核因子-кB与心力衰竭心功能分级关系的研究

王晋滨 张雪娥

[摘要] 目的 探讨充血性心力衰竭（congestive heart failure，CHF）患者不同心功能分级与外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）核因子-кB（NF-кB）表达的关系。 方法 选取75例心衰患者，并按心功能分为Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ3个组，分别为33例、24例、18例和正常对照组15例。PBMC的NF-кB表达由免疫组化染色检测。两组资料差异采用t检验，心衰患者心功能与PBMC NF-кB表达的关系用相关分析。结果 心衰组与正常对照组PBMC NF-кB的表达差异有统计学意义（P ＜ 0.01），心衰患者心功能分级与PBMC NF-кB的表达呈正相关（P ＜ 0.01）。 结论 心衰的程度越重，NF-кB表达越高。

[关键词] 核因子-кB；充血性心力衰竭

[中图分类号] R541.6[文献标识码] B[文章编号] 1673-9701（2012）16-0069-02

The relationship between NF-кB and cardiac function classification in heart failure patients

WANG Jinbin ZHANG Xue''e

Department of Cardiology, Shanxi Medical University Second Affiliated Hospital, Taiyuan 030001, China

[Abstract] ObjectiveTo study the relationship of NF-кB activation on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and cardiac function classification in heart failure patients. Methods Selected 75 cases of patients with heart failure and divided into three groups of Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ, according to cardiac function, were 33 cases, 24 cases, 18 cases and normal control group of 15 cases. The activity of NF-кB was measured by immunocytochemical staining. Two sets of data differences were analyzed by t tests; cardiac function of patients with heart failure and expression in PBMC of NF-кB was analyzed by the correlation analysis. Results Difference of PBMC expression of NF-кB was statistically significant in the CHF group compared with the normal control group (P ＜ 0.01). NF-кB expression In PBMC and cardiac function classification was positively correlated (P < 0.01). Conclusion With the more severe the degree of heart failure, the higher the activation of NF-кB.

[Key words] NF-кB; Congestive heart failure

心力衰竭是各种心脏疾病导致心功能不全的一种综合征。近代研究表明，神经内分泌-细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6 血管紧张素Ⅱ、COX-2等）的激活和心室重塑是心衰发生发展的两大基本机制[1-3]。Purcell等[4]的研究表明，NF-κB本身的过度表达可以诱导心肌细胞的肥大导致心肌重塑。相关研究表明[5]，NF-кB是一种重要的细胞核转录因子，参与上述炎性细胞因子的调控，其最初是从B细胞核提取物中发现的一种能与免疫球蛋白κ轻链基因的增强子кB序列（5''-GGG ACTTTCC-3''）特异结合,并能促进κ链基因表达的核蛋白因子，后来发现其广泛存在于许多类型细胞中,并在心血管病领域备受关注。但在外周血细胞中NF-кB表达与心衰的严重程度的关系报道较少，本实验是通过测定心衰患者外周血单个核细胞（PBMC）的NF-кB表达，研究NF-кB对不同心功能分级的心衰患者的意义。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选择2010年3～11月 在山西医科大学第二医学院心血管内科住院诊断为心衰的患者75 例，男40 例，女 35 例,平均年龄（61.7±11.4）岁，心功能按美国纽约心脏病学会（NYHA）1928年提出的方案分为Ⅱ～ Ⅳ级,病因为扩张性心肌病、冠心病、高血压、缺血性心肌病。对照组来自我院门诊健康者，共 15 例，男 7例，女8例，平均年龄（63±8.7）岁。所有受试对象均排除严重肝、肾功能不全，风湿活动，免疫、感染和肿瘤等疾病。

1.2 方法

无菌采取抗凝血 4 mL 血液加PBS液1:1稀释后，2:1体积置于淋巴细胞分离液上，2 000 r/min离心20 min ，收集试管中间悬浮的一层乳白色液体，即为PBMC。用5倍体积PBS液洗涤3次，1 500 r/min离心10 min。台盼蓝拒染试验活细胞比例 > 95 %为有效标本。1640培养基调整细胞数为2×107，取30 μL细胞混悬液涂于用多聚赖氨酸处理的载波片上，室温风扇吹干，丙酮固定 30 min，干燥后保存于-70℃冰箱待测。NF-кB的免疫组化染色：第一抗体选用兔抗NF-кB p65亚单位的多克隆抗体，抗体稀释度经预试验定为1×100，用 SABC法试剂盒进行操作，操作步骤按试剂盒说明书进行。每张涂片于高倍视野下随机计数500个细胞，计算细胞核阳性的细胞数占细胞总数的百分率。

1.3 统计学处理

试验数据以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，用相关分析方法来分析PBMC中NF-кB的活化率与心功能分级以及不同病因的相关性，P ＜ 0.05为差异有统计学意义，所有数据用SPSS 13.0统计软件完成。

2 结果

心衰组总外周血单个核细胞NF-кB活化率（24.7±11.4）%、与正常对照组（7.7±2.4）%，差异具有统计学意义（t = 8.137，P ＜ 0.01），且明显高于对照组。心衰组随着心功能分级的增高，PBMC中NF-кB活化率越高，且两者呈正相关（r = 0.972，P ＜ 0.01），见表1，心衰不同基础心脏病组的NF-кB活化水平无相关性，即不同基础心脏病组与NF-кB活化率的联系无统计学意义（r = －0.6，P ＞ 0.05），见表2。

表1 心衰组不同心功能分级外周血单个核细胞NF-кB核染色活化率（x±s）

表2 心衰组不同基础心脏病外周血单个核细胞NF-кB活化率

（x±s）

3 讨论

心力衰竭是冠心病、高血压、缺血性心肌病、扩张型心肌病等各种心脏病发展的最严重阶段，出现心肌收缩力下降使心排血量不能满足机体代谢需要，器官、组织血液灌注不足，同时出现肺循环和（或）体循环淤血的表现。据最近中国心血管健康多种新合作研究结果表明，我国现有心力衰竭患者超过400万，患病率为0.9％，其中男性0.7％，女性为1.0％，且每年发病人数呈现迅速上升趋势[12]。心力衰竭现在是唯一一种患病率、发病率和死亡率均增高的心血管病，所以研究心衰的发病机制，寻找新的治疗和预防途径非常重要。心力衰竭是以心室重塑为特征，神经内分泌-细胞因子系统激活，自身不断发展的过程。核因子从心肌炎性反应、细胞凋亡、心室重塑等方面参与心衰的发生发展过程[6]。在静息状态下抑制蛋白кB（IкB）与NF-кB（通常指p65/p50二聚体）结合形成无活性三聚体存在于胞质中，当细胞受到外界刺激后，IкB发生磷酸化而被降解NF-кB暴露进入细胞核与靶基因特异性结合从而起动基因转录，调控基因表达[7]。国内外对NF-кB与心血管病的研究较多，研究表明NF-кB与心衰、冠心病、动脉粥样硬化、高血压、缺血-再灌注损伤等的发生发展均有密切关系[8]。如冠心病患者的NF-кB细胞率明显高于无心血管病史的健康者[9]；风心病心肌中NF-кB表达呈阳性且与心功能分级呈正相关[10]；在对自发性高血压大鼠动物模型的研究中发现心肌组织中NF-кB p65蛋白表达明显高于无高血压对照组[11]。外周血细胞中NF-кB的表达与心血管疾病的报道较少及考虑到操作简单易行，本实验以心衰患者外周血单个核细胞中NF-кB表达来探讨对心功能不同分级及4种基础心脏病所致心衰的影响。本实验表明，心衰患者的NF-кB染色率明显高于正常组，说明心衰时NF-кB被激活，可能参与了心衰的发生发展过程。本实验发现，心衰程度越重，外周血单个核细胞NF-кB染色率越高，推测NF-кB可以作为评价心衰严重程度的指标，客观反映心功能的情况。但受上述四种基础心脏病的影响不大，即心衰患者的NF-кB表达升高与这些基础心脏病因无关，而是心衰自身原因。我们可以推测这四种基础心脏疾病在发展到心力衰竭时，都要经过NF-кB转导通路，进而通过启动或激活心肌的炎性反应、心肌细胞凋亡、心肌重塑等方面而导致心衰。

总之，NF-кB在心衰发生发展的过程中起着非常重要的作用，可为心衰的早期诊断、评价、治疗及预后提供新的思路和方法。

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（收稿日期：2012-03-15）