胃癌前病变内镜活检组织γH2AX蛋白的表达及意义

贾金海，李 勇，张晓琳

（1.河北医科大学门诊部，河北石家庄 050017；2.河北医科大学第四医院胸外科，河北石家庄 050011；

3.河北医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室，河北石家庄 050017）

·论 著·

胃癌前病变内镜活检组织γH2AX蛋白的表达及意义

贾金海1，李 勇2，张晓琳3*

（1.河北医科大学门诊部，河北石家庄 050017；2.河北医科大学第四医院胸外科，河北石家庄 050011；

3.河北医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室，河北石家庄 050017）

目的探讨胃癌前病变内镜活检组织γH2AX蛋白的表达及意义。方法应用流式细胞技术检测53例患者胃癌前病变组织中γH2AX蛋白的表达情况。结果肠型化生和异型增生组织γH2AX蛋白的相对含量高于正常组织（P＜0.01）；异型增生组织γH2AX蛋白的相对含量高于肠型化生组织（P＜0.05）。结论γH2AX蛋白在胃癌前病变组织中的表达反映了胃黏膜上皮细胞发生DNA双链断裂的情况，可能与胃癌前病变演变成胃癌的几率大小有关。

胃肿瘤；流式细胞术；DNA

胃癌（gastric carcinoma）是我国最常见的恶性肿瘤之一［1］。各种环境因素（如紫外线、活性化学物质、电离辐射等）和机体代谢产物（如活性氧介质、错误复制的DNA等）均可诱发多种形式的DNA损伤，最终导致胃癌等恶性肿瘤的发生。DNA双链断裂（double strand break，DSB）是最严重的DNA损伤之一，而磷酸化的H2AX（即γH2AX）可作为判断早期DSB的金标准［2-3］。本文应用流式细胞技术，研究分析了γH2AX蛋白在胃癌前病变组织中的表达和意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料：所有活检标本均取自河北医科大学第四医院胃镜室并经病理证实，共53例，其中肠型化生18例，异型增生23例，癌前病变旁的正常胃黏膜12例。年龄35～69岁，平均50.2岁。采集的新鲜标本即刻用70%酒精固定，4℃保存。

1.2 主要仪器和试剂：FACS-420型流式细胞分析仪购自美国BD公司。小鼠抗人γH2AX单克隆抗体和FITC标记山羊抗小鼠IgG抗体均购自Santa Cruz公司。

1.3 流式细胞分析：生理盐水反复冲洗固定后的标本，搓网法制备单细胞悬液，小鼠抗人γH2AX单克隆抗体（1∶1 000）孵育细胞，37℃水浴30min，离心洗涤，异硫氰酸荧光素标记山羊抗小鼠IgG抗体（1∶500）进行免疫染色，37℃水浴30min，离心洗涤，400目筛网过滤，上机检测，检测前用鸡血红细胞作为标准样品调整流式细胞分析仪荧光检测变异系数值在5%以内。

1.4 γH2AX表达的相对含量分析：采用美国BD公司生产流式细胞仪检测，以荧光指数（fluorescence index，FI）表示蛋白表达的相对含量［4］。FI=（胃癌前病变组织γH2AX的平均荧光强度-对照样品的平均荧光强度）/（正常组织γH2AX的平均荧光强度）。

1.5 统计学方法：应用SPSS16.0软件进行统计学处理，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

流式细胞检测结果显示，肠型化生和异型增生γH2AX的相对含量均高于正常组织，差异有统计学意义（P＜0.01）。与小肠型和结肠型肠型化生组织相比，各型异型增生组织的γH2AX相对含量均较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。在肠型化生组织中，小肠型肠型化生的γH2AX相对含量较结肠型低，差异有统计学意义（P＜0.01）。在各异型增生组织中，重度异型增生的γH2AX相对含量最高，显著高于中度异型增生（P＜0.01）和轻度异型增生（P＜0.01）；轻度异型增生的γH2AX相对含量与中度异型增生相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 γH2AX在胃癌前病变组织和正常组织中的相对含量Table 1 The relative amount ofγH2AX in gastric cancerprecancerous lesions tissue and normal tissue

*P＜0.01 vs normal group #P＜0.05 vs atypical hyperplasia△P＜0.01 vs colon type ☆P＜0.05 vs severe type by t test

3 讨 论

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一。全球2/3的胃癌病例分布在发展中国家，尤以中国、日本及其他东亚国家高发。在我国，胃癌约占全部肿瘤的1/3和消化系统肿瘤的1/2［5］。过去几十年间，由于科技进步和防治力度的加大，胃癌的病死率虽有所降低，但仍居高位，病死率更是排在恶性肿瘤死亡谱的第2位，严重威胁着人类健康［6-7］。在我国，胃癌的发病率和病死率更高，居各种恶性肿瘤之首［8］。迄今为止，手术仍是治疗胃癌的主要手段，全球胃癌治疗的最佳临床证据表明，胃癌的预后直接与胃癌确诊时的分期有关。然而，胃癌的早期诊断率极低，大部分胃癌在确诊时已处于中晚期，手术后的5年生存率只有7%～34%，提高胃癌的防治水平已刻不容缓［9］。

胃癌的发生是一个多步骤、多因素进行性发展的过程。正常情况下，基因组稳定性维持着胃黏膜上皮细胞增殖、分化和凋亡的动态平衡。然而，当机体受到某些物理、化学或自身因素的刺激时，胃黏膜上皮细胞就可能发生各种形式的DNA损伤，DNA损伤如果得不到及时修复，就会导致细胞增殖和凋亡的失衡，直至发展到胃癌前病变甚至胃癌。胃癌前病变包括肠型化生和异型增生，极易演变成胃癌。

众所周知，DNA双链断裂（double strand break，DSB）是最严重的DNA损伤形式之一［3］，而组蛋白H2AX是体内DSB的生物标志物，γH2AX在细胞内的蛋白表达可辅助判断DSB的存在［2］。本实验流式细胞检测结果表明，肠型化生组织和异型增生组织的γH2AX相对含量均高于正常胃黏膜组织（P＜0.01），这提示胃癌前病变组织中发生了DSB。结果还表明，结肠型肠化生较小肠型肠化生的γH2AX相对含量多（P＜0.01），而各型异型增生组织又显著高于肠型化生组织（P＜0.05），这一方面提示结肠型肠化生组织较小肠型肠化生组织发生了较重的DSB，异型增生组织较肠化生组织发生了较重的DSB；另一方面是否也提示组织中γH2AX相对含量的多少与其发生癌变的几率有关，还有待做进一步研究。

总之，检测γH2AX表达变化可准确判断胃癌前病变组织中发生DSB的严重程度，及时警示患者积极采取预防措施，如多吃新鲜蔬菜和水果、少吃腌腊制品、根治幽门螺杆菌等，努力使癌前病变发生逆转，从而减少其演变成胃癌的几率。

［1］ 赖邻宁，马小南，杜敏，等.替吉奥一线治疗老年复发或转移胃癌的临床研究［J］.实用临床医药杂志，2011，15（19）：49-58.

［2］ TAKAHASHIA，MORIE，OHNISHI T.The foci of DNA double strand break-recognition proteins localizewith gammaH2AX after heat treatment［J］.JRadiat Res（Tokyo），2010，51（1）：91-95.

［3］ BAUERSCHMIDT C，ARRICHIELLO C，BURDAKROTHKAMM S，et al.Cohesin promotes the repair of ionizing radiation-induced DNA double-strand breaks in replicated chromatin［J］.Nucleic Acids Res，2010，38（2）：477-487.

［4］ 江克翔.Claudin-7与E-cadherin在肝癌中的表达及相关性研究［J］.北京医学，2011，33（3）：252-253.

［5］ 杨志刚.胃癌的病理学新进展［J］.华北煤炭医学院学报，2011，13（3）：335-336.

［6］ JEMAL A，SIEQEL R，WARD E，et al.Cancer statistics［J］.CA Cancer JClin，2009，59（4）：225-249.

［7］ 衣玉丽，熊建萍，孙哲，等.低剂量5-Fu静脉泵入治疗老年晚期胃癌疗效观察［J］.实用临床医药杂志，2011，15（3）：94-95.

［8］ 顾本兴，孙晓南.进展期胃癌治疗进展［J］.新乡医学院学报，2010，27（1）：93-96.

［9］ 邓薇，沈琳.胃癌靶向药物治疗进展［J］.中国新药杂志，2010，19（17）：1531-1538.

（本文编辑：刘斯静）

THE SIGNIFICANCE OFγH2AX EXPRESSION IN GASTRIC CANCER PRECANCEROUS LESIONS COLLECTED BY ENDOSCOPIC BIOPSY

JIA Jinhai1，LIYong2，ZHANG Xiaolin3*
（1.Clinic of HebeiMedical University，Shijiazhuang 050017，China；2.Department of Cardiothoracic Surgery，the Fourth Hospital of HebeiMedical University，Shijiazhuang 050011，China；3.Departmentof Epidemiology and Health Statistics，the School of Public Health，HebeiMedical University，Shijiazhuang 050017，China）

ObjectiveTo investigate the significance ofγH2AX expression in gastric cancer precancerous lesions collected by endoscopic biopsy.MethodsThe expression ofγH2AX was detected in gastric cancer precancerous lesions of 53 patients by flow cytometry.ResultsThe expression of γH2AX in intestinalmetaplasia tissue and atypical hyperplasia tissue was significantly higher than that of normal tissue（P＜0.01）.At the same time，the expression ofγH2AX in atypical hyperplasia tissue was significantly higher than that of intestinalmetaplasia tissue（P＜0.05）.ConclusionThe expression of γH2AX in gastric cancer precancerous lesions reflects the information of double strand breaks in gastric epithelial cells，which may be related to the probability of gastric cancer precancerous lesions evolved into gastric cancer.

stomach neoplasms；flow cytometry；DNA

R735.2

A

1007-3205（2012）03-0249-03

2011-12-09；

2012-02-29

河北省卫生厅医学科学研究重点课题（20100033）

贾金海（1976-），男，河北曲周人，河北医科大学门诊部主治医师，医学硕士，从事肿瘤防治研究。

*通讯作者。E-mail：lukyjia@163.com

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.03.001