下丘脑—垂体—肾上腺轴在类风湿关节炎伴发抑郁症中的变化

侯秀娟，朱跃兰*，郑 琴

(1.北京中医药大学附属东方医院，北京 100078；2.北京中医药大学第三附属医院，北京 100029 )

类风湿关节炎(Rheumatoid athritis,RA)患者常伴发抑郁症，类风湿关节炎伴发抑郁症是指类风湿关节炎发生后引发的抑郁症，属于继发性抑郁症，RA伴发抑郁症已受到重视。通过以往工作并结合文献总结得出,下丘脑—垂体—肾上腺(HPA)轴在类风湿关节炎及抑郁症的发病过程中都起到一定的作用,本文就HPA轴在RA伴发抑郁症中的作用进行了一些探索性的研究，现报告如下。

1 实验材料

1.1 动物 健康清洁级雌性Wistar大鼠32只，体质量200～220 g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供。

1.2 试剂 牛Ⅱ型胶原购于Sigma 公司，完全弗氏佐剂由北京厦斯康特生物技术中心提供。ACTH放射免疫试剂盒，美国洛杉矶DPC公司；COR放射免疫试剂、CRH试剂盒：中国海军总医院放射免疫中心。

2 实验方法

2.1 动物分组 大鼠正常饲养1 周后，用旷野试验进行行为评分，选择评分相近的大鼠，随机分为4组，每组8 只。正常组：每笼4 只饲养，正常饲养；模型组：每笼1只饲养，牛Ⅱ型胶原诱导关节炎模型后1周给予慢性不可预知的温和应激方法；类风湿关节炎组(类风关组)：每笼4只饲养,牛Ⅱ型胶原诱导关节炎模型后正常饲养；抑郁组：每笼1只饲养，与模型组同时给予慢性不可预知的温和应激方法。

2.2 造模方法

2.2.1 牛Ⅱ型胶原诱导关节炎模型[1]将10 mg牛Ⅱ型胶原溶解于0.1 mol/L乙酸，此溶液与等量的完全弗氏佐剂(CFA)溶液混合，制备成牛Ⅱ型胶原终浓度为1 mg/mL的混合物，然后用注射器反复抽吸，直到混合物完全充分乳化，取此混合物于大鼠左足底皮下按0.1 mL/只注射，共含Ⅱ型胶原100 μg/只，压迫注射部位使乳化物完全吸收。

2.2.2 慢性不可预知的温和应激方法[2]将大鼠予以夹尾1 min、禁水24 h、禁食24 h、45 ℃环境5 min、昼夜颠倒24 h、水平振荡30 min (160次/min)、4 ℃冰水游泳5 min等7种方法刺激。大鼠每天接受1种刺激，7种刺激每周各进行1次，共安排3周。

2.2.3 孤养法 将动物单笼饲养[2]。

2.3 指标测定 所有大鼠快速断头，取下丘脑、垂体、肾上腺，立即称重后放入煮沸的生理盐水中煮沸，然后加冰醋酸于匀浆器中匀浆提取,再用1N的NaOH 0.5 mL中和,4 ℃离心后，取上清液测定,用γ计数仪测定下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)含量、垂体促肾上腺皮质激素(ACTH)含量、肾上腺中的皮质酮(COR)含量。

3 结果

3.1 下丘脑中CRH含量变化 与正常组比较，抑郁组、类风关组及模型组含量均显著升高(P<0.01)；与抑郁组比较，类风关组及模型组含量显著升高(P<0.01)；与类风关组比较，模型组显著升高(P<0.01)，见表1。

3.2 垂体ACTH含量变化 与正常组比较，抑郁组、类风关组及模型组含量均显著升高(P<0.01)，与抑郁组比较，类风关组含量含量升高，但无统计学意义(P>0.05)，模型组含量升高，差异有统计学意义(P<0.01)；与类风关组比较，模型组含量升高,有统计学意义(P<0.01)，见表1。

3.3 肾上腺COR含量变化 与正常组比较，抑郁组、类风关组及模型组含量均显著升高(P<0.01)；与抑郁组比较，类风关组含量升高，但无统计学意义(P>0.05),模型组含量升高，有统计学差异(P<0.01)；与类风关组比较，模型组含量升高，差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。

表1 各组大鼠CRH、ACTH及COR含量变化比较(±s,n=8) ng/mL

4 讨论

HPA轴是指下丘脑、腺垂体和肾上腺皮质3者之间的相互调控关系，是实现神经—内分泌—免疫3个系统构成网络调节的重要部分。CRH主要由丘脑下部室旁核小细胞神经元分泌，促垂体前叶细胞合成、释放ACTH,后者进而促进糖皮质激素的分泌,而糖皮质激素则通过负反馈效应调控着CRH和ACTH的释放,构成了在功能上相互联系、相互调控、相互制约的HPA轴。

研究[3]表明，类风湿关节炎存在下丘脑—垂体—肾上腺轴的改变。RA患者疾病活动程度与血浆皮质醇水平有明显联系，严重RA患者血浆皮质醇的昼夜变化紊乱，且皮质含量增高。神经内分泌学研究[4]提示，抑郁症发病常伴有内分泌功能的改变，特别是HPA的功能改变。本研究中，抑郁模型大鼠及类风湿关节炎模型大鼠均表现为CRH、ACTH及COR含量明显升高，与文献报道一致。

类风湿关节炎伴发抑郁症作为继发性抑郁症的一种，其病理过程也存在HPA轴改变的参与，本实验的结果显示，类风湿关节炎伴发抑郁症模型大鼠表现为CRH、ACTH及COR含量的明显升高。分析其原因，RA病理过程中分泌大量的细胞因子，它们通过自分泌、旁分泌与自身受体结合的方式在自身细胞，邻近细胞(旁分泌)及远处细胞(内在分泌)之间的信息网络中起信息传递递质的作用，在RA的发病中具有促炎、抑炎或刺激、抑制的正负反馈的免疫调控作用。当免疫调节功能失调，致炎细胞因子占优势时，除通过炎症反应、免疫反应的调节影响关节局部基质代谢，导致局部关节软骨和骨质的破坏出现关节功能障碍外，通过其在脑内特定脑区高表达受体作用于中枢，主要是在海马和下丘脑，作用于下丘脑，可激活HPA轴，进而影响脑内NE和5-HT功能，导致单胺递质功能降低；而海马是糖皮质激素受体的高表达区，激活的HPA轴导致糖皮质激素的高分泌，可作用于海马，影响海马功能[5]，最终共同导致抑郁的发生。如IL-1能直接刺激下丘脑室旁核细胞分泌促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)，激活HPA轴，最终引起皮质醇的分泌。课题组以往研究[6]结果也证实，类风湿关节炎伴发抑郁症存在上述细胞因子的高分泌。

以上研究结果提示，对于RA伴发抑郁症患者，早期诊断和干预，在治疗类风湿药物基础上早期应用抗抑郁药物，二者可联合通过使激活的炎症反应系统标志物正常化，减少前炎症细胞因子的释放，减弱前炎症因子对中枢神经递质的作用以及细胞因子对神经内分泌的作用达到抗抑郁作用，亦有助于类风湿关节炎病情的控制。

[1]赵慧,顾立刚,陈小军,等.桂枝芍药知母汤对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素1β活性的影响[J].中国中医药信息杂志,2005,12(11):27-29.

[2]唐启盛,裴清华,侯秀娟,等.脑卒中后抑郁状态动物模型的建立[J].北京中医药大学学报,2004,27(3)：33-36.

[3]魏伟,李晓辉,张洪泉,等.抗炎免疫药理学[M].北京：人民卫生出版社.2005.

[4]王秀卿,黄庆军.下丘脑—垂体—肾上腺轴在抑郁症发病中的作用[J].现代中西医结合杂志,2004,13(10)：1383.

[5]马强.应激对海马的影响及损伤机理的研究进展[J].解放军预防医学杂志,2000,18(6):456-459.

[6]郑琴,朱跃兰,侯秀娟.类风湿关节炎伴发抑郁症大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α的变化及中药干预作用[J].中医药学报,2009,37(5)：32-34.