DC/CIK在非小细胞肺癌中的应用进展

丛珊亭 时圣彬综述 马廷行审校

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌占80% 以上， 确诊时多数患者已属于中晚期,化疗、放疗等是治疗中晚期非小细胞肺癌的有效方法，但生存期的改善仍不理想，主要原因为局部控制困难和远处转移[1]。恶性肿瘤的发生与发展与机体的免疫功能失调密切相关,免疫系统无法识别和清除恶变和突变的细胞，致使肿瘤细胞逃逸机体免疫系统的监视和清除；同样，由于传统的放化疗对恶性肿瘤是指数性杀伤，及时清除恶性肿瘤综合治疗后的微小残留病变,最终需要动员机体的免疫功能方可达到。生物免疫治疗对提升机体免疫监视功能，杀伤体内残余肿瘤细胞起到重要作用。

1 DC

1.1 DC的生物学作用

树突状细胞(dendritic cells,DC ) 是目前功能最强的抗原呈递细胞( antigen presenting cell,APC )，在机体的免疫应答中起着重要的调控作用，是机体免疫应答的主要启动者，为其用于恶性肿瘤的治疗开辟了新的道路[2]。DC在外周组织摄取抗原后逐渐成熟，同时伴随迁移，通过淋巴管和(或)血循环进入次级淋巴器官。迁移至外周淋巴器官T细胞区的成熟DC高表达MHCⅠ类/Ⅱ类分子和共刺激分子(B7、CD40)等，能有效地将加工、处理后的抗原以抗原肽-MHC-Ⅱ类分子复合物的形式提呈给初始T细胞，并使之激活[3]。DC所具有的特性，使它们能够有效地激活T细胞和调解肿瘤特异性免疫反应[4]。肺癌细胞裂解物致敏的树突状细胞能够诱导肿瘤细胞特异性免疫反应在肺癌患者中表现出良好的临床效果[5]。肿瘤抗原致敏的DC与T细胞共培养，可增加T细胞的抗肿瘤活性[6]。

1.2 DC的临床应用

文洽先等分离患者外周血单核细胞,用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子( rhGM2CSF)和白介素24 ( rh IL24)体外诱导DC治疗晚期肺癌。7例有可评价病灶的患者中,1例部分缓解( PR) 、1例轻微缓解(MR) 、3例稳定( SD) 、2例进展(PD)[7]。施玲燕等采用静脉输注CIK细胞对43例肿瘤患者进行治疗，结果显示CIK细胞治疗肿瘤的总有效率为32.6%;治疗过程中的主要不良反应是发热,占治疗总人数的20.9%,体温37.5～38.5 ℃,发热在2 h内自动缓解[8]。

2 CIK

2.1 生物学作用

细胞因子诱导的杀伤细胞( cytokine induced killer cell,CIK)是1种高效、新型疫活性细胞,是恶性肿瘤过继免疫治疗的重要手段之一。CIK细胞是1种非MHC限制性的高效溶肿瘤细胞毒性T细胞,占外周血淋巴细胞的1%～5%。CIK细胞是人外周血单个核细胞在体外经多种细胞因子刺激后获得的一群异质性细胞,其主要效应细胞表面既有T细胞表面标志(CD3),也有NK细胞表面标志(CD56),因而兼有T淋巴细胞抗瘤活性和NK细胞非MHC 限制性杀瘤的特点[9]。Hongeng等用CIK细胞对多种肿瘤细胞株进行体外杀伤实验,研究结果表明CIK细胞对这些肿瘤细胞株的溶瘤活性在45.5%～64.5%之间,显著高于PBL的溶瘤活性( 8% ～12%)[10]。Cancer Biother Radiopharm 报道了CIK细胞联合多西紫杉醇在体内外都可明显增强多西紫杉醇对多药耐药肺腺癌细胞的抗肿瘤活性。这表明CIK细胞将适合消灭对化疗药物耐药的肿瘤细胞。如果CIK细胞与化疗联合可应用于临床治疗，可能会抵制恶性细胞的协同作用，并可能有利于克服癌症患者的多药耐药[11]。Thorne等的最新研究显示，CIK细胞与有溶瘤作用的病毒相结合能产生强大的协同抗肿瘤作用，可一定程度上解决靶向生物治疗中存在的递呈及定向等难题[12]。CD4(+)、CD25(+)调节性T细胞(Tregs)已被证明能够抑制细胞毒性T细胞介导的免疫反应。这些结果表明，调节性T细胞能抑制CIK细胞的抗肿瘤活性[13]。一项研究表明，细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)对人类肺癌细胞在体内外的抗肿瘤活性进行了评价。虽然外周血CD3(+)、CD56(+)CIK细胞在新鲜人外周血单核细胞少见，但在加入IL-2后会很快扩增。在1个30∶1的效应靶细胞比例中，CIK摧毁了98%的NCI-H460人肺癌细胞。这项研究表明，外周血CD3(+)、CD56(+)CIK细胞可作为过继免疫治疗用于肺癌患者[14]。

2.2 临床应用

CHANG PING WU 等的一项研究评估了CIK细胞联合化疗与单独化疗的临床疗效。他们将59例晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者随机分为A、B组，A组单用化疗，多西紫杉醇75 mg/m2d1，顺铂25 mg/m2d1～4，每3周为1个周期；B组多西紫杉醇75 mg/m2d1，顺铂25 mg/m2d1～4，化疗结束后第5天进行CIK细胞输注，共回输5次。A、B组的整体反应率(ORR)分别为43.3%和44.8%。疾病控制率(DCR)B组高于A组(89.7% vs 65.5%，P值=0.030)。疾病进展时间分别为4.67个月(95%CI为3.98～6.02个月)和6.65个月(95%CI为4.70～7.30个月)。中位生存时间分别为15.0个月(95%CI为11.04～18.96个月)和11.0个月(95%CI为7.88～14.1个月)，与A组相比，B组的患者有较长的无进展存活率(P=0.042)和总生存率(P=0.029)。在B组患者中无严重的不良反应的增加[15]。另一项研究将120例非小细胞肺癌分为3组：支气管动脉灌注；传统静脉化疗；支气管动脉灌注加CIK细胞输注。经过2个周期的治疗后评价临床疗效和不良反应。联合组有效率比传统静脉化疗组高，并有显著差异(Chi-square=4.721，P=0.03)。联合组的不良反应显著低于传统静脉化疗组。肿瘤进展率支气管动脉灌注组高于联合组(Chi-square=4.287，P=0.038)[16]。

3 DC/CIK

3.1 DC/CIK联合培养

DC通过受体的方式摄取外来抗原，并能与这些抗原表面的MHCⅠ类和Ⅱ类分子结合，刺激初始型CD8+T细胞和CD4+T细胞活化。DC除了诱导抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞外，还可通过直接或间接方式影响B细胞的增殖，活化体液免疫应答[17]。树突状细胞是主要的抗原提呈细胞。他们能捕获和处理肿瘤抗原，表达淋巴细胞共刺激分子，分泌细胞因子等来启动免疫反应。研究发现DC刺激CIK细胞后，细胞毒活性显著增强[18]。DC-CIK联合培养与CIK相比抑瘤率显著增高(62.9% vs 41.5%，P<0.05)[19]。DC和CIK细胞能够促进化疗药物的抗肿瘤作用。联合培养的DC与CIK细胞能够产生新的细胞群，其细胞毒性和细胞增殖活性比CIK细胞高[20]。CIK细胞和A549细胞裂解物抗原致敏的DC细胞共培养后与单独的CIK和未致敏的DC-CIK细胞相比表现出更强的杀伤活力(P<0.05)[21]。因此，将具有高效杀伤活性的CIK细胞和具有强大肿瘤抗原提呈能力的DC联合应用治疗恶性肿瘤，无疑会起到协同作用。

3.2 临床应用

一项将84例Ⅰ～Ⅲa期的术后非小细胞肺癌患者随机分为2组，一组单独使用化疗，另一组给予化疗加DC/CIK治疗。最终评价2组的DFS和OS。2年的总生存DC/CIK组显著高于单用化疗组(94.7±3.6% vs 78.8±7.0%，P<0.05)，2年的DFS没有显著性差异[22]。朱柠等对12 例确诊肺癌经标准治疗方案治疗的患者,取外周血分离单个核细胞(PBMC),体外诱导出DC和CIK细胞共培养。所有患者均接受一定剂量的DC/CIK细胞过继免疫治疗，12 例患者中完全缓解1 例,部分缓解 4 例,病情稳定 1 例,近期有效率为 41.6%,疾病控制率为50%,病情进展共 6 例,其中死亡2 例[23]。周永春等采集70例非小细胞肺癌患者外周血单个核细胞，加入细胞因子定向诱导成CIK及DC细胞，培养的第5天用自体肿瘤抗原(Ag)负载DC细胞，第8天将DC与CIK细胞共培养，14天后将联合培养的细胞(Ag-DC-CIK)分次回输给患者。Ag-DC-CIK治疗组中Ⅲ、Ⅳ期患者的有效率分别为52.38%和42.85%,与对照组的相应期别(Ⅲ期44.44%，Ⅳ期35.29%)相比有显著性差异(P<0.05)[24]。

总之，DC/CIK生物免疫治疗作为1种新的治疗手段，相对于手术、放射治疗、化学治疗而言，具有非细胞毒性和靶向性。由于缺少大样本的临床试验，许多问题亟需解决，比如生物免疫治疗的毒副作用、应用时机、给药途径和方法等问题有待于进一步探讨。相信随着临床试验的不断深入，这些问题将会被解决。毫无疑问，生物免疫治疗与手术、化疗、放疗以及靶向药物有机结合，合理安排将会为肿瘤患者带来新的希望。

[1]哈日巴拉，王大鹏，侯斯琴高娃，等.紫杉醇联合顺铂同步放疗治疗局部晚期非小细胞肺癌的临床观察〔J〕.实用癌症杂志,2010,25 (3):305.

[2]徐 林，张维东.树突状细胞在非小细胞肺癌治疗中的研究进展〔J〕.实用癌症杂志,2009,24(4):427.

[3]龚非力,沈关心,李卓娅,等.树突状细胞及其他抗原提呈细胞〔M〕.医学免疫学，2009:106～107.

[4]Whiteside TL,Odoux C.Dendritic cell biology and cancer therapy〔J〕.Cancer Immunol Immunother,2004,53(3):240.

[5]Hirschowitz EA,Foody T,Kryscio R,et al.Autologous dendritic cell vaccines for non-small-cell lung cancer〔J〕.J Clin Oncol,2004,22(3):2808.

[6]Märten A,Greten T,Ziske C，et al.Generation of activated and antigen-specific T cells with cytotoxic activity after co-culture with dendritic cells〔J〕.Cancer Immunol Immunother,2002,51(1):25.

[7]文洽先,朱 娅,许 彬,等.CEA多肽负载的自体树突状细胞治疗晚期肺癌8例近期疗效观察〔J〕.苏州大学学报(医学版),2010，30(1):168.

[8]施玲燕,刘继斌,刘晓玲，等.CIK细胞实验研究及治疗肿瘤的临床疗效观察〔J〕.肿瘤基础与临床,2009，22(2)：141.

[9]孙 燕，石远凯.肿瘤免疫治疗〔M〕.临床肿瘤内科手册，2007:92～93.

[10]Hongeng S,Petvises S,Worapongpaiboon S,et al.Generation of CD-3+CD56+cytokine - induced killer cells and their in vitro cytotoxicity against pediatric cancer cells 〔J〕.Int J Hematol,2003,77 (2):175.

[11]Pengying Liu,Longbang Chen.The antitumor effects of CIK cells combined with docetaxel against drug-resistant lung adenocarcinoma cell line SPC-A1/DTX in vitro and in vivo〔J〕.Cancer Biother Radiopharm,2009,24(1):91.

[12]Thorne SH,Negrin RS,Contag CH.Synergistic antitumor effects of immune cell-viral biotherapy〔J〕.Science,2006,311(5768):1780.

[13]Li H,Yu JP,Cao S,et al.CD4 +CD25 + regulatory T cells decreased the antitumor activity of cytokine-induced killer (CIK) cells of lung cancer patients〔J〕.J Clin Immunol,2007,27(3):317.

[14]Kim HM,Lim J,Park SK,et al.Antitumor activity of cytokine-induced killer cells against human lung cancer〔J〕.Int Immunopharmacol，2007，7(13):1802.

[15]Changping WU,Jingting JIANG,et al.Prospective study of chemothe-rapy in combination with cytokine-induced killer cells in patients suffering from advanced non-small cell lung cancer〔J〕.Anticancer Res，2008，28(6B):3997.

[16]Zhao G,Huang Y,Ye L,et al.Therapeutic efficacy of traditional vein chemotherapy and bronchial arterial infusion combining with CIKs on Ⅲ stage non-small cell lung cancer〔J〕.Zhongguo Fei Ai Za Zhi，2009，12(9):1000.

[17]Zoll B,Lefterova P,Ebert O,et al.Modulation of cell surface markers on NK - like T lymphocytes by using IL - 2,IL - 7 or IL- 12 in vitro stimulation〔J〕.Cytokine,2000,12 (9):1385.

[18]Hackstein H,Thomson AW.Dendritic cells:emerging pharmacological targets of immunosuppressive drugs〔J〕.Nat Rev Immunol，2004，4(1):24.

[19]Yang XJ,Huang JA,Lei W,et al.Antitumor effects of cocultured d-endritic cells and cytokine-induced killer cells on lung cancer in vitro and in vivo〔J〕.Ai Zheng，2006，25(11):1329.

[20]Zhang S,Zhang SQ.The anti-tumor effects of dendritic cells co-cultured with cytokine induced killer cells after chemotherapy〔J〕.Zhonghua Jie He He Hu Xi Za Zhi，2004，27(5):315.

[21]Zhang S,Wang EZ,Bai CX,et al.The proliferation profile in vitro and anti-tumor effects of dendritic cells co-culturing with CIK cells〔J〕.Shi Yan Sheng Wu Xue Bao，2003，36(5):375.

[22]Li H,Wang C,Yu J,et al.Dendritic cell-activated cytokine-induced killer cells enhance the anti-tumor effect of chemotherapy on non-small cell lung cancer in patients after surgery〔J〕.Cytotherapy，2009，11(8):1076.

[23]朱 柠,陈小东,刘祥麟,等.DCIK 细胞用于肺癌临床免疫治疗〔J〕.细胞生物学杂志,2008,30:251.

[24]周永春,王熙才,谷玉兰,等.DC疫苗联合CIK细胞治疗非小细胞肺癌疗效观察〔J〕.中国肺癌杂志，2009,6(12):6.