衢州地区宫颈病变患者HPV感染分子流行病学分析

徐小敏 余晓 夏利花

[摘要] 目的 分析衢州地区1 280例宫颈病变女性中人乳头瘤病毒（human papillomavirus， HPV）21种基因型的分子流行病学特点。方法 对衢州地区1 280例宫颈病变的女性进行21种HPV基因型分型检测，比较不同基因型的流行病学特点。 结果 本组病例中总HPV感染率为55.31%（708/1280），其中HR-HPV感染率为38.83%，LR-HPV感染率为16.48%，高危型最常见类型为HPV 16、58、52，低危型最常见类型为HPV6、11。HR-HPV亚型中16、58、52是主要的独立影响因素，而LR-HPV亚型中6、11是主要的影响因素。HPV单一型感染率11.1%，两种亚型合并感染率42.9%，三种亚型合并感染率30.6%，四种及以上亚型合并感染率15.4%。不同年龄段感染HPV及感染HR-HPV的比例均有显著性差异，最高为31～40岁组，分别占67.39%和50.58%，其次为21～30岁组，分别占61.75%和45.78%，HPV感染与宫颈病变程度呈正相关。 结论 本研究提供了衢州地区宫颈病变女性的21种HPV基因型分子流行病学资料，为本地区宫颈癌的临床防治工作提供了可靠的科学依据，对本地区今后疫苗的开发、应用也具有重要价值。

[关键词] HPV；基因型；高危型；宫颈病变

[中图分类号] R737.33[文献标识码] B[文章编号] 1673-9701（2012）32-0011-03

宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，流行病学调查和分子生物学研究均已证实人乳头瘤病毒（HPV）感染是引起宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的主要原因，其中高危型HPV（HR-HPV）感染被认为是引起宫颈癌的最重要因素[1]。目前已发现的HPV亚型共有100多种，但能从被感染生殖道中分离出的亚型仅30多种[2]， 不同种族、不同地区、不同的研究人群其感染的HPV亚型分布也有所不同[3]。衢州市因地属浙西山区，女性宫颈病变的发病率一直较高，已严重影响到本地区女性的生殖健康和生命安全，因此，我们对本地区宫颈病变的女性进行HPV感染分子流行病学调查，旨在为本地区HPV感染防治措施的制度以及今后HPV疫苗的使用提供依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2009年1月～2010年12月间来我院妇科门诊就诊时自愿做TCT宫颈疾病筛查的患者共17 578例，其中1 280例患者TCT诊断为不能明确意义的非典型鳞状上皮细胞（ASCUS）及以上，对该部分患者均进行了HPV病毒检测，并在阴道镜下行多点活检组织病理学确诊，同时行相关流行病学调查分析。该组患者年龄 27～56岁，平均（43.8±21.4）岁，最终经病理确诊为炎症846例、湿疣104例、CINⅠ237例、CINⅡ和Ⅲ共92例、鳞癌1例。

1.2 试剂和仪器

采用香港凯普生物科技有限公司生产的HPV核酸扩增分型检测试剂盒（包括DNA提取试剂盒、PCR扩增试剂盒及杂交试剂盒）和医用核酸分子快速杂交仪，美国ABI公司生产的ABI2720普通扩增仪和Beckman公司生产的DU 800紫外分光光度仪，同时对21种HPV亚型（包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68等15种高危亚型以及6、11、42、43、44、CP8304等6种低危亚型）进行检测。

1.3 实验方法

1.3.1 标本采集及保存用棉拭子轻轻擦净宫颈口分泌物，再将专用拭子插入宫颈管内，顺时针旋转4～5周以获取足够的上皮细胞样本，取出后将其置入内有专用细胞保存液的取样管中，将宫颈刷柄折断，旋紧瓶盖，做好样品编号及登记，4℃保存并于1周内检测。

1.3.2 PCR扩增及杂交检测①DNA提取：吸取标本保存液0.5 mL，离心1 min（14 000 r/min）后弃上清液，剩余标本用DNA试剂盒随带的提取液进行HPV-DNA提取。②PCR扩增：在ABI 2720扩增仪中进行PCR扩增，采用HPV通用引物，引物序列5端带生物素标记。扩增过程：20℃ 10 min （UNG酶作用）、95℃ 9 min（预变性）、95℃ 20 s（变性）、55℃ 30 s（退火）、72℃ 30 s（延伸），共进行40个循环后行72℃ 5 min（再延伸）。③杂交：在医用核酸分子快速杂交仪中进行杂交，具体操作按杂交试剂盒说明书进行。

1.4 结果判断[4]

杂交膜共设24个点，Biotin和IC设为对照点，当两点均为阳性则提示检测结果可信，两点全部或其中之一阴性均提示检测结果不可信；当对照点正常时，其他点出现蓝紫色圆点时其对应的HPV亚型判定为阳性。任何一种HPV亚型阳性均判定为HPV感染，其中两种或以上HPV亚型阳性均判定为HPV复合感染，HR-HPV阳性或HR-HPV和低危型HPV（LR-HPV）同时阳性者均判定为HR-HPV感染，仅LR-HPV阳性则判定为LR-HPV感染。

1.5 统计学处理

采用SPSS 19.0统计学软件对实验数据进行分析，多因素分析采用Cox回归分析，计数资料采用χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 1 280例标本检测结果

1 280例标本HPV总感染率55.31%（708/1 280），根据病毒致癌性大小将其分为低危型和高危型两大类，实验结果显示HR-HPV感染率为38.83%（497/1280），LR-HPV感染率为16.48%（211/1280）。HR-HPV阳性率由高到低排序依次为：16、58、52、33、31、68、18、53、39、56、59、66、45、51、35；LR-HPV阳性率由高到低排序依次为：6、11、cp8304、42、43、44。对实验数据进行Cox回归分析，发现HR-HPV亚型中16、58、52是主要的独立影响因素，而LR-HPV亚型中6、11是主要的影响因素，见表1、2。

2.2 不同年龄段HPV感染率构成比

结果显示，不同年龄段感染HPV及感染HR-HPV比例最高均为31～40岁组，分别占67.39%和50.58%，其次为21～30岁组，分别占61.75%和45.78%，LR-HPV感染比例最高为51～60岁组，占22.78%。总HPV感染率及HR-HPV感染率各组差异比较均有统计学意义（χ2=144.08、149.09，P < 0.01），LR-HPV感染率各组差异无统计学意义（χ2=3.11，P > 0.05），见表3。

2.3 HPV多重感染分布

由于存在较多双重及多重复合感染病例，故708例感染标本检出各亚型阳性为1 001次，其中检出HR-HPV阳性668次，检出LR-HPV阳性333次，见表4。

2.4 不同宫颈病变HPV的感染率

由表5可知，宫颈炎、湿疣、CIN I 、CINⅡ、CINⅢ、鳞癌的HPV阳性的感染率分别为44.9%、65.3%、75.1%、84.7%、91.3%、100.0%，对实验数据进行Cox回归分析，结果显示，HPV感染与宫颈病变程度呈正相关，宫颈病变程度越重，HPV的感染率也越高。

3 讨论

根据世界卫生组织调查统计，HPV感染目前已成为全球第一大传染性疾病，性活跃期男女曾感染过HPV的比率为50%，到50岁时该比率上升到80%[5]。在大多数国家，HPV感染都极为常见，通常感染HPV后患者并无症状，但因其与宫颈癌的发生关系密切，因此已引起全世界的广泛关注。目前己发现有30多种HPV亚型与女性下生殖道感染和宫颈病变有关，并根据病毒致癌性大小将其分为低危型和高危型两大类。大量组织学及分子生物学研究均证实[6]，LR-HPV感染后一般不导致宫颈癌，通常仅表现为外阴及宫颈疣状病变，而HR-HPV的DNA通常可整合到宿主基因组中，其持续感染是导致女性宫颈癌的最重要因素。由于HPV感染多为亚临床性，肉眼难于识别[7]，且其致病性与基因型密切相关，因此对于HPV感染的高危人群定期进行HPV基因型检测对宫颈癌的防治均具有重大意义。

目前认为，HPV亚型的分布具有地域性[8]，本方法所检测的21种HPV亚型约占中国人群HPV感染的95%，为国内HPV感染的主要基因型。本研究结果显示，衢州地区宫颈病变女性中HPV总感染率和HR-HPV感染率均较高，分别达到55.31%和38.83%，在HPV感染病例中，HR-HPV感染的比例更是高达70.20%（497/708），因此提示在本地区发现宫颈病变的女性中进行HPV分型检测极具必要性，通过筛查出HR-HPV感染患者，对其进行随访跟踪，可有效进行宫颈癌变的预防并适时提前进行干预治疗。同时该结果也显示，本地区HR-HPV感染中以HPV16型占11.88%高居首位，其次为HPV58、52型（8.91%和7.97%），HPV18型并不常见，仅占2.5%；LR-HPV感染中以HPV6、11型（10.47%和9.84%）最多，因此，如果今后条件允许，现有的预防性两价Cervarix疫苗和四价Gardasi1疫苗是否该在本地区推广应用尚有待探讨。本研究中还发现，不同年龄段HPV感染率和HR-HPV感染率均以31～40岁组最高（67.39%和50.58%），其次为21～30岁组（61.75%和45.78%），各组间差异比较有高度统计学意义（P < 0.01），而将21～30岁组及31～40岁组两组感染HPV的人数和感染HR-HPV的人数相加，其感染率更是高达86.16%和91.75%，因此，显示了HPV感染的年龄有高度集中的趋势。考虑到21～40岁年龄段为性活动非常活跃期，推测其如此高的HPV感染率可能与性生活频率及性伴侣数量有关，因此认为HPV感染与性行为因素有密切关联；而该年龄段如此高的HR-HPV感染率，也提示着该人群罹患宫颈癌的高度危险性，因此建议本地区今后针对该年龄段人群进行宫颈疾病筛查时，将HPV分型检测纳入到初筛内容中。另外，研究中我们也发现，不同宫颈疾病患者中HPV感染率及基因型分布也存在差异，今后将扩大样本量继续深入研究分析，探讨各种HPV感染高危因素与本地区HPV感染率及基因型分布的相关性，为本地区女性宫颈疾病防治工作的开展提供有效帮助。

[参考文献]

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[2]Woo PC，Lau SK，Teng JL，et al. Association of Laribacter hongkong gensis in community-acquired gastroenteritis with travel and eating fish：amulticentre case-control study[J]. Lancet，2004，36（23）：1941-1947.

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（收稿日期：2012-08-02）