鸡传染性鼻炎血清分离试验

孙晓媛 张旭 王赢

中图分类号：Ｓ８５８．３１文献标识码：B文章编号：１００７－２７３Ｘ（２０12）09-0020-02

鸡传染性鼻炎（ＩＣ）是由副鸡嗜血杆菌引起的鸡的一种急性或亚急性上呼吸道疾病，其特征是眼结膜和鼻黏膜发炎、流泪、流鼻涕、打喷嚏，脸部水肿和眶下窦肿胀，有时伴有下呼吸道（气管和气囊）的炎症。

该病的病理变化主要是面部、眼睑、肉髯明显水肿，有时眼、鼻流出恶臭的黏性、脓性分泌物，并在鼻孔周围形成痂皮。鼻腔和鼻窦黏膜呈急性卡他性炎，充血肿胀，表面覆有大量黏液、窦内有渗出物凝块，逐渐成为干酪样坏死物。常见卡他性结膜炎，结膜充血肿胀，脸部及肉髯皮下水肿。发生结膜炎时，结膜充血肿胀，严重的可引起眼睛失明。鼻窦、眶下窦内积有多量的黄色干酪样物。气管和支气管可见渗出物，严重者因干酪样物质阻塞呼吸道而造成肺炎和气囊炎。育成鸡发病死亡较少；产蛋鸡输卵管内有黄色干酪样分泌物，卵泡松软、血肿、坏死或萎缩，引发腹膜炎；公鸡睾丸萎缩。

１材料与方法

１．１试验材料

１．１．１病料来源 发病鸡来自锦州巿某种鸡场。用棉拭子采集眶下窦及气管病样。

１．１．２实验动物 １月龄健康鸡（１２只）购自辽宁医学院实验动物中心。

１．１．３血清样品锦州市发病鸡场的疑似病鸡采集血清。

１．１．４试剂邻苯二酚、琼脂粉、无水乙醇、酚、氯仿、吐温－２０等为分析纯。

１．２试验方法

１．２．１临床观察观察发病鸡群临床症状，同时对病死鸡进行剖检，观察其病理变化，详实记录。

１．２．２病料接种染色镜检将采集的病鸡眶下窦及气管病料分别划线接种于鸡血清肉汤琼脂及巧克力琼脂上，用ＣＯ２培养箱３７℃培养３６ｈ，挑选灰白色、针尖大小菌落进行纯培养，同时涂片，革兰氏染色，镜检。

１．２．３动物试验将纯化的菌落接种于鸡血清肉汤中培养２４ｈ，用肉汤培养物接种5只１月龄健康鸡（未免疫鸡），每只鸡眶下窦注射０．２ｍＬ（约２×108 ＣＦＵ／ｍＬ），同时设对照组。观察鸡的临床表现，对有典型症状的鸡，无菌采集眶下窦病样接种鸡血清肉汤琼脂，进行细菌分离培养。

１．２．４鸡胚接种试验培养的菌落接种于鸡血清肉汤中培养２４ｈ，用肉汤培养物接种10只８日龄健康鸡胚卵黄囊，每只接种０．１ｍＬ，同时设对照组，接种后置孵化箱继续孵化。每６ｈ照检１次，鸡胚死亡后置４℃冷藏２４ｈ，采集尿囊液和卵黄囊液，分别接种血琼脂，进行细菌分离培养。

１．２．５血清平板凝集试验在洁净载波片上分别滴加０．０５ｍＬ的Ａ、Ｂ、Ｃ 3个血清型的标准抗原，再分别加０．０５ｍＬ被检血清，同时设抗原对照、阳性、阴性血清对照。加样后用牙签搅匀，使抗原与血清充分混合，以３～５ｍｉｎ出现凝集者为阳性，反之为阴性。

１．２．６病原菌分离培养将窦内物于血琼脂平板培养基上作平行划线接种，再用葡萄球菌与原先的划线作垂直交叉接种，CO2培养箱３７℃培养２４～４８ｈ，观察结果。

２结果与分析

２．１培养特性及细菌形态

从眶下窦和气管病样中均分离到革兰氏阴性的小球杆菌，有的呈两极着色、单个、成对或呈短链状排列，菌落在巧克力琼脂上为灰白色、边缘整齐、细小露滴样菌落。在鸡血清肉汤琼脂平板上为灰白色、半透明、边缘整齐的针尖大小菌落，符合副鸡嗜血杆菌的菌落特征。

２．２动物试验

试验鸡接种４ｄ后出现流鼻液等发病症状，８ｄ后，５只鸡出现面部肿胀，呼吸困难，对照组鸡正常，从感染发病鸡的眶下窦病样品中分离到该菌。

２．３鸡胚接种试验

接种３６ｈ后，１０只胚中有３只死亡，４８ｈ后，１０只胚全部死亡，死胚呈全身弥漫性出血，尤以头部出血严重，对照组鸡胚正常，未见死亡。从死亡鸡胚的尿囊液中均分离到该菌，说明该菌对鸡胚有较强的致病力。

２．４血清平板凝集试验

血清检测结果为Ｈｐｇ血清Ａ型。

２．５病原菌分离培养结果

在葡萄球菌菌落附近可见许多无色透明针尖大小露珠样菌落，呈卫星现象。

３小结与讨论

本试验对所分离的菌株通过涂片、染色、镜检、分离培养、动物试验、鸡胚接种试验、血清平板凝集试验及病原菌分离培养，确认该菌为副鸡嗜血杆菌。所分离的副鸡嗜血杆菌菌株血清检测结果为Ｈｐｇ血清Ａ型。在生产实际中，应采取以下措施进行防范。

３．１免疫接种

应用副鸡嗜血杆菌菌苗预防该病有一定效果。目前国内已研制出含Ａ型和Ｃ型副鸡嗜血杆菌的二价油乳剂灭活疫苗使用效果较好。种鸡和蛋鸡一般采用二次免疫，第一次在３０～４０日龄、第二次在１１０～１２０日龄接种，可以保护鸡群度过整个产蛋周期。副鸡嗜血杆菌各血清型之间不存在交叉免疫保护或交叉保护性很弱，故最好选用本场或本地区分离的菌株来制作疫苗。

３．２饲养管理

鸡舍要注意防寒防湿，通风良好，鸡群不能过分拥挤，搞好鸡舍内外清洁卫生，保持用具干净。注意饲料的营养全价，并多喂一些富含维生素Ａ的饲料。不要从外场购入带菌鸡。鸡群中一旦发现病鸡应及时隔离治疗。病鸡康复后可能成为长期带菌者，不能留作种用，应与健康鸡群分开饲养或淘汰处理，以免传播病菌。