麻鸭Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌与O78型大肠杆菌混合感染的诊断

艾地云 彭公宽 罗玲 王红琳

摘要：湖北省汉川市某蛋鸭场发生了一起18日龄麻鸭精神沉郁、食欲减退、嗜睡、缩颈、拉稀及神经症状为特点的疫病，经流行病学调查、临床症状观察、病理剖检、病原分离鉴定及动物回归试验确诊为Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌和O78型大肠杆菌混合感染。

关键词：鸭疫里默氏杆菌；大肠杆菌；诊断

中图分类号：S858.32文献标识码：B文章编号：1007-273X（2012）11-0025-02

鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer，RA）和致病性大肠埃希氏菌（Escherichia coli，E. coli）是鸭场最常见的2种致病性细菌，它们在临床上常表现为混合感染，对养鸭业的危害较大[1-3]。禽类鸭疫里默氏杆菌存在多种血清型，致病性大肠埃希氏菌的血清型更多，且二者的血清型之间不存在交叉保护，均易产生耐药性。而雏鸭感染这2种细菌后的临床症状和病理变化极为相似，给临床诊断和防治带来困难，因此进行实验室的鉴别诊断十分必要。

2011年6月湖北省汉川市某蛋鸭养殖场发生了一起疫病，以雏鸭出现精神沉郁、食欲减退、嗜睡、缩颈、拉稀及神经症状为特点，发病率和病死率均较高，经对发病鸭群进行临床症状观察、病理剖检和实验室诊断以及动物回归试验，诊断为Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌与O78型大肠杆菌混合感染。

1发病情况

2011年6月，湖北省汉川市某蛋鸭养殖场的

6 000羽雏麻鸭于18日龄时先后发病，随后陆续出现死亡，发病2 d后病鸭数达1 200羽，其中死亡860羽，发病率和死亡率分别为20.0%、14.3%。

2临床症状

病鸭表现为精神沉郁、食欲不振、羽毛松乱、眼鼻有黏性分泌物、喜卧及缩颈、头颈歪斜、步态不稳以及共济失调、拉稀或排黄绿色粪便。

3病理变化

对病死鸭进行病理解剖发现其心包积液增多，浑浊，心包膜增厚、外覆盖一层灰黄色的纤维素性渗出物；气囊壁增厚、覆盖一层灰黄色的纤维素性渗出物；肝肿大，表面有黄白色纤维素膜，厚薄不均，易剥离；表现为典型的纤维素性心包炎、气囊炎病变。脑膜出血或充血。

4实验室诊断

4.1细菌学诊断

无菌取病、死鸭的脑、肝组织划线接种于TSA（含5%小牛血清）平板培养基，37 ℃ 5% CO2培养24 h。可见圆形凸起、边缘整齐、半透明、有光泽、奶油状、直径为0.5～1.5mm的菌落，用折射光观察可见微弱的虹光，疑似为鸭疫里默氏杆菌。挑单个可疑菌落划线接种于麦康凯琼脂平板培养基，37 ℃ 5% CO2培养24 h，无细菌生长。挑单个可疑菌落进行革兰氏染色，在油镜下观察呈阴性的短小杆菌，不运动，无芽孢，单个或成双存在，偶见有长丝状，符合RA形态特征。

同时无菌取病、死鸭的脑组织划线接种于麦康凯琼脂平板培养基，37℃培养24 h。可见呈红色、边缘整齐、表面光滑、隆起、湿润不透明的圆形菌落，直径约1.0～3.0 mm，疑似为大肠杆菌。挑选单个可疑菌落进行革兰氏染色，在油镜下观察呈阴性、两端钝圆的短杆菌，多呈单个或成双存在，无芽胞，符合

E. coli形态特征。6份病料中分离并纯化疑似RA、E. coli菌株各6株。

4.2生化试验

分别将纯化的6株疑似RA菌株接种到微量发酵管观察其生化反应。结果显示，葡萄糖、蔗糖、木糖、肌醇、卫茅醇、硫化氢、柠檬酸盐反应皆为阴性，符合RA生化特性。

分别将纯化的6株疑似E. coli菌株接种到微量发酵管观察其生化反应。结果显示，葡萄搪、麦芽糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖反应皆为阳性，肌醇、蔗糖、水杨苷、棉子糖、明胶、硫化氢、淀粉、柠檬酸盐、氧化酶反应皆为阴性，卫茅醇不确定，符合E. coli生化特性。

根据以上培养特性、形态特征及生化特性，初步确定分离菌为鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌。

4.3血清学鉴定

用鸭疫里默氏杆菌标准阳性血清做玻板凝集试验确定其血清型[1，3]。结果显示6株鸭疫里默氏杆菌血清型皆为Ⅰ型。

用大肠杆菌标准阳性血清，先通过玻板凝集试验进行初步血清学鉴定，再通过试管凝集试验确定大肠杆菌的O型血清型[1，4]。结果显示6株大肠杆菌血清型皆为O78型。

5动物回归试验

分别将纯化培养的6株RA菌株、6株E. coli菌株混合接种到TSB（含10% FCS）培养液中，37℃，120r/min培养20 h，根据平均数法计算细菌数，再分别将病原菌悬液稀释到109CFU/mL，以备攻毒动物用。将18只14日龄健康麻鸭分为3组，6只/组，其中2个为试验组，1个为对照组。试验1组每只鸭胸肌注射0.5 mL RA悬液，试验2组每只鸭胸肌注射0.5 mL E. coli悬液，对照组每只鸭胸肌注射0.5 mL TSB（含10%FCS）培养液。结果发现攻毒后24 h试验组鸭精神沉郁，行动迟缓，排绿色稀粪，共济失调，头颈震颤和昏迷。感染后48 h内试验1组鸭全部死亡，试验2组鸭死亡5只。解剖病、死鸭，可见其心包积水、浑浊，心包壁增厚、气囊壁增厚、肝肿大、脑肿大，无菌取试验组鸭脑组织可分别分离到RA和E. coli。对照组鸭全部健活。说明分离菌为本次发病鸭的病原。

6讨论

根据雏鸭发病情况、临床症状、实验室诊断及动物回归试验可确诊该病例为Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌和O78型大肠杆菌混合感染。

鸭疫里默氏杆菌病和鸭大肠杆菌病是临床上最常见的2种细菌性疾病，一年四季均可发生，鸭舍及周边卫生条件差、外界环境变化大时更易诱发。预防该病应做好以下几点：①加强饲养管理，保障饲料营养，保持鸭舍通风良好，防潮湿，勤换垫草。②坚持严格的卫生防疫、消毒措施和全进全出制，对发病场所及各种污染物用生石灰进行彻底消毒。③采用疫苗预防。雏鸭在5～7日龄时注射1次鸭疫里默氏杆菌-大肠杆菌二联灭活疫苗，其保护率达85%以上[5]。因RA和E. coli各血清型之间无交叉保护性，最好选用与病原菌相同血清型的菌株做疫苗效果较好。目前湖北省农业科学院畜牧兽医研究所已研制出鸭疫里默氏杆菌-大肠杆菌二联灭活疫苗，对雏鸭有较高的保护率。

治疗该病应注意：①通过药敏试验筛选敏感药物进行治疗，以避免无效用药。②采取联合、轮换、交叉等用药形式，以避免细菌产生耐药性，达到好的治疗效果。

参考文献：

[1]SAIF Y M. 禽病学[M].第十一版.苏敬良，高福，索勋，译.北京：中国农业出版社，2005.

[2]施少华，李文扬，程龙飞，等.番鸭大肠杆菌和鸭疫里默氏菌混合感染的诊治[J].中国兽医杂志，2005，41（1）：61-62.

[3]言天久，潘懿，韦平，等.鸭疫里默氏杆菌病病原分离、血清型鉴定及病例防治报告[J].中国畜牧兽医，2007，34（12）：99-100.

[4]于学辉，程安春，汪铭书，等.鸭源致病性大肠杆菌的血清型鉴定及其相关毒力基因分析[J].畜牧兽医学报，2008，39（1）：53-59.

[5]蔡家利，詹晓庆.鸭疫里氏杆菌和大肠杆菌二联灭活疫苗研究[J].中国家禽，2004，26（20）：10-12.