MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA平行检测日本血吸虫抗体效果比较

刘 群，陈仕明 (荆州市第三人民医院 荆州市血吸虫病专科医院检验科，湖北 荆州 434000)

黄 进 (华中科技大学同济医学院病原生物学系，湖北 武汉 430030)

蔡爱玲，周明莉 (荆州市第三人民医院 荆州市血吸虫病专科医院检验科，湖北 荆州 434000)

姜昌富 (华中科技大学同济医学院病原生物学系，湖北 武汉 430030)

MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA平行检测日本血吸虫抗体效果比较

刘 群，陈仕明 (荆州市第三人民医院 荆州市血吸虫病专科医院检验科，湖北 荆州 434000)

黄 进 (华中科技大学同济医学院病原生物学系，湖北 武汉 430030)

蔡爱玲，周明莉 (荆州市第三人民医院 荆州市血吸虫病专科医院检验科，湖北 荆州 434000)

姜昌富 (华中科技大学同济医学院病原生物学系，湖北 武汉 430030)

目的：评价磁微粒分离酶联免疫法(MPAIA)、日本血吸虫抗体检测试纸条(DIGFA)、间接红细胞凝集试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)平行检测日本血吸虫抗体效果。方法：采用MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA，分别对荆州市血吸虫病专科医院每日收集的血吸虫病检查血清标本进行平行检测，并对检测结果进行统计分析。结果：对医院1321例标本，采用MPAIA与DIGFA、IHA 、ELISA进行平行检测，阳性率分别为36.34％、27.93％、33.23％和20.29％，差别有统计学意义(Plt;0.01)，MPAIA阳性率高于其他3种方法。结论：MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA平行检测血吸虫血清抗体的阳性检出率较为符合，MPAIA适用于临床检验和现场调查。

磁微粒分离酶联免疫法(MPAIA)；日本血吸虫抗体检测试纸条(DIGFA)；间接红细胞凝集试验(IHA)；酶联免疫吸附试验(ELISA)；日本血吸虫；抗体

磁微粒分离酶联免疫法(magnetic antibody immunoassay, MPAIA)是20世纪80年代中期，由瑞士Serono公司发明的一种非同位素免疫检测技术，具有灵敏度高、特异性强、快速稳定和无放射性污染等特点，正日益在临床和科研中推广应用[1-3]。为评价临床应用MPAIA 检测日本血吸虫抗体效果，荆州市血吸虫病专科院采用MPAIA、日本血吸虫抗体检测试纸条(DIGFA)、间接红细胞凝集试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)4种方法平行检测日本血吸虫抗体，现报道如下。

1 材料与方法

1.1MPAIA法

日本血吸虫抗体检测试剂盒-磁微粒分离酶联免疫法，由北京倍爱康生物技术有限公司提供。磁分离免疫测定仪、磁分离架由北京倍爱康生物技术有限公司提供。

将样本用样品稀释液(Sj Ab浓缩稀释液)稀释200倍后加样15μl，加入FITC标记抗原(Sj SEA试剂-FITC)30μl，混匀，37℃温育15min；加入抗FITC磁微粒试剂60μl，室温静置5min；放置磁板上分离后弃去上清。加入300μl稀释后的洗液进行清洗，重复清洗两次；弃上清液后加入ALP标记的抗人IgG 60μl，混匀，37℃温育1min；放置磁板上分离后弃去上清，再次加入300μl稀释后的洗液进行清洗，重复清洗两次；弃上清液后加入100μl基质，37℃温育15min；加入300μl终止液终止反应，在磁分离器上沉淀10min；用磁分离免疫测定仪读取各管的吸光值。

1.2DIGFA法

日本血吸虫抗体检测试纸条由深圳市康百德生物科技有限公司提供。

将试纸条取出后蓝色端朝上平放，加入50～70μl待检血清于试纸“MAX”箭头下端的加样区。10min内判定结果，超过10min结果只能作为参考。

1.3IHA法

间接红细胞凝集试验由湖北省血吸虫病防治研究所提供。

用微量滴管加4滴(0.025ml/滴)生理盐水于微量血凝反应板第1排第2孔内，第3孔空白，第4孔加1滴。第1孔内储存待检血清，并从中吸取血清1滴加入第2孔内，充分混匀后，吸出两滴于第3孔和第4孔各加1滴。在第4孔混匀后弃去1滴使第3孔、第四孔血清稀释度为1∶5，1∶10。用定量吸和吸取致敏红细胞悬液，于第3孔和第4孔内各加1滴，立即旋转震摇2min，室温下静置1h左右，观察结果。每次试验均应有阳性血清作阳性对照，生理盐水作阴性对照。

1.4ELISA法

酶联免疫吸附试验由湖北省血吸虫病防治研究所提供。

将被测血清样本以1∶200比例稀释，加入血清稀释液100μl后将反应板放入37℃水浴箱30min。取出反应板，甩掉孔内液体，每孔加入洗涤液1滴，再加满蒸馏水，用蒸馏水洗涤4次，每次加满水后静置30s，然后甩去液体，最后一次洗涤后将反应板在吸水纸上拍干。在每孔中加入酶结合物液2滴，置37℃避光反应10min，加入终止液1滴，混匀，终止反应。每块板设置空白、阴性、临界和阳性各1孔。

1.5血清标本

荆州市血吸虫专科医院每日收集的血吸虫检查血清标本共1321份，进行编号，分别用MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA试剂盒同时进行检测，观察检测结果。

1.6结果判断

1)MPAIA：吸光度临界值为0.5(550nm)。大于此临界值即为阳性，小于此临界值即为阴性。

2)DIGFA：以检测带区和对照带区均出现紫红色反应带为阳性；以对照带出现紫红色反应带，而检测带区无反应为阴性。

3)IHA：阴性反应为红细胞全部沉入孔底，肉眼见一边缘光滑，致密的小圆点。阳性反应为红细胞形成薄层凝集，边缘不规则。

4)ELISA：在空白对照孔呈无色、阴性对照孔呈无色或微黄色、临界对照孔呈浅黄色时，观察反应结果。样本孔呈深于临界对照孔黄色判为阳性反应。样本孔呈无色或浅于临界孔黄色判为阴性反应。

1.7统计学分析

运用Excel 2003收集整理四种方法平行检测日本血吸虫抗体原始资料，并建立数据库，检测数据采用SPSS 17.0进行统计学分析。Plt;0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

通过对医院1321例血吸虫检查标本，采用MPAIA与DIGFA、IHA 、ELISA进行平行检测，阳性例数分别为480、369、439例和268例，阳性率分别为36.34％、27.93％、33.23％和20.29％，差异有统计学意义(Plt;0.01)，阳性率MPAIAgt;IHAgt;DIGFAgt;ELISA，MPAIA阳性率最高。

3 讨 论

通过MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA平行检测日本血吸虫抗体，阳性检出率较为符合，但MPAIA相对于DIGFA、IHA、ELISA等方法而言，阳性检出率高，且本方法血清取样量较少，仅需1～5μl(血清按1∶200稀释)，比较适用于临床检验和现场调查。

MPAIA是将免疫磁珠分离技术引入酶联免疫测定系统中而建立的一种方法，抗原抗体反应快速均匀，检测可在2h内完成。其特点：①灵敏度高。用 MPAIA 几乎能检测出所有体内存在日本血吸虫抗体的患者[4-5]。②重复性好。从试剂盒提供的阳性和阴性质控品数据来看，临床检测结果与实验室检测结果一致，因此MPAIA在临床完全可以重复实验室检测结果。并且，一份样本在同一天或者不同时间内的检测结果一致。③检测结果客观、准确。通过吸光度值判断检测结果，没有人为主观误差，因此保证了检测结果重复性好、客观、准确。④能区分疾病感染程度。根据试用实验数据，可以以MPAIA的检测结果进行疾病感染程度的区分，如果MPAIA在血吸虫病流行疫区现场应用，具有流行病学监测作用。⑤检测结果具有确诊性。通过临床实际检测工作， MPAIA检测结果如果大于原临界值，加上受检者若有接触疫水的流行病学资料，即可判断为病原学阳性，因此，可以省去病原学检测的步骤，从这个意义上来说， MPAIA准确、简便。由于MPAIA检测日本血吸虫血清抗体有较高的灵敏度和特异度，可用于日本血吸虫病的临床诊断和现场疫情监测，该方法具有广阔应用前景[6]。MPAIA可望有取代病原学检测的可能。不足之处在于操作略为复杂。

[1]Ross A G P，Li Y S，Sleigh A C，et al. Schistosomiasis control in the People’s republic of China[J]. Parasitol Today，1997，13：152-156.

[2]龚显恩. 磁珠分离酶联免疫法在检测血清HCG中的应用[J]. 国际检验医学杂志，2006，27(10)：959.

[3]温严，俞冬熠，付平，等. 磁性分离酶联免疫法在唐氏综合征产前筛查中的应用[J]. 中国优生与遗传杂志，2002，10(1)：44-45.

[4]秦志强，曾庆仁. 日本血吸虫病免疫诊断的研究进展与问题[J]. 中国寄生虫病防治杂志，2001，14(4)：306-308.

[5]鞠川. 日本血吸虫病免疫诊断方法的研究进展[J]. 国际医院寄生虫病志，2006，33(5)：250-255.

[6]姚蓝，刘振世，黄进，等 .磁微粒分离酶联免疫法在日本血吸虫抗体检测中的应用[J].中国人兽共患病学报，2009，25(8)：784-786.

[编辑] 一 凡

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2012.02.021

R446.112；R383.24

A

1673-1409(2012)02-R037-02

2011-12-13

刘群(1969-)，女，湖北荆州人，副主任技师，主要从事临床检验工作。