精浆锌含量与精液质量及体外受精结局的相关性

(广西医科大学第一附属医院，南宁 530021)

精浆中的锌由前列腺分泌，其作为精浆中的一种微量元素，对精子的发生、成熟和获能具有一定的作用。目前，国内外对精浆锌与精液质量关系的研究结果尚不一致。2011年7～11月，我们采用5-Br-PAPS显色法对81例不育男性患者进行精浆锌含量检测，并分析精浆锌含量与精液常规参数、不成熟精子率及体外受精(IVF)结局的相关性。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取因输卵管因素致不孕在我院接受IVF-ET诊疗的81对夫妇，男(31.73±3.52)岁，(29.31 ±3.31)岁;原发性不育30 例，继发性不育51例。纳入标准:所有夫妇均为初次接受常规IVF助孕，女方年龄≤35岁，除单纯输卵管梗阻外，所有入选女性经体检、妇科超声及内分泌、血生化等检查未发现其他可能影响生育的疾病。入选女性取卵子均不少于5枚，男性均能够提供新鲜精液。术前精液常规检查按照WHO《人类精液检查与处理实验室手册》(2011年，第五版)标准［1］，排除严重少弱精症。

1.2 精液检查 男性禁欲(5.49±1.37)d，留取0.5 ～1 mL 精液，3 000 g离心10 min，留取精浆置于－20℃冰箱储存。参照文献［2］处理方法行精液检查。按照WHO《人类精液检查与处理实验室手册》标准［3］，测定以下参数判断精液质量:①精浆锌含量:采用5-Br-PAPS显色法，严格按照试剂盒说明书操作，在配有560 nm波长滤光片的酶标比色仪上进行检测。通过比较吸光度值，拟合标准曲线，从标准曲线上读取标本中锌的浓度。精浆锌总量(μmol)=锌浓度×精液总体积(mL)。②精液常规参数:包括精液量、精子密度，精子活率、精子正常形态率(依照WHO实验室标准，采用Diff-Quik快速染色法染色，在光学显微镜油镜(×1 000)下，每片读取200个精子，用Krüger's严格标准法进行判别，计数正常形态精子所占比率。③不成熟精子率:采用经密度梯度离心法检测精子核成熟度。高倍显微镜下观察，至少计数200个精子。核蛋白不成熟的精子染紫蓝色或紫色，核蛋白成熟的精子染红色。计数头部染紫蓝色和紫色的精子(不成熟精子)。不成熟精子率=［(精子头部染紫蓝色精子+染紫色精子)/200］×100%。

1.3 IVF及结局判断 女性黄体中期应用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)达菲林降调节，达降调节标准后常规应用促性腺激素启动剂量，用Gn 4～5 d后根据阴道超声监测卵泡数目、大小，行血清激素测定，根据检测结果调整Gn用量。超声监测到3个以上优势卵泡直径≥18 mm时当晚即肌注绒促性素10 000 U，34～36 h于阴道超声引导下行穿刺取卵术。参照文献［2］分析胚胎质量，IVF受精率=受精胚胎数/获卵数×100%，卵裂率=卵裂数/受精数×100%，优胚率=优胚数/卵裂数×100%。

1.4 相关性分析 采用SPSS13.0统计软件，计量资料以±s表示，采用Spearman相关性分析法分析精浆锌含量与精液密度、活率、正常形态率、成熟精子率和IVF结局的相关性。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 精液指标 精浆锌含量(2.13±1.01)μmol。精液量(4.15 ±1.48)mL，精液密度(92.52 ±55.18)106/mL，精子活率(62.64 ±14.88)%，正常形态率(7.39 ±3.48)%;不成熟精子率 (35.16 ±10.87)%。

2.2 IVF 结局 IVF 受精数(9.68 ±4.40)枚，卵裂数(9.40 ±4.35)枚，优胚数(5.83 ±3.73)枚。

2.3 相关性分析 Spearman相关分析示精浆锌含量与精液密度、精子活率、IVF受精数呈显著正相关(r=0.49、0.305、0.289，P 均 ＜0.05)，与不成熟精子率呈负相关(r= －0.278，P ＜0.05)，与精子正常形态率及IVF卵裂率、优胚率无相关性(P均＞0.05)。

3 讨论

近年来随着男性不育患者逐年增多，精浆锌含量与男性不育的关系逐渐成为研究的热点之一。精液中的锌主要来源于前列腺，在精子发生、成熟、获能、顶体反应和受精过程中起重要作用。

本文结果显示，精浆锌含量与精子密度、活率呈正相关，说明适量增加精浆锌含量可以提高精子的密度和活率。其可能原因为:①精浆中的锌通过干扰垂体分泌促性腺激素降低性腺功能从而使精子生成减少［3］。②锌参与生殖系统多种酶的合成，这些酶可延缓精子细胞膜的脂质过氧化，维持细胞膜的通透性，使精子具有良好的活力，故缺锌可降低相关酶的活性，进而影响精子发生过程［4］。但罗胜萍等［5］发现，精液中锌含量过高对精子也有明显的毒性作用，过量的锌及其氧化物可抑制精子的酵解及氧化过程，致使精子活力下降和死精。因此，在男性进行补锌治疗的同时应监测精浆锌含量变化。本研究结果显示，精浆锌与精子正常形态率无相关性，说明精浆锌含量并不影响精子的正常形态，这与冯播等［6］研究结果相同。

精子核蛋白的主要成分为鱼精蛋白，鱼精蛋白富含精氨酸和半胱氨酸，一般不含赖氨酸，人类精子发生和成熟过程中，经历核蛋白组型转换过程，即富含精氨酸和半胱氨酸的鱼精蛋白取代富含赖氨酸的组蛋白，苯胺蓝可与富含赖氨酸的组蛋白结合而使不成熟的精子染成蓝色，因此，用苯胺蓝染色可检测精子的核成熟度。本研究发现，精浆锌含量与不成熟精子率呈负相关，说明精浆锌能促进精子核的成熟。可能是因为精子在附睾中成熟时，鱼精蛋白的巯基间形成二硫键，使精子核染色质趋于稳定，同时在前列腺液锌离子的作用下，余下的游离巯基间形成共价键，促进使精子核成熟［7］。

目前，国内外对精浆锌与IVF结局的关系报道相对较少。本文结果显示，精浆锌含量与IVF受精数呈正相关，说明适量增加精浆中的锌含量会提高受精数，可能是因为一定浓度的锌使精液密度和活率相应的增加，同时在排精过程中，精子吸收精浆中的锌与细胞核染色质的巯基结合，从而有利于受精。但本研究还发现，精浆锌含量与卵裂率、优胚率并无相关性，说明精浆锌对受精后的胚胎质量并无影响。

综上所述，精浆锌含量与男性不育密切相关，适量的精浆锌能够促进精子核成熟，其含量降低将影响精子的发生、发育和成熟，引起精液密度和活率下降，从而使受精数降低。精浆锌含量检测对促进男性不育的诊断及治疗有一定指导作用。

［1］谷翊群，陈振文，卢文红，等.世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册［M］.北京:人民卫生出版社，2011:191-194.

［2］李娜，江莉.精子DNA损伤对体外受精—胚胎移植结局的影响［J］.广西医学，2011，33(3):257-260.

［3］崔艳国，张立新，董丽萍，等.男性低生育人群精浆锌、酸性磷酸酶及血清性激素水平及意义［J］.山东医药，2010，50(25):85-86.

［4］Elzanaty S.Association between age and epididymal and accessory sex gland function and their relation to sperm motility［J］.Arch Androl，2007，53(3):149-156.

［5］罗胜萍，吴蓉，刘自刚.男性不育患者精浆锌含量的变化分析［J］.中国实验诊断学，2009，13(6):828-829.

［6］冯播，左阳花.不育男性精浆果糖及精浆锌含量的研究［J］.中国优生与遗传杂志，2010，18(7):117-118.

［7］郭应禄.男性不育症［M］.北京:人民军医出版社，2003:92.