，FINLAY D，et a1.Design，synthesis and eva1uation of monova1ent Smac mimetics that bind to the BIR2 domain of the anti-apoptotic protein XIAP［J］.Bioorg Med Chem Lett，2011，21（14）：4332-4336.

（本文编辑：赵丽洁）

R737.9

B

1007-3205（2012）10-1214-03

2012-02-03；

2012-05-26

刘志英（1972-），女，河北滦县人，河北省唐山市妇幼保健院副主任医师，医学学士，从事乳腺疾病诊治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.10.042