3种酒糟菌糠三萜类成分含量比较

王 松，殷中琼，周瑞平，王 涛*

（1.宜宾学院 生命科学与食品工程学院，四川 宜宾 644000；2.宜宾学院 发酵资源与应用四川省高校重点实验室，四川 宜宾 644000；3.四川农业大学 动物医学院，四川 雅安 625014；4.四川宜宾市叙府酒业有限公司技术中心，四川 宜宾 644000）

酒糟栽培食用菌是合理利用酒糟的有效途径之一[1]。以酒糟为主要原料栽培食用菌后的培养基即为酒糟菌糠。菌糠中残留大量的菌丝体，富含蛋白质、氨基酸、维生素及一些生物活性物质[2-5]。三萜类化合物是天然物质中数量最多的一类化合物，广泛存在于自然界，具有抗肿瘤、保肝、镇痛、抗氧化等生理活性，是被人们所关注的重要活性物质之一。已在许多食用菌的子实体、孢子和菌丝体中提取出三萜类化合物组份且被证实具有抗肿瘤、免疫调节等作用[6-8]。

为了比较研究不同食用菌培养后以及在不同阶段的酒糟菌糠的三萜含量的差异，对茶树菇菌糠（出菇）、茶树菇菌糠（未出菇）、鸡腿菇菌糠（未出菇）这三种酒糟菌糠进行了三萜含量的测定，为酒糟菌糠饲料的进一步开发奠定基础。

1 材料与方法

1.1 酒糟菌糠

酒糟菌糠来源：茶树菇菌糠（出菇）、茶树菇菌糠（未出菇）、鸡腿菇菌糠（未出菇），由四川宜宾叙府酒业有限公司食用菌生产基地提供。

将鲜酒糟9.2kg、花生壳0.6kg、玉米粉0.27kg、蔗糖0.1kg、石膏0.1kg、石灰0.3kg混合，以配制培养基。在灭菌后的培养基上分别接种茶树菇5号、鸡腿菇特白。茶树菇5号培养两个月后，采摘第一茬菇后的菌糠为茶树菇菌糠（出菇）；茶树菇5号培养大约40d，菌丝体长满后的菌包为茶树菇菌糠（未出菇）；鸡腿菇特白培养大约30d，菌丝体长满后的菌包为鸡腿菇菌糠（未出菇）。

酒糟菌糠的处理：酒糟菌糠在105℃烘箱中烘15min，然后降到60℃，烘干6h，冷却后粉碎过40目筛。

1.2 仪器与试剂

RE-2000旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；ESJ200-4电子天平（沈阳龙腾电子有限公司）；LG-04C四两装高速中药粉碎机（浙江瑞安市百信药机器厂）；UV-2102PC紫外可见分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司）；HH-2数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）等。

齐墩果酸对照品（中国生物制品检定所），高氯酸、冰醋酸、香草醛、乙酸乙酯、甲醇等均为分析纯。

1.3 方法

1.3.1 提取物的制备

分别称取茶树菇菌糠（出菇）、茶树菇菌糠（未出菇）、鸡腿菇菌糠（未出菇）粉末20g，分别加入200mL石油醚，用索氏提取12h，得提取液。将提取液放置于通风橱内12h，使石油醚挥发完全。然后将剩余物50℃真空干燥30min，称取干燥物质量，计算得率。

1.3.2 提取物中三萜含量的测定[9]

香草醛-高氯酸比色法测定三萜含量。以齐墩果酸作为标准样品。

1.3.3 标准曲线的制作

将齐墩果酸用甲醇配成0.2mg/mL的标准溶液，精确吸取该液0、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL和0.8mL分别置于具塞磨口试管中，水浴蒸干，溶剂挥干后，准确加入0.4mL 5%香草醛冰醋酸溶液（现配现用）和1.6mL高氯酸，混匀。然后将8支试管同时放入70℃恒温水浴锅中水浴15min，取出后冷却至室温。最后向每支试管中各加入8mL乙酸乙酯，用紫外分光光度法检测。

1.3.4 三萜含量测定方法

分别将茶树菇菌糠（出菇）、茶树菇菌糠（未出菇）、鸡腿菇菌糠（未出菇）石油醚提取物溶解在50mL甲醇中，再将茶树菇菌糠（未出菇）甲醇溶液做1:10稀释，茶树菇菌糠（出菇）、鸡腿菇菌糠（未出菇）做1:5稀释。按标准曲线的测定方法，测出其在560nm下的OD值，根据标准曲线计算各代谢提取物中三萜含量，并计算三萜的得率。

2 结果与分析

2.1 酒糟菌糠提取物的得率

茶树菇菌糠（出菇）、茶树菇菌糠（未出菇）、鸡腿菇菌糠（未出菇）的石油醚提取物的得率分别为0.31%、1.43%、0.54%，其中茶树菇菌糠（未出菇）石油醚提取物的得率最高。

2.2 齐墩果酸标准曲线

以齐墩果酸浓度为横坐标，吸光度测定值为纵坐标，绘制标准曲线见图1。标准曲线回归方程为：y=3.4321x-0.0131，R2=0.999 2。结果表明，本品在40μg/mL～160μg/mL范围内线性关系良好。

图1 齐墩果酸标准曲线Fig.1 Standard curve of oleanolic acid

2.3 酒糟菌糠的三萜含量

茶树菇菌糠（出菇）、茶树菇菌糠（未出菇）、鸡腿菇菌糠（未出菇）三种酒糟菌糠三萜类物质含量OD值测定结果如图2所示，根据其不同的浓度稀释倍数，对应标准曲线，可计算出三种酒糟菌糠甲醇溶液浓度分别为0.25mg/mL、0.85mg/mL、0.51mg/mL。则三种菌糠提取物中的三萜含量分别为20.39%、14.82%、23.50%，进一步计算出三萜得率分别是0.06%、0.21%、0.13%，其中茶树菇菌糠（未出菇）的得率最高。

图2 三种酒糟菌糠三萜含量Fig.2 The triterpenoid content to three kinds of distiller's grains-based spent mushroom substrate

3 讨论

大量研究表明，食药用菌类菌丝体和子实体营养成分差异不明显，都含有丰富的营养物质和菌体多糖等相关活性物质[10-12]。未出菇的酒糟菌糠中残存大量的菌丝体，因此2种未出菇酒糟菌糠三萜含量较高。而出菇的酒糟菌糠中菌丝体较少，且出菇后，菌丝体中一部分生物活性物质转运到子实体上，导致其三萜含量较低。

同样在未出菇的条件下，茶树菇酒糟菌糠三萜含量比鸡腿菇酒糟菌糠大的多，推测可能是因为不同种类的食用菌对三萜的合成与贮藏的能力不同，在本实验的条件下，茶树菇三萜合成与贮藏能力优于鸡腿菇；也可能是因为鸡腿菇菌丝体中三萜类活性物质合成较慢，在本实验期内其含量还未到峰值[13]。

本实验研究表明，虽然含量不一，但三种酒糟菌糠都含有三萜类物质，结合我们对其他营养成分和喂饲情况的研究情况（结果另发），酒糟菌糠饲料是一种优良的饲料，其按一定的比例添加到家畜日粮中，具有良好的开发前景。

[1]何元丽，余世海，王 松，等.多粮浓香型白酒丢糟栽培猴头菌的研究[J].中国酿造，2011，30（8）：68-70.

[2]LAW WM.Removal of biocide pentachlorophenol in water system by the spent mushroom compost ofPleurotus pulmonarius[J].Chemosphere，2003，52（9）：1531-7.

[3]KRZYCZKOWSKI.Isolation and quantitative determination of ergosterol peroxide in various edible mushroom species[J].Food Chem，2009，113（1）：351-355.

[4]COLLOPY PD,ROYSE DJ.Characterization of phytase activity from cultivated edible mushrooms and their production substrates[J].J Agr Food Chem，2004，52（25）：7518-24.

[5]王西民.菌糠饲料的开发利用技术[J].北京农业，2008，2（6）：41-42.

[6]刘 华，贾 薇，张劲松.樟芝菌丝体的不同提取方法及其抗肿瘤活性的研究[J].食品与发酵工业.2008，34（12）：171-175.

[7]余素萍，张劲松，唐庆九，等.不同发酵阶段的灵芝菌丝三萜类成分与抗肿瘤作用的相关性研究[J].菌物学报，2003，23（4）：548-554.

[8]袁广峰，徐瑞雅，张树斌，等.茶薪菇培养物中粗三萜含量测定及抗氧化抗肿瘤活性研究[J].食用菌学报，2007，14（2）：41-43.

[9]帕丽达，堵年生，丛媛媛，等.比色法测定琐琐葡萄中总三萜类成分的含量[J].华西药学杂志，2002，17（6）：475.

[10]张 硕，李 明，李守勉，等.猴头菌菌丝体与子实体多糖产量相关性分析[J].安徽农业科学，2009，37（15）：6946-6947.

[11]张劲松，贾 薇，邢增涛，等.灵芝子实体和菌丝体的提取物及其各纯化组份生物活性的比较[J].菌物学报，2004，23（1）：85-92.

[12]曹文涛，张 鑫.红汁乳菇子实体与也太发酵菌丝体营养成分分析[J].贵州农业科学，2010，38（4）：80-81.

[13]黄生权，姚松君，刘翠玲，等.不同生长期的灵芝三萜含量测定及变化规律研究[J].现代食品科技，2011，27（8）：1015-1019.