柱前衍生高效液相色谱法测定通络下乳口服液中牛磺酸的含量

陈瑞瑾

广西古方药业有限公司，广西 南宁 530221

通络下乳口服液处方为鸡血藤、章鱼、木瓜、王不留行、通草，生姜，龙眼肉、大枣。功能为益气补血，通络下乳。用于改善妇女产后气血虚弱引起的无乳，少乳，乳汁清稀等。为了更好的控制该口服液的质量，保证药品使用安全、有效，本文采用HPLC法测定了牛磺酸的含量。

1 仪器与试药

仪器 LC－10AP型高效液相色谱仪 (日本岛津公司);SPD－10Avp紫外－可见检测器;LC－10ATVP7725(i)型手动进样器;色谱柱为Kromgsil 100－5c18(150×4.6mm);威玛龙色谱数据工作站;kh－250db型超声处理器。

试药 邻苯二甲醛，乙硫醇，色谱甲醇，水为超纯水，牛磺酸对照品 (中国药品生物制品检定所，批号:111616－200301)。

样品 通络下乳口服液 (购自A厂，共3批)。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇—0.05mol/L醋酸钠溶液 (60:40)为流动相，检测波长为330nm，流速为1.0ml/min，进样量为10μl;柱温为25℃。理论板数按牛磺酸峰计算应不低于2000。在上述色谱条件下，供试品中牛磺酸能完全分离，对照品与阴性对照品溶液中没有峰重叠，色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取牛磺酸对照品，加水制成每1ml中含0.04mg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 精密吸取样品溶液5ml于100ml容量瓶内加水定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 测定法 衍生试剂配制:称取0.1g邻苯二甲醛用10 ml甲醇溶解，加0.1 ml乙硫醇，0.4mol/L硼酸钠缓冲液(PH=9.4)定容至100 ml。(用时新配，保存48小时)

精密吸取对照品工作液及样品溶液各0.5ml，分别加衍生剂0.5ml，摇匀，在4min内取混合液10ul注入液相色谱仪，测定，即得。

2.5 线性关系考察 精密吸取牛磺酸对照品溶液以10.00、20.00、30.00、40.00、50.00mg/L按拟定的色谱条件测定峰面积，以峰面积分值为纵坐标，牛磺酸含量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程:Y=16466X+1051，r=0.9999，结果表明，牛磺酸进样浓度在10～50mg/L范围内，进样浓度与牛磺酸峰面积呈良好线性关系。

2.6 精密度试验 分别精密吸取牛磺酸对照品溶液和供试品溶液 (批号20110901)各10μl，重复进样5次，记录色谱图，测定牛磺酸面积，0.42、0.43、0.41、0.42、0.41 mg/ml，其RSD为1.4%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 (批号:20110901)10μl，分别于0、4、8、12、16、24小时进行测定，其峰面积RSD为1.6%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.8 阴性对照试验 按处方比例取处方中缺章鱼，照制法制取阴性样品。取阴性样品5ml，并按供试品溶液提取方法制成阴性对照溶液，测定，在上述色谱条件下，缺牛磺酸阴性对照溶液，在牛磺酸谱峰处无干扰峰出现，表明对被测成分无干扰。

2.9 重复性试验 取同一批号供试品 (批号20110901)共5份，精密量取，按样品测定项下方法进行提取，测定，结果测得平均值0.42mg/ml，RSD%=1.4%，表明重复性良好。

2.10 加样回收率试验 取已测知含量的供试品 (批号20110901，含量:0.42mg/ml)6份，每份精密量取样品(精密吸取样品溶液5ml于100ml容量瓶内加蒸馏水定容至刻度。摇匀，滤过，取续滤液，即得)1ml，精密加入0.03192mg/ml牛磺酸对照品溶液1ml，按样品测定项下方法进行，并按上述色谱条件依法测定，计算回收率，结果见表1。

2.11 样品中牛磺酸的含量测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液3批，按上述色谱条件测定，以外标法计算，结果见表2。结果表明，本法具有良好的回收率。

表1 加样回收率试验

表2 牛磺酸含量测定

3 讨论

3.1 流动相的选择 流动相组成及配比选择:参考文献［1－2］，曾试用甲醇－磷酸盐缓冲液溶液和乙腈－水的不同配比，摸索液相色谱的最佳测定条件。试验结果表明，选用甲醇—0.05mol/L醋酸钠溶液 (60:40)，牛磺酸出峰时间适宜，与其它共存成分分离度大于1.5，达到基线分离，峰型和分离度较好，阴性对照无干扰。

3.2 波长的选择 采用330nm作为检测波长;文献［2］(HPLC法测定食品中牛磺酸的含量)采用330nm作为检测波长;故选择330nm作为本品的检验波长。

3.3 样品提取溶剂的选择 精密称取供试品10ml分别加水、流动相、甲醇30ml，制备供试液。结果表明，三种溶剂测得结果无明显差别，但是用流动相和甲醇做提取溶剂所得杂质峰较多，故采用水为提取溶剂。

［1］国家药品监督管理局标准 (试行)WS－5583(B－0583) －2002

［2］GB/T5009.169－2003食品中牛磺酸含量测定［S］.

［3］谢继红，陈玉仁等.高效液相色谱柱前衍生化法测定牛磺酸含量［J］.色谱，12(4).