山菠萝药材中总黄酮的含量测定※

黎永洁钟 鸣

山菠萝药材中总黄酮的含量测定※

黎永洁1钟 鸣2

目的建立紫外分光光度法测定山菠萝总黄酮的方法。方法采用紫外分光光度法，以芦丁为对照品，以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色剂，在波长 505nm 处对山菠萝药材中总黄酮进行含量测定。结果总黄酮在 0.025～0.124mg/ml范围内线性关系良好（r=0.9992）；该法的平均加样回收率为99.27%，RSD=0.83%（n=9）；山菠萝药材中总黄酮的平均含量为13.75mg/g，3批药材含量差异较大（RSD=8.77%，n=3）。结论紫外分光光度法简便快速，稳定可靠，适用于山菠萝中总黄酮的含量测定。

山菠萝；紫外分光光度法；总黄酮；含量测定

山菠萝（Pandanus odoratissimus）为露兜树科（Pandanaceae）植物露兜树（Pandanus tectorius Soland）的根部，广东、广西和云南均有出产，民间用于感冒发热、肾炎水肿、泌尿系统感染等病症的治疗[1]。目前国内外对山菠萝的化学成分以及质量控制方面的研究报道甚少，曲文浩等[2]对山菠萝的化学成分进行研究，从该植物的根及根茎乙醇提取物中分离得到四个甾体化合物。鉴于山菠萝具有潜在的药用价值，因此很有必要对山菠萝的化学成分等方面进行研究。笔者针对山菠萝化学成分进行预试验，发现山菠萝含有黄酮类化合物。众所周知，该类化合物具有广泛的生物活性和药理作用，包括抗心肌缺血及再灌注损伤、改善冠脉血流量、降低血脂、清除自由基、抗氧化、抗过敏、抗病毒等[3]，推测黄酮类成分可能与山菠萝的药理活性密切相关。为进一步研究该植物的黄酮类成分，本文采用紫外分光光度法测定山菠萝总黄酮的含量，该法稳定、简便、快速，为山菠萝的药材质量控制提供试验依据。

1 仪器与试药

Agilent 8453型可见-紫外分光光度计（Agilent公司）；BS1103电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；SB-4200DTS型超声波清洗仪（宁波新芝生物科技股份超声仪器有限公司）；LK-400B中药粉碎机（上海新诺仪器设备有限公司）。山菠萝（采于广西靖西县，鉴定为露兜树科 Pandanaceae植物露兜树 Pandanus tectorius Soland的根，批号分别为20100727、20101018、20110314）；芦丁对照品（供含量测定用，购于中国药品生物制品检定所，批号100080-200306）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1对照品溶液的制备称取经 120℃干燥至恒重的芦丁对照品约 12mg，精密称定，加甲醇适量使溶解，转移入50ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀，制成每1ml含芦丁0.248mg的对照品溶液。

2.1.2样品溶液的制备[4-5]取山菠萝干药材适量，粉碎，过2号筛，取2～3号筛之间的粉末约2g，精密称定，加95%乙醇25ml，水浴回流提取2次，每次1.5h，滤过，合并滤液，挥干，残渣加70%乙醇25ml使溶解，转移至分液漏斗中，加石油醚萃取3次（20ml/次）去除脂溶性杂质，将乙醇水溶液相转移至 50ml量瓶中，加70%乙醇定容至50ml，摇匀，即得。

2.2波长的选择吸取样品溶液1.00ml，加入5%亚硝酸钠溶液1.00ml，摇匀，加入10%硝酸铝溶液1.00ml，摇匀，加入4%氢氧化钠溶液2.00ml，以试剂为空白参比溶液，在400～800nm波长范围扫描络合物的吸收光谱。结果显示，络合物于505nm波长处有最大吸收，故测定波长定为505nm。

2.3标准曲线的绘制精密吸取芦丁对照液（0.248mg/ml）0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml分别置于 10ml量瓶中，加入 5%亚硝酸钠溶液1.00ml，摇匀，加入10%硝酸铝溶液1.00ml，摇匀，加入4%氢氧化钠溶液2.00ml，摇匀，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置10min，制得5份标准溶液。以试剂溶液作为空白对照，于505nm处测定吸光度。对吸光度（A）和标准溶液浓度（C，mg/ml）进行线性回归。回归方程为 A=8.0926 C-0.0058（r=0.9992），线性范围为0.025～0.124mg/ml。

2.4精密度试验精密吸取样品溶液1.00ml，置于10ml量瓶中，共6份，按标准曲线的绘制项下自“加入5%亚硝酸钠溶液”起，同法操作，测定吸光度，计算总黄酮含量。总黄酮含量为 0.060mg/ml，RSD=0.83%（n=6），表明该仪器精密度良好。

2.5稳定性试验精密吸取样品溶液1.00ml，置于10ml量瓶中，按标准曲线的绘制项下自“加入5%亚硝酸钠溶液”起，同法操作，分别于0、10、20、30、40和60min在505nm处测定吸光度。结果显示吸光度 RSD=0.66%（n=6），提示样品在 60min内稳定。

2.6重复性试验精密吸取同一批山菠萝药材粉末6份，按照2.1.2项下制备样品，分别取1.00ml，按标准曲线的绘制项下自“加入5%亚硝酸钠溶液”起，同法操作，在505nm处测定吸光度，依据吸光度计算出总黄酮含量。山菠萝中总黄酮含量平均值为15.01mg/g，RSD=0.95%（n=6）。

2.7加样回收率试验精密吸取已知总黄酮含量（15.01mg/g）山菠萝粉末约1g，共 9份，精密称定，分别加入芦丁对照品，按照2.1.2项下样品溶液的制备得到样品溶液，精密吸取样品溶液1.00ml，按标准曲线的绘制项下自“加入5%亚硝酸钠溶液”起，同法操作，在505nm处测定吸光度，并计算加样回收率。平均加样回收率为99.27%，RSD=0.83%（n=9），结果见表1。

表1 加样回收率实验结果（n=6）

2.8样品总黄酮的测定取不同批次的山菠萝粗粉约2g，平行2份，共6份，精密称定，按“2.1.2样品溶液的制备”项下制备样品液，分别精密吸取样品液1.0ml，置于10ml量瓶中，按标准曲线的绘制项下自“加入5%亚硝酸钠溶液”起，同法操作，测定吸光度，计算样品中总黄酮的含量，取平均值。不同批次的山菠萝中总黄酮的平均含量为 13.75 mg/g，结果见表2。

表2 山菠萝药材中总黄酮含量（n=3）

3 讨论

黄酮类化合物广泛存在于中草药中，并具有显著生物活性和药理作用，测定方法较多，有紫外可见分光光度法、比色法、差示分光光度法、双波长和导数分光光度法及色谱测定方法等[3]。本实验采用紫外可见分光光度法[6]测定山菠萝总黄酮含量的方法，以芦丁为对照品，以亚硝酸钠—硝酸铝—氢氧化钠作为显色剂，在样品溶液制备过程中，选用强亲脂性溶剂石油醚去除一些亲脂性的杂质，可以减少对测定的干扰。该法操作简便、快速、稳定、可靠，为进一步研究该植物成分与质量控制提供理论依据。本文选用的3批山菠萝药材均采自广西靖西县，在3个时间点（2010年7月27日、2010年 10月18日和2011年3月14日）采集，含测数据（见表 2）显示，10月份采集的山菠萝（批号20101018）中总黄酮稍高，3批含测数据结果差异较大（RSD=8.77%），提示采集时间影响总黄酮的含量。应进一步考察产地、采集时间对山菠萝总黄酮含量的影响。

[1]江苏新医学院.中药大辞典[M].下册.上海:上海人民出版社,1977:2738.

[2]曲文浩,王玉钰,王明时.山菠萝化学成分研究[J].中国药科大学学报,1990,21(1):51-52.

[3]田永利,许志宇,葛林,等.总黄酮类化合物含量测定方法和药理作用研究进展[J].河北医药,2010,32(5):2094-2096.

[4]童声,范杰平,徐薇,等.江西道地药材车前草中总黄酮超声辅助提取研究[J].时珍国医国药,2012,23(3):553-555.

[5]杨鹏,巨敏,朱沛沛,等.正交优化微波辅助提取枸杞中总黄酮的工艺研究[J].食品工业,2012(1):28-30.

[6]姜秀娟,唐金成,白红进.可见分光光度法测定刺山柑花蕾中总黄酮含量[J].食品科学,2010,31(18):252-254.

Determine of Total Flavonoids from Pandanus tectorius Soland

Li Yongjie Zhong Ming

ObjectiveTo establish the method of the UV spectrophotometry for determination of total flavonoids from Pandanus tectorius Soland.MethodsAdopted the UV spectrophotometry,Rutin as reference substance and through chromogenic reagent color at the 505nm wavelength determining the total flavonoids.ResultsThe flavonoids have a good linearity in the range of 0.025～0.124mg/ml (r=0.9992).The average recovery was 99.27%,RSD was 0.83% (n=9).The average content of total flavonoids was 13.75mg/g,the difference of the three batches of product content were significantly (RSD=8.77%,n=3).ConclusionThe UV spectrophotometry is simple,rapid,stable and reliable,suitable for the determination of total flavonoids from Pandanus tectorius Soland.

Pandanus tectorius Soland; UV spectrophotometry; Total flavonoids; Determination

1 广东省中医院，广东广州 510000

2 广州汉方现代中药研究开发有限公司，广东广州 510240

国家发展和改革委员会2011年国家工程研究中心创新能力建设项目，发改办高技[2011]1896号。

黎永洁（1969.7-），女，大专，中药师。主要从事医院药学工作。

钟鸣（1973.2-），男，硕士，制药高级工程师，主要从事中药/天然药物的研究与开发工作。电子邮件：gzmingzhong@126.com