EV71感染手足口病患儿Th细胞免疫变化及其意义

白敏 韩宜姚

[摘要] 目的 探讨EV71感染手足口病患儿Th 细胞免疫平衡变化及其对疾病进展的影响。 方法 选择84例手足口病患儿分为普通组和重症组，另选择30例健康儿童作为对照，采用流式细胞技术检测静脉血Th1/Th2细胞表达水平变化，采用酶联免疫吸附法检测血清IL-4及IFN-γ表达水平变化。 结果 重症组及普通组患儿静脉血Th1及Th1/Th2表达水平低于对照组，Th2高于对照组，IL-4及IFN-γ表达水平低于对照组。重症组Th1及Th1/Th2表达水平低于普通组，Th2高于普通组，IL-4及IFN-γ表达水平低于普通组。 结论 EV71感染手足口病患儿Th细胞免疫异常，可能同手足口病患儿的发病及疾病进展有关。

[关键词] 手足口病；肠道病毒71；Th细胞免疫；白细胞介素4；γ干扰素

[中图分类号] R725.1[文献标识码] B[文章编号] 1673-9701（2012）32-0077-02

手足口病是学龄前儿童常见传染性疾病，尤其以婴幼儿高发，手足口病以手、足及口部位的皮损为最常见的临床表现，严重者可导致患儿的多器官功能损害甚至功能衰竭而致患儿临床死亡。手足口病是由病毒感染引起的传染性疾病，其中以EV71病毒及CoxA16病毒感染最为常见。近年来的研究显示[1]，手足口病患儿在发病过程中，存在免疫功能失调的状态，患儿体内的细胞免疫及体液免疫均存在不同程度的异常，并且与疾病的进展有关。本文对EV71病毒感染所致的手足口病患儿Th 细胞免疫平衡变化及其对疾病进展的影响进行研究。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择2010年10月～2012年4月我院收治的手足口病患儿84例，均经PCR诊断为EV71病毒感染所致手足口病，其中男49例，女35例，年龄0.4～9.2岁，平均（2.9±2.4）岁，患儿按卫生部医政司发布的《手足口病诊疗指南（2010）》[2]分为普通型52例及重症型32例；另选择30名健康幼儿作为对照组，其中男18例，女12例，年龄1～8岁，平均（2.8±1.7）岁。患儿同对照组儿童的年龄、性别经统计学分析差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 主要仪器及试剂

流式细胞仪（美国BD公司），721型分光光度计（北京仪器厂），CD3+、CD4+及CD8+抗体（美国BD公司），IL-4、IFN-γ检测试剂盒（南京建成生物工程研究所），IL-4抗体和IFN-γ抗体（武汉波士德生物试剂公司）。

1.3 标本采集及检测

1.3.1 Th细胞检测患儿清晨抽取空腹静脉血，加入枸橼酸钠抗凝，PBS缓冲液调整细胞密度为1×106/L，室温暗处孵育30 min，每管加入500 μL溶血素裂解红细胞，静置20 min采用PBS缓冲液洗涤，500 G/min离心5 min，加入PBS缓冲液洗涤后上机检测，采用CD3+抗体标记T细胞，采用CD4+抗体区分Th细胞亚群，IFN-γ和IL-4抗体筛选Th1、Th2细胞。检测完毕后采用Cellquestpro软件进行分析。

1.3.2 IL-4、IFN-γ表达检测患儿静脉血低温分离血清，100 μL标准品梯度稀释，绘制标准曲线，100 μL样品加入96孔板各反应孔，37℃温育60 min，PBS缓冲液冲洗，加入 X Biotin混匀后37℃温育60 min，加入X HRP充分反应，TMB显色液，37℃温育15 min，H2SO4终止反应，ELISA检测试剂盒测定IL-4、IFN-γ水平，分别于450 nm处检测吸光度，依据标准曲线计算IL-4、IFN-γ浓度。

1.4 统计学方法

数据采用SPSS 17.0统计学软件进行分析，计量资料以（x±s）表示，采用方差分析，组间比较采用t检验，检验水准α=0.05，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组静脉血Th1/Th2表达水平变化

重症组及普通组患儿静脉血Th1及Th1/Th2表达水平低于对照组，Th2高于对照组，重症组Th1及Th1/Th2低于普通组，Th2高于普通组。见表1。

2.2 各组静脉血IL-4、IFN-γ表达水平变化

重症组及普通组患儿血清IL-4及IFN-γ表达水平低于对照组。重症组患儿血清IL-4及IFN-γ表达水平低于普通组。见表2。

3 讨论

手足口病是儿童常见传染性疾病，以手、足部及口腔黏膜溃疡为主要的临床表现，严重者可引起循环系统、肺部及脑部等多系统损害而导致患儿临床死亡。病毒感染是手足口病的致病原因，其中EV71病毒是主要的致病病毒之一。近年来的研究结果显示[3]，病毒感染能够导致患儿的免疫系统功能失调，T淋巴细胞免疫在肠道病毒感染后能够发生免疫调节作用，并且参与疾病的进展，手足口病患儿的T淋巴细胞的数量及肿瘤均发生明显变化，导致T淋巴细胞的免疫功能失衡，而且小儿的免疫系统发育尚不完善，T淋巴细胞免疫的紊乱可能导致患儿的疾病进展。

本研究发现，手足口病患儿的Th1表达水平下降，Th2表达水平上升，Th1/Th2比值下降，Th细胞是T细胞的亚群，分为Thl、Th2、Th0细胞，其中Th1介导细胞免疫，Th2主要介导体液免疫，Th1活化后能够产生IFN-γ、TNF-β等具有炎症拮抗作用的细胞因子，诱导自然杀伤细胞等免疫细胞的活化。Th2细胞活化后能够产生具有强烈致炎作用及趋化诱导作用的IL-4、IL-5、IL-10和IL-13等细胞因子，调节B淋巴细胞的功能，促进B淋巴细胞的活化及免疫球蛋白的合成[4]。在正常机体内，Thl及Th2 能够相互转化并维持动态平衡，保持机体的稳定性。但在病理状态下，Thl及Th2细胞受外来抗原信号的刺激功能发生改变，细胞亚群的动态平衡被破坏，其中Th1亚群的功能增强及Th2亚群的功能减弱最为典型，Thl/Th2的比值发生变化，发生免疫平衡漂移，导致Th1向Th2亚群分化，机体的免疫功能发生变化[5]。细胞免疫是病毒感染的第一道防线，手足口病患儿Th1细胞数量及功能下调导致IFN-γ等具有免疫介导作用的细胞因子减少，导致免疫细胞对EV71病毒的杀伤作用减弱[6]。在各组比较中发现，手足口病患儿静脉血的Th细胞的亚群分化发生明显失调，手足口病患儿静脉血Th1及Th1/Th2降低，Th2比例升高，且重症组表现更为明显，说明在手足口病患儿体内存在Th细胞免疫漂移现象，并与患儿的疾病进展情况相关。

对其下游的细胞因子IL-4及IFN-γ水平比较证实，手足口病患儿的IL-4及IFN-γ均明显下降，且重症组同普通组的IL-4及IFN-γ表达水平降低得更为明显，IL-4及IFN-γ是Th2及Th1表达的细胞因子，IL-4水平的下降说明Th2细胞可能绝对数的下降或者功能降低，而表1中Th1/Th2比值的降低可能是Th1下降更为明显所致[7]，或者T细胞免疫抑制后T细胞的绝对数量下降导致Th2的比例相对升高。本研究结果说明患儿的整个Th细胞免疫处于抑制状态，Th淋巴细胞的辅助作用是B细胞介导的体液免疫的必要调节因子，Th细胞免疫抑制能够导致患儿体液免疫功能下降，B细胞表达的IgG、IgA及IgM等免疫球蛋白水平下降[8]，引起患儿的细胞免疫及体液免疫能力减弱，对病毒的清除能力下降，导致手足口病患儿的病情进展。

[参考文献]

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[5]农少云，梁娟英，杨晓泉. 手足口病患儿外周血T淋巴细胞亚群及免疫球蛋白检测的意义[J]. 检验医学与临床，2012，9（11）：1287-1288.

[6]张玉兰，刘小慧. 手足口病患儿细胞免疫功能的改变及其临床意义[J]. 实用临床医学，2011，12（5）：69-70.

[7]林路洋，李常兴，曹开源，等. 单纯疱疹-II 型病毒感染的皮损部位病毒载量与外周血 Th及Tc 的相关性研究[J]. 热带医学杂志，2009，9（9）：994-997.

[8]熊金凤，王云芬，杨兴林，等. 手足口病患儿免疫球蛋白检测结果分析[J].检验医学与临床，2012，9（7）：837-838.

（收稿日期：2012-08-02）