性反转综合征患者5例细胞和分子遗传学检测与分析

宁 玻，李 琳

（山东省临沂市人民医院1.男科，2.遗传检验科 山东 临沂 276003）

性反转综合征患者5例细胞和分子遗传学检测与分析

宁 玻1，李 琳*2

（山东省临沂市人民医院1.男科，2.遗传检验科 山东 临沂 276003）

性反转综合征；SRY；染色体；分析

性反转综合征（sex reverse syndrome）指染色体性别和性腺不一致的一类疾病,它包括46，XX男性和46，XY女性。这种性分化异常由决定性别的控制基因的异常所引起，表现为表型性别不能确定的中间性状态，或表型性别与性腺性别或遗传性别相矛盾的现象。我们通过对46，XX男性和46，XY女性患者的常规染色体检查和SRY基因检测，从遗传学角度探讨性反转综合征的发生机理。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2009年1月～2011年2月因不孕不育来我院就诊患者5例。其中社会性别男性2例，女性3例。患者1：女，20岁，原发闭经。体检：双乳房发育TannerⅣ期，外阴幼稚，无阴毛，阴道深约4 cm。内分泌检查：促黄体生成素18.06 mIu/mL（正常女性参考值1.1～11.6 mIu/mL），睾酮（T）：877 ng/dL（正常女性参考值63～120 ng/dL）。B超检查未见子宫，双卵巢未显示。家族史：父母非近亲婚配，母亲月经规律，无异常生育史，无遗传病家族史。患者2：女，20岁，原发闭经。体检：双乳房发育TannerⅡ期，外阴发育一般，阴毛稀疏，阴道深约4 cm。内分泌检查：雌二醇（E2）＜7.0 pg/mL（正常女性参考值24.5～1950 pg/mL），卵泡生成素（FSH）102.07 mIu/mL（正常女性参考值2.8～14.4 mIu/mL），促黄体生成素（LH）50.81 mIu/mL（正常女性参考值1.1～11.6 mIu/mL），其余内分泌指标在正常范围。B超示：始基子宫，大小为：32 ×10×24mm，双侧卵巢显示不清。家族史：父母非近亲婚配，母亲发育正常，月经规律，无异常生育史及家族遗传史。患者3：女，35岁，原发闭经。体检，双乳房发育TannerⅡ期，外阴女性，发育幼稚，无阴毛，阴道盲端。B超示：未见子宫，双侧卵巢未显示。家族史：父母非近亲婚配，母亲发育正常，月经规律，无异常生育史及家族遗传史。患者4：男，26岁，结婚2年未育，精液检查无精子。体检：外阴男性，阴毛稀少，阴茎发育正常，双侧睾丸明显小于正常，大小约为15 ×12 ×10mm，质坚韧，双侧附睾及输精管均可触及；内分泌检查：T：60.5 ng/dL（正常男性参考值270～1732 ng/dL），FSH：21.28 U/L（正常男性参考值0.7～11.1 U/L）；LH：9.82 U/L（正常男性参考值0.8～7.6 U/L），其余内分泌指标在正常范围。B超示：左侧睾丸大小为：21mm×14mm×11mm，右侧睾丸大小为：25 ×16×11mm。家族史：父母非近亲婚配，两个姐姐婚育生子无异常。患者5：男，24岁，结婚2年未育，精液检查无精子。体检：皮肤细腻，无胡须。外阴男性，阴茎发育正常，双侧睾丸小，质软。双侧附睾及输精管可触及。内分泌检查：T：81.77 ng/dL，FSH：25.32 U/L, LH：12.81 U/L。B超示：左侧睾丸大小为：22 ×13 ×12mm，右侧睾丸大小为：23 ×14 ×11mm。家族史：父母非近亲婚配，两个姐姐婚育生子无异常。

1.2 方法

1.2.1 细胞遗传学检查方法 常规外周血淋巴细胞培养、染色体制备、G、C显带分析，计数30个分裂相，镜下分析3～5个核型，判断患者染色体核型。

1.2.2 分子遗传学检查方法

1.2.2.1 外周血细胞DNA模板制备 取肝素抗凝血10 mL，裂解红细胞，分离出白细胞经核酸裂解液和蛋白酶K处理，再以常规酚抽取法提取基因组DNA，用1×TE溶解DNA，置4℃保存。

1.2.2.2 S RY引物和P C R扩增 S RY引物序列P5′-CATGAACGCATTCATCGTGTGGTC-3′和m5′-CTGCGGGAAGCAAACTGCAATTCTT-3′扩增片段的长度为254 bp，PCR反应体积20 μL，含MgCl21.5mmoL、4种dNTP各200μmoL，单条引物60 ng、模板DNA100 ng，Taq酶1 U，反应液面以18 μL石腊油覆盖。以93 ℃45 s，55℃45 s，72 ℃60 s为1个循环周期，扩增35个周期，最后72℃延伸5min，PCR产物以EB染色的2%的琼脂糖凝胶电泳检测，紫外灯观察结果并照相记录。

2 结果

本组病例1～3染色体结果为：46，XY，SRY结果均为阳性；病例4、5染色体结果为46，XX，SRY结果均为阳性。

3 讨论

人类性别根据基因、细胞、器官和社会等不同层次可将其分为基因性别、染色体性别、性腺性别和社会性别。人类正常性发育包括性别决定和性别分化两个阶段。性别决定取决于含X或Y的精子与卵子的结合，性别其他差异则由性腺产生的激素或因子所引起的相应效应，是一系列基因按时间、空间序列表达、相互作用的结果。SRY基因突变、易位或缺失可导致发育异常[1]。

患者1～3社会性别为女性，染色体结果为46，XY，但她们没有男性性征，是女性性反转。SRY基因均为阳性，B超未发现卵巢、睾丸组织。考虑可能原因：（1）性腺组织条索状；（2）体内既往曾经存在睾丸，表现为隐睾，已经萎缩；（3）SRY基因突变。目前发现有15%的46，XY女性性反转患者有SRY基因突变[2]。有文献报道，46，XY女性，SRY基因阳性患者发生性腺母细胞瘤比率高达10～20%[3]。因此对46，XY女性，SRY基因阳性患者经检查未发现性腺，应严密随诊，必要时腹腔镜探查、寻找性腺组织。

患者4、5，社会性别为男性，染色体结果为46，XX，SRY基因阳性，T水平低下，LH，FSH水平升高。两患者均因不育就诊，检查无精子。46，XX男性性反转患者根据SRY基因测定可分为SRY阳性及SRY阴性两类。而患者的临床症状也常表现出一定程度的异质性，SRY基因阳性的患者外生殖器发育多较正常[4]，在青春期前，无其他明显阳性体征，但也有伴随生殖器畸形病例报道[5]。本文中的两患者性功能基本正常，阴茎勃起硬度可维持正常性交，但因不育就诊，检查发现无精子。目前46，XX 男性的发病机制还不明确，主要存在以下的假说[6-7]:（1）靶基因突变假说;（2）局限性Y染色体嵌合假说；（3）XP-YP易位假说。由于46，XX男性性反转综合征患者临床症状表现不一，其发病机制可能不是单一的，所以临床应根据常规体检、内分泌检查、染色体核型分析、SRY及其他基因检测，明确诊断，根据患者对性功能或生育目的要求的不同，制定相应的治疗措施。

总之，由于性别决定和分化过程的复杂性以及性反转发生机制的多样性，临床表现的异质性，对性反转患者在诊断上应进行染色体和SRY基因的常规分析，以明确患者性别异常的原因，指导合理治疗，促进第二性征的发育，防止性腺恶变的发生。

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Exmination and analysis of cellular andmoLecular genetics in patients with sex reversal syndrome

NING Bo,LI Lin
(The people's Hospital of Linyi city Shandong province,Linyi,Shandong 276003,China)

Sex reversal syndrome; SRY; Chromosome;Analysis

R596.1

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2012.08.004.010.02

2012－03－05

山东省科技攻关计划（2008GG10002063）。

宁 玻（1979－），男，山东烟台人，主治医师，主要从事男科工作。

*李 琳，Email：lilinxy1996@sina.com。

(本文编辑: 李新刚)