乳腺癌组织中NF-κB和Galectin-3的表达及意义

郭德超，安慧敏，孙广正，张海峰，戴华卫，夏 康

（1.温州医学院附属第三医院普外科，浙江瑞安 325200；2.温州医学院附属第三医院病理科，浙江瑞安 325200）

·论 著·

乳腺癌组织中NF-κB和Galectin-3的表达及意义

郭德超1，安慧敏2，孙广正1，张海峰1，戴华卫1，夏 康2

（1.温州医学院附属第三医院普外科，浙江瑞安 325200；2.温州医学院附属第三医院病理科，浙江瑞安 325200）

目的探讨核转录因子-κB（nuclear transcription factor kappa B，NF-κB）和半乳糖凝集素3（Galectin-3）基因在乳腺癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测40例乳腺癌组织中NF-κB和Galectin-3的表达情况。结果乳腺癌组织中NF-κB和Galectin-3的阳性表达率分别为70.0%和55.0%；NF-κB、Galectin-3与乳腺癌淋巴结转移呈正相关（r=2.497，P＜0.05）。结论乳腺癌中NF-κB、Galectin-3基因的表达呈正相关，在乳腺癌的发生发展中具有重要作用。

乳腺肿瘤；NF-κB；半乳糖凝集素-3

乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一，近年来呈发病率逐年上升和年轻化的趋势。因此，关于乳腺癌的研究越来越受到世人的瞩目。大量研究认为，核转录因子-κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）是一种广泛存在于体内的细胞转录因子，在多种肿瘤组织内呈活化状态，可调控多种实体瘤（肝癌、结肠癌等）的MDR1基因表达，抑制NF-κB的活性可以抑制多种肿瘤MDR1基因的转录活性减少P糖蛋白的表达，从而提高抗肿瘤药物在细胞内的浓度，增强化疗药物对耐药细胞的抑制作用［1］。Galectin-3在多种肿瘤中均有表达，且浓度的高低与肿瘤的发生发展和转移有关。通过免疫荧光法测定正常人与肿瘤患者血清中的Galectin-3，发现肿瘤患者（胃肠道肿瘤、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤）明显高于正常人群，已经发生转移的患者又高于局限性肿瘤患者［2-3］。本研究采用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织中的NF-κB与Galectin-3的表达，并结合临床病理学特征分析其中乳腺癌发生发展中的作用及相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料：选择2007年6月—2010年12月温州医学院附属第三医院外科手术切除的乳腺癌患者40例，均为女性，年龄35～75岁，平均52.3岁；肿瘤大小＜2.0cm 13例，≥2.0cm 27例；TNM分期，Ⅰ期7例，Ⅱ期16例，Ⅲ期5例，Ⅳ期12例；组织学分级低分化3例，中分化4例，高分化33例；腋淋巴结转移阳性者27例。另取10例癌旁组织（距癌灶8～10cm），病理证实为非肿瘤组织作为对照。所有病例术前均未经任何针对肿瘤的治疗。

1.2 试剂：NF-κB鼠抗人多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。单克隆兔抗人Galectin-3抗体购自基因科技（上海）有限公司。

1.3 免疫组织化学染色：手术切除的组织标本常规固定后石蜡包埋切成4μm厚切片2张，依次经脱蜡、梯度水化、3%H2O2溶液室温下孵育5～10min、PBS振洗、微波抗原热修复、山羊血清封闭、PBS振洗、分别滴加鼠抗人NF-κB（1∶100）和Galectin-3（1∶100）单克隆抗体、湿盒内4℃孵育过夜。再用PBS振洗、滴加亲和素过氧化物酶复合物37℃湿育30min。最后用PBS振洗、DAB显色、苏木素复染、脱水、封片、显微镜下计数。用PBS代一抗作阴性对照。

1.4 结果判断：光镜下观察阳性细胞的数量和分布，随机计数5个高倍视野，求出平均每个高倍视野网格内阳性细胞百分率。NF-κB阳性表达为细胞浆，呈现棕黄色颗粒，Galectin-3阳性表达部位为细胞质，呈棕黄色。根据其表达率及染色强度分别记为阴性（-，无明显阳性表达细胞或阳性细胞面积＜10%，染色浅）；弱阳性（+，阳性表达细胞面积＞10%，但＜50%，染色较深）；强阳性（++，阳性表达细胞面积＞50%，染色深）。

1.5 统计学方法：应用SPSS 12.0统计软件进行数据分析，计数资料以百分率表示，采用χ2检验，相关性分析采用列联表资料的χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

癌组织中NF-κB与Galectin-3的表达与患者性别、年龄及孕激素受体（progesterone receptor，PR）等方面差异无统计学意义（P＞0.05）；在有淋巴结转移组，NF-κB和Galectin-3蛋白阳性表达率分别为88.9%和70.4%，而无淋巴结转移组阳性率仅为30.8%和23.1%，差异均有统计学意义（P＜0.01），在雌激素受体（estrogen receptor，ER）（+）表达组中，NF-κB和Galectin-3蛋白阳性表达率分别为81.0%和52.0%，而ER（-）表达组阳性率仅为47.4%和40.0%，差异均有统计学意义（P＜0.05）；在Her-2（+）组中，NF-κB和Galectin-3蛋白阳性表达率分别为68.2%和76.2%，而Her-2（-）组阳性率仅为33.3%和36.8%，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表1。NF-κB在乳腺癌组织中的阳性表达见图1、阴性表达见图2；NF-κB在临床分期方面差异无统计学意义（P＞0.05），Galectin-3在乳腺癌组织中随组织学分级的增高，蛋白表达率上升，差异有统计学意义（P＜0.01），Galectin-3在乳腺癌组织中的阳性表达见图3；本研究将40例乳腺癌按组织学分级分为2组，Ⅰ+Ⅱ为I组，Ⅲ为II组，随着组织学分级的增加，NF-κB和Galectin-3蛋白表达均呈上升趋势，差异有统计学意义（P＜0.05）。乳腺癌组织中NF-κB和Galection-3的阳性表达率分别为70.0%和55.0%，NF-κB和Galectin-3的表达情况呈正相关（r=2.497，P＜0.05），见表2。

表1 NF-κB和Galectin-3的表达与临床病理指标的关系Tab le1 Relationship between the expression of NF-κB，Galectin-3 and clinical pathological paramenters

Her-2：human epidermal growth factor receptorⅡ；ER：estrogen receptor；PR：progesterone receptor

图1 NF-κB在乳腺癌组织中的阳性表达（SP×400） Figure 1 Positive expression of NF-κB in breast cancer（SP×400）

图2 NF-κB在乳腺癌组织中的阴性表达（SP×400）Figure 2 Negative expression of NF-κB in breast cancer（SP×400）

图3 Galectin-3在乳腺癌组织的阳性表达（SP×400）Figure 3 Positive expression of Galectin-3 in breast cancer（SP×400）

表2 乳腺癌组织中NF-κB与Galectin-3关系的一致性检验Table 2 Consistency test of relationship between NF-κB and Galetin-3 in breast cancer tissue

3 讨 论

随着分子生物学和肿瘤学的飞速发展，人们发现NF-κB信号途径在肿瘤发生发展的各个环节中扮演重要角色，而其在肿瘤细胞凋亡中的作用尤为显著［4-7］。

NF-κB是一种分布和作用均十分广泛的真核细胞转录因子，属于NF-κB/Rel蛋白家族成员，能够与B淋巴细胞免疫蛋白κ轻链基因的增强子κB序列特异的结合。随后对NF-κB进行了广泛的研究，发现它能与多种细胞基因的启动子和增强子发生特异性结合，并促进相关基因的转录和表达，参与炎症反应、损伤刺激、免疫防御、细胞增殖和凋亡等过程。研究［8］证实，NF-κB在肿瘤生长机制过程的信息传递中起重要作用，与肿瘤的发生发展、浸润转移密切相关。

本研究以鼠抗人单克隆抗体特异性标记乳腺癌组织中的NF-κB蛋白的表达。NF-κB蛋白在乳腺癌组织中呈阳性表达，证明NF-κB中乳腺癌组织中存在过度活化的现象，并随着组织学分级的提高，阳性表达率增加，呈正相关，这提示NF-κB的高表达与乳腺癌的发生发展有密切关系。NF-κB蛋白在有无淋巴结转移组中的表达，差异有统计学意义，这与Hou等［9］的研究结果具有相似性。

Galectin-3是一种β-半乳糖苷结合的动物凝集素，为脊椎动物半乳糖凝集素家族中的一种亚型，人Galectin-3的相对分子质量为31 000，Galectin-3对β-半乳糖有特别的亲和力，可通过与特殊配体的反应发挥多种生物学效应。半乳糖凝集素在活化的巨噬细胞、嗜碱性细胞、上皮细胞及一些感觉神经元中表达最多。Galectin-3主要存在于细胞浆中，也可存在于细胞核、细胞表面或者细胞外［10］。Galectin-3能参与细胞生长，细胞与细胞之间、细胞与间质之间黏附，炎症反应，细胞凋亡，免疫调节及肿瘤细胞转移、浸润［11］。Galectin-3在有淋巴结转移组中的表达，明显高于在无淋巴结转移组中的表达，并随着组织学及临床分期的提高，阳性表达率增加，呈正相关。

总之，乳腺癌组织中NF-κB和Galectin-3的表达具有相关性，提示在乳腺癌的发生发展、肿瘤分化和淋巴结转移及评估预后中具有很大的潜在价值。

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（本文编辑：赵丽洁）

EXPRESSION OF NF-κB AND Galectin-3 AND THEIR CLINICAL SIGNIFICANCE IN BREAST CANCER

GUO Dechao1，AN Huimin2，SUN Guangzheng1，ZHANG Haifeng1，DAIHuawei1，XIA Kang2
（1.Department of General Surgery，the Third Affiliated Hospital ofWenzhou Medical College，Zhejiang Province，Ruian 325200，China；2.Department of Pathology，the Third Affiliated Hospital ofWenzhou Medical College，Zhejiang Province，Ruian 325200，China）

ObjectiveTo explore the expression of nuclear transcription factor-kappa B（NF-κB）and Galectin-3 in beast cancer and their significance.MethodsThe expression of NF-κB and Galectin-3 were determined with immunohistochemistry in 40 cases of breast cancer.ResultsThe positive expression rates of NF-κB and Galectin-3 in breast cancer tissues were 70.0%and 55.0% respectively.Overexpressions of NF-κB and Galectin-3 in breast cancer were related to lymph node metastasis（r=2.497，P＜0.05）.ConclusionThe expression of NF-κB in breast cancer tissues is correlated with Galectin-3 expression，and theymay play a very important role in the progress of breast cancer.

breast neoplasms；NF-kappaB；galectin-3

R737.9

A

1007-3205（2012）03-0275-04

2011-08-23；

2012-01-16

瑞安市科技局科研项目（20082104）

郭德超（1978-），男，吉林磐石人，温州医学院附属第三医院主治医师，医学硕士，从事胃肠道及乳腺肿瘤诊治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.03.009