戴祥宇 (华南农业大学动物科学学院 广州 510642)
新城疫是危害我国养鸡业最严重的疫病之一,发病时常因其他病原菌如大肠杆菌继发感染,使病情加重,死亡率显著增加。2011年11月2日,山东省诸城市某养殖户饲养商品代AA肉雏鸡5000羽。平地饲养,7日龄新、支二联弱毒疫苗2倍量滴鼻;14日龄鸡传染性法氏囊病三价苗滴口。18日龄鸡开始发病,呼噜,排黄白色或黄绿色稀便,死亡30~50只/d。当地兽医诊断为鸡传染性法氏囊病,用高免蛋黄液治疗未见效,继续死亡并逐渐增多,1周内死亡460只。11月27日来信得药业有限公司技术服务中心就诊,通过剖检及实验室检验,诊断为鸡新城疫并发大肠杆菌病。
雏鸡精神沉郁,羽毛松乱、无光泽,垂头缩颈,食欲减退,病鸡张口伸颈,气喘,呼吸困难,有呼噜声,咳嗽,下痢,排出黄白色或黄绿色稀粪,少数病例腹部膨大,个别鸡出现扭头转圈等神经症状。
喉头、气管黏膜充血、出血,皮下组织呈广泛性出血,腺胃乳头明显出血,有的肌胃角质层下黏膜有条纹状出血,各段肠管充血、出血,十二指肠后段、空肠中部及回肠起始部淋巴组织集中处肠黏膜有枣核状肿胀和轻度出血,盲肠扁桃体充血、出血。直肠黏膜呈条纹状出血。心包内积有淡黄色含纤维素性液体,心包膜混浊增厚。肝肿大、边缘钝圆,整个肝脏被一层灰白色纤维素性薄膜包裹。气囊膜增厚,并有干酪样渗出物。个别腹腔内有数量不等的腹水。
3.1 病毒分离鉴定 无菌取气管、肺组织病料,将病料置于消毒的匀浆器内,加入2倍体积的灭菌生理盐水,研磨成乳剂,冻融3次,静置取上清液,加入青、链霉素各1000IU/ml,置37℃温箱作用30~60min。以上清液0.1ml接种于9~10日龄鸡胚尿囊腔内。接种后的鸡胚放在37℃温箱内继续孵育,并检查鸡胚1次/d。鸡胚于48~72h死亡,鸡胚尿囊液有血凝性,血凝价为1∶32~ 1∶64。血凝性被新城疫阳性血清所抑制。
3.2 血清学检查 于发病后2周采集发病鸡群血清12份,按照《新城疫检疫技术规范》,采用微量血凝抑制(HI)试验检测新城疫抗体,结果12份血清的HI抗体效价值从4log2~10log2不等,显著高于正常鸡群,有较大的离散度,符合新城疫患病鸡群的特点。
3.3 病理组织学检查 取肠管、脾、脑于10%福尔马林固定,石蜡切片,HE染色,光镜观察。肠管呈出血性卡他性炎症,黏膜上皮细胞坏死脱落,固有层淋巴组织坏死崩解、出血;脾白髓淋巴细胞坏死,红髓充血、出血;脑有轻度病毒性脑炎病变,血管充血,血管周围有少量淋巴细胞浸润,神经元变性坏死,并见卫星现象和噬神经现象。肝表面附着丝网状纤维素渗出物,肝细胞变性坏死、出血,血管充血,血管周围大量异嗜性粒细胞浸润。符合新城疫、大肠杆菌感染的病理组织学病变特征。
3.4 细菌学检查 无菌取肝脏、脾脏触片,美蓝染色镜检,见有单个或成对、两端钝圆的蓝色短杆菌。无菌取肝脏、脾脏接种鲜血琼脂37℃培养24h,长出中等大小有溶血性菌落,分离纯化后接种肉汤、普通琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂37℃培养24h,肉汤均匀混浊、有菌环、管底有灰白黏性沉淀,营养琼脂上长出圆形、隆起、光滑湿润、半透明、直径2~3mm、边缘整齐的乳白色菌落,麦康凯琼脂上长出圆形、隆起、光滑湿润、直径2mm、边缘整齐的粉红色菌落,伊红美蓝琼脂上长出紫黑色带金属光泽菌落。分离菌悬滴检查,有运动性,涂片染色镜检,见有大量单个存在、偶有2~3个排列、无荚膜、无芽孢、两端钝圆的革兰阴性短杆菌。生化试验:发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖,产酸产气,不发酵蔗糖、肌醇、鼠李糖,VP、硫化氢、尿素酶试验阴性,靛基质、甲基红试验阳性。经鉴定,分离菌为大肠埃希菌。
3.5 药敏试验 分离菌用纸片法做药敏试验,结果该菌对左旋氧氟沙星、硫酸新霉素、阿米卡星高敏,对强力霉素、诺氟沙星、卡那霉素中敏,对青霉素、链霉素、土霉素耐药。
根据流行病学、临诊症状和病理变化初步诊断为鸡新城疫并发大肠杆菌病。经病原学、血清学及病理组织学实验室诊断最终确诊。
在初步诊断的基础上,迅速用新城疫C30苗4倍量紧急饮水免疫;据药敏实验选择硫酸新霉素10g+左氧氟沙星10g/100kg饮水,连用4d,使疫情很快得以控制。给养殖户挽回了经济损失。