千代田锦的组培快繁技术

骆震　王明友　张红

摘 要：以千代田锦一年生健壮幼芽为外植体，MS为基本培养基，探索了千代田锦的组培快繁技术，为其工厂化生产提供依据。结果表明：最佳启动培养基为MS+20 mg/L 6-BA+01 mg/L NAA，接种40 d后即可诱导出芽；增殖培养以MS+20 mg/L 6-BA+05 mg/L NAA较适宜；根的诱导以 1/2MS（大量元素减半）+ 05 mg/L NAA+05 mg/L IBA为其最适培养基。

关键词：千代田锦；组培快繁

中图分类号：S682.360.4+7 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2012）11-0052-03

Study on Tissue Culture and Rapid Propagation

Technique of Aloe variegata

Luo Zhen， Wang MingYou， Zhang Hong*

（Department of Agronomy ， Dezhou College， Dezhou 253023， China）

Abstract To provide theoretical guidance for the industrial production of Aloe variegate， its tissue culture and rapid propagation technologies were explored with the haleness plumules as explants and MS as basic medium. The results indicated that the optimum startup culture medium was MS+2.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA， and the buds could be induced after 40 days. MS+2.0 mg/L 6-BA+ 0.5 mg/L NAA was better for multiplication， and 1/2MS （major elements was halved）+ 0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA was the optimum one for rooting culture.

Key words Aloe variegata； Tissue culture and rapid propagation

千代田锦是百合科芦荟属多年生肉质草本植物，又叫什锦芦荟、翠花掌、蛇皮掌。叶片三角状披针形，肥厚多汁，边缘具不明显钝齿；叶色浓绿油亮，上布许多白色斑点，并形成不规则的横纹，株形俏丽，仪态刚健，是极富观赏价值的高档赏叶花卉。其常规繁殖多采用分株，繁殖系数较低[1，2]。本试验研究了该植物的组培快繁技术，对于其工厂化生产具有一定的指导意义。

1 材料与方法

11 试验材料

千代田锦一年生幼苗。

12 培养基及培养条件

均以MS为基本培养基，添加琼脂8 g及不同浓度的激素，启动、增殖培养基蔗糖添加量为30 g，生根培养基蔗糖为15 g，pH 58～60，培养室的温度为24～26℃，光照时数为每天12 h。

13 启动培养

选取千代田锦一年生幼苗，流水冲洗干净，去掉根，在无菌条件下用70%的酒精消毒10 s，再用01% HgCl2溶液消毒3～5 min，并加吐温3～4滴，无菌水冲洗3～5次。将消毒的材料置于无菌滤纸上吸干水分，基部略去掉一点，叶片剥掉，把茎段一分为二，即成外植体。然后分别接种在S1：MS+6-BA 10+NAA 01（激素单位为mg/L，下同）； S2 ：MS+6-BA 20+NAA 01；S3：MS+6-BA 30+NAA 01三种培养基上，每瓶接1个材料，共接30瓶。14 增殖培养

将启动培养基上获得的再生芽分别接种于A1：MS+6-BA 10+NAA 01；A2：MS+6-BA 10+NAA 05；A3：MS+6-BA 15+NAA 01；A4：MS+6-BA 15+NAA 05；A5：MS+6-BA 20+NAA 01；A6：MS+6-BA 20+NAA 05六种培养基中，每处理接种10瓶，每瓶接3个芽，一个月后观察增殖培养效果。

15 生根培养

取健壮的增殖再生芽接到B1：1/2MS+NAA 01；B2：1/2MS+IBA 05；B3：1/2MS+NAA 05；B4：1/2MS+NAA 05+IBA 05四种生根培养基上，每处理接种10瓶，每瓶接3个再生芽，观察生根情况。

16 炼苗移栽

当组培苗根长到2～3 cm时，将组培瓶拿到培养室外，放到自然散射光下，将瓶盖拧松，炼苗3 d；用清水把根冲洗干净，然后栽种到高压蒸汽灭菌的腐熟有机肥和蛭石以1∶ 1比例混合的基质中，栽好的苗浇透水，放到散射光下，覆膜保湿，3～5 d后开始放风，逐渐把膜去掉，待苗开始生长后再移到较强的光照下。

2 结果与分析

21 启动培养情况

接种后10 d统计污染率，三种培养基污染率均较低，在10%～20%之间。30 d后观察成活外植体的生长状况，发现接种的茎段都有所膨大，随着BA 浓度的增加，外植体体积增加也越大，S1培养基上茎段的体积约为原有体积的1～2倍，芽点较少，颜色深绿；S2培养基上茎段的体积大约为原有体积的4～5倍，有突起的芽点形成，颜色绿；S3培养基上茎段的体积大约为原有体积的6～7倍，突起的芽点较多，颜色浅绿。40 d后茎段上有不定芽形成，其中以S3培养基上分化的芽最多，1 cm茎段形成约11个芽，芽细高、颜色浅绿，白色斑点淡化，出现了玻璃化现象；S2培养基分化的芽略少于S3培养基，1 cm茎段形成约9个芽，但芽较粗壮，色绿；S1培养基只有少量的芽形成，芽深绿、粗壮。

22 增殖培养情况

将经过启动培养获得的不定芽接种于增殖培养基中，发现低浓度的BA可以促进芽增殖，但增殖系数低，芽生长缓慢，随着BA浓度的增加，芽的诱导率逐渐增加，BA浓度为20 mg/L时，芽的增殖率最高，生长速度最快（见图1、表1）。当BA浓度一定，NAA浓度由01 mg/L增加到05 mg/L时，芽的增殖率虽有所下降，但芽的高度有所增加。综合考率，千代田锦增殖的最佳培养基为A6：MS+6-BA 20+NAA 05。

图1 不定芽的增殖

图2 组培苗的生根

表1

不同培养基对不定芽增殖的影响

培养

基 接种

芽数（个） 形成

芽数（个） 增殖

系数 芽的生

长状况

A1 30 67 22 暗绿，粗矮

A2 30 45 15 暗绿，粗矮

A3 30 98 33 较粗壮，叶深绿，较矮

A4 30 84 28 较粗壮，叶深绿，较矮

A5 30 164 55 细，叶绿，较高

A6 30 128 43 粗壮，叶绿，高

23 生根培养

组培苗生根的速度以B4培养基最快，其次为B3、B2，大约5 d左右可见白色的根原基，10 d左右根长在2 cm左右。B1培养基生根最慢，15 d后才见少量苗有根生成。生根率和根数也存在差异，其中以B4培养基的生根数最多，且根的质量较好，说明适宜浓度的NAA和IBA有利于根的生成。由试验结果可以看出，生根的最佳培养基为1/2MS+05 mg/L NAA+05 mg/L IBA （表2）。

表2

不同培养基对组培苗生根的影响

生根培养基 接种苗数

（株） 生根苗数

（株） 生根率

（%） 平均根数

（条/株）

B1 30 14 47 03

B2 30 21 70 16

B3 30 30 100 28

B4 30 30 100 42

24 炼苗与移栽

炼苗结束后将组培苗栽种到经高压蒸汽灭菌的腐熟有机肥和珍珠岩以1∶ 1比例混合的基质中，浇透水，覆膜保湿，将栽好的苗放到散射光下，注意每天适量喷水，逐渐把膜去掉，待生长比较稳定后再逐渐放到较强的光照下，移栽后的成活率达95%以上。

3 小结

以千代田锦的茎段为外植体较宜诱导不定芽的产生，芽的分化生长是NAA和6-BA共同作用的结果，两者比例大时利于芽的分化，比例小时利于芽的生长；适宜浓度的NAA和IBA可相互促进，有利于千代田锦根的生成。本研究发现，启动培养以MS+20 mg/L 6-BA+01 mg/L NAA 为培养基较适宜，芽分化多，较健壮，无玻璃化；增殖培养以MS+20 mg/L 6-BA+05 mg/L NAA较适宜，根的诱导以1/2MS（大量元素减半）+05 mg/L NAA +05 mg/L IBA为其最适培养基。参 考 文 献：

[1] 杨乃博 蛇皮掌的组织培养[J] 植物生理学通讯，1994，30（2）：120

[2] 兑宝峰 叶奇花艳翠花掌[J] 花友俱乐部，2004，3：38