XE-2100血细胞分析仪对巨大血小板计数的评价

曾令军 王保龙 马筱玲 王 斌 贺学娇 丁邦胜

安徽省立医院检验科，安徽 合肥 230001

随着血细胞分析仪在各级医院的广泛应用，血小板的准确计数是临床医生和检验人员共同关注的问题，尤其是巨大血小板（Giant platelet）的准确计数，由于受目前大多数血小板分析仪的计数原理和功能的限制，多无法准确计数。而过去认为罕见或者少见的巨大血小板，随着检测手段的多样化和血细胞分析仪的普及，在孕妇、心血管疾病、血液病等患者中常被检出。因此，迫切需要对血细胞分析仪计数巨大血小板进行评价。本文利用检验界广泛应用的，性能优良的日本Sysmex 公司的XE-2100血细胞分析仪，对经涂片、染色、镜检证实，巨大血小板占血小板总数30%以上的标本进行检测，探讨XE-2100血细胞分析仪计数巨大血小板的准确性，为临床选择巨大血小板检测方法提供客观依据。

1 材料与方法

1.1 仪器 日本Sysmex 公司的XE-2100血细胞分析仪；Olympus BX51显微镜; 重庆天海医疗设备有限公司CMIS-2011骨髓细胞分析系统；牛鲍氏血细胞计数板等。

1.2 试剂 XE-2100配套原装试剂、质控物，由日本东亚公司提供。瑞氏-吉姆萨染液由BASO公司提供。静脉采血用乙二胺四乙酸二钾(EDTAK2)真空抗凝管，由上海科华公司提供。血小板草酸铵稀释液按《全国临床检验操作规程》第3版的要求配制[1]。

1.3 标本来源 6例样本均为本院病人，均经涂片、染色、镜检证实（见图1-7），其血小板以巨大血小板为主，高达30%以上，远远超出薛飞平[2]报告的正常人巨大血小板占0.7-2.0%的参考范围。受检者早晨空腹，采血由技术熟练护士在患者左上臂扎止血带，禁止拍打采血部位，在1分钟内从肘正中静脉一次顺利抽血2ml置EDTAK2真空抗凝管，立即上下颠倒混匀8次，室温放置，所有计数检测均在采集标本后2h内完成。

1.4 方法 Sysmex XE-2100使用前已校准，每日测定三个水平配套质控物，结果均在靶值允许范围内再进行日常标本的检测。分别用Sysmex XE-2100的电阻抗法(PLT-I)和光学法(PLT-O)及手工显微镜计数法，三种方法分别对上述6例血液中有大量巨大血小板（>30%）患者的标本进行血小板计数。电阻抗法(PLT-I)检测采用仪器第3检测模式(CBC+DIFF)进行检测；光学法(PLT-O)检测用仪器第4检测模式(CBC+DIFF+RET)进行检测；以手工显微镜计数法为标准，判断Sysmex XE-2100计数血小板结果的准确性。手工显微镜计数由两位高年资主管检验师，采用双盲法计数，取两人均值。每一例标本均制作血涂片，行瑞-吉染色后油镜观察巨大血小板形态，经Olympus BX51显微镜摄影。经统计学分析，评价XE-2100血细胞分析仪计数巨大血小板的准确性。

1.5 统计学处理 三种血小板计数方法，每两种方法之间，采用SPSS17.0统计学软件进行配对T检验。

2 结 果

2.1 数据结果 6例标本统一编号，同时采用三种方法即Sysmex XE-2100的电阻抗法(PLT-I)、光学法(PLT-O)和手工显微镜计数法进行血小板计数，其结果及血涂片中巨大血小板比例见表1。MPV(平均血小板体积)、PCT(血小板压积)、PDW(血小板分布宽度)、P-LCR(大血小板百分比)等血小板参数仪器均无法测出。为减少误差采用同一标本配对T检验[电阻抗法(PLT-I)和光学法(PLT-O)，电阻抗法(PLT-I)和手工显微镜计数法，光学法(PLT-O)和手工显微镜计数法],分析三种方法计数巨大血小板的一致性。结果，PLT-O法计数巨大血小板与手工显微镜计数法比较差异有统计学意义(P<0.05),PLT-I法计数巨大血小板与PLT-O法比较差异有统计学意义(P<0.01)；PLTI法计数巨大血小板与手工显微镜计数法比较差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 图形结果 图1-6显示6例血小板直方图均明显异常，直方图尾部陡然向上抬高。其中，例1和例2血小板直方图相似，表现为血小板直方图无拟合曲线，在2～35fl区域十分平坦，而在35fl右侧急剧陡然升高，这与两例患者均为巨大血小板综合症(BSS)，巨大血小板在血涂片中高达60%以上有关；例3、4、6血小板血小板直方图相似，在2～35fl区域大致呈现正常的左偏态拟合曲线，但在35fl右侧也表现为急剧陡然升高，这与三位患者巨大血小板在血涂片中占30-60%有关；例5的血小板直方图有别于其它5例，是在2～20fl区域呈现正常的血小板直方图左偏态拟合曲线，在20～35fl区域陡然升高。在> 35fl右侧呈高位水平直线，这可能是该患者体积是红细胞2倍以上的特大血小板占10%造成的。此外，6例标本红细胞直方图均表现正常，巨大血小板未对红细胞直方图造成干扰，所有6例标本的血涂片中均易见到巨大血小板。

2.3 报警结果 血小板报警提示：血小板聚集(PLT Clumps)，血小板直方图异常(PLT abn Dst)

3 讨 论

巨大血小板是指MPV≥30fl或者直径≥1/2红细胞的血小板[3]，具体是指血小板直径＞7.5μm[4]，在实际血涂片观察中通常以直径≥1/2红细胞来判定。巨大血小板已成为研究出血性疾病、血栓性疾病及血液病的重要内容。

血小板体积越大其活性越强，血小板间的聚集和粘附能力越强，易于发生血小板凝集，形成血栓，出现急性心肌梗塞、脑梗塞或脑出血的可能性较大[5]。巨大血小板综合症(BSS)、血小板无力症、灰色血小板综合症、骨髓异常综合征、特发性血小板减少性紫癜、血友病、骨髓纤维化、慢性粒细胞白血病、恶性肿瘤、孕妇及血小板的活化[6]等都会出现数量不等的巨大血小板。既然巨大血小板在多种疾病中广泛存在，那么在血小板计数时，能否将巨大血小板计数在内直接关系到血小板的准确计数。

准确计数血小板实非易事[7]。采用传统的电阻抗法检测技术，单纯依靠细胞体积一个检测参数，无法有效区分其它干扰物质，特别是无法区分病理标本中的巨大、大血小板。Sysmex XE-2100血液分析仪可采用电阻抗法(PLT-I)以细胞体积的大小计数血小板，仪器将在2～35fl范围内的细胞定义为血小板，因此，当血小板颗粒大于35f时，仪器就无法将其计数为血小板。这可以从表1和统计学分析结果[PLT-I法与PLT-O法 (P<0.01)；PLT-I与手工显微镜计数法(P<0.05)]得到证明。

图1 例1 红细胞、血小板直方图及血涂片1000×；图2 例2红细胞、血小板直方图及血涂片1000×；图3 例3 红细胞、血小板直方图及血涂片1000×；图4 例4红细胞、血小板直方图及血涂片1000×； 图5 例5红细胞、血小板直方图及血涂片1000×；图6 例6红细胞、血小板直方图及血涂片1000×。

表1 6例患者三种血小板测定方法结果（×109/L)及血涂片中巨大血小板比例（%）

图7 例1计数板内以巨大血小板为主 200×。

Sysmex XE-2100血液分析仪也可采用采用半导体单通单光散射法和流式细胞技术[8]，(光学法，PLT-0)测定PLT。光学法则利用两种荧光染料：聚次甲基和噁嗪，可以透过细胞膜对细胞内RNA、DNA进行染色。在光法计数通道内，663nm波长的激光照射在细胞上，产生前向散射光(FSC)信号可反应细胞体积大小；侧向散射光(SSC)信号可反应细胞的颗粒和细胞核等内含物的信息；侧向荧光(SFL)强度信号则用于分析细胞内脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的含量[9，10]。血小板体积较红细胞小，散点图上分布在红细胞下方，血小板内含极少量的核酸，侧向荧光的强度较成熟红细胞稍大，因此能有效区分红细胞和血小板[11]。这可以从图1～6中红细胞直方图上得到证明：Sysmex XE-2100血液分析仪可以有效排除巨大血小板对红细胞计数的干扰。

但从表1和统计学结果来看，光学法（PLT-0)计数巨大血小板与手工显微镜计数法比较差异有统计学意义(P<0.05)，证明光学法（PLT-0)测定巨大血小板的准确性仅比电阻抗法(PLT-I)好，确不如手工显微镜计数法准确，尤其是对于例1、例2这样的巨大血小板综合症(BSS)患者，在巨大血小板在血涂片中高达60%以上时，光学法（PLT-0)结果与手工显微镜计数法结果相差悬殊。这是由于日常临床工作中应用的血细胞自动分析仪多为单光散射法计数细胞数目，这种计数在血细胞数目或体积极大时是不准确的。BSS患者血小板中至重度减少，且血小板体积偏大，导致血小板计数偏差。这种情况可选用人工血小板计数[12]，如果能对这类标本制作血涂片进行形态学复查则更佳。

在运用血细胞分析仪检测标本过程中，如何能够及时发现标本中巨大血小板对仪器的干扰呢? 仪器的血小板报警提示：血小板聚集(PLT Clumps)，血小板直方图异常(PLT abn Dst)；直方图的特征性改变；MPV、PCT、PDW、P-LCR等血小板参数仪器无法测出，均能提示我们标本中存在巨大血小板对仪器的干扰。这时可采用手工显微镜计数法并制作血涂片进行形态学复查，可以准确确认并计数血小板，为临床诊断提供客观、有价值的结果，避免误诊误治。

1.叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程,第3版[M].南京：东南大学出版社，2006：136-137.

2.薛飞平，孙瑞雪，吴礼锋. 三种方法对巨大血小板的检测分析[J].检验医学,2010,25（5）：398-400.

3.谢忠明，李艳. 血小板和巨大血小板的检测研究[J].微循环学杂志,2001,11（3）：20-21.

4.刘志浩,黄文源.实用临床血液细胞学图谱,第1版[M].北京：科学出版社,1996：48.

5.王绮美.大型血小板比率与急性膻梗死的相关性[J].中国实用内科学杂志,2000,20（7)：399.

6.杨莉丽,杜意平,邹兵,等. 丹参注射液对溃疡性结肠炎患者血小板参数的影响及意义[J].罕少疾病杂志，2009,16（6）：5-7.

7.朱忠勇.准确计数血小板方法学研究进展[J].国外医学临床生物化学与检验学分册，2002，23(3)：131-132.

8.曾令军,吴庆,李莉,等. 高效价冷凝集素对血常规检测结果的影响及消除方法探讨[J].罕少疾病杂志,2011,18（5）：2-6.

9.张时民.五分类法血细胞分析仪测定原理和散点图特征[J].中国医疗器械信息,2008,14(12)：1-10.

10.Warren GR, Robert KA. Laser technology in blood cell counting[J]. Sysmex J Int,1999,9:21-30

11.凌励,周道银,惠小阳,等.激光染色法与电阻抗法检测血小板方法的比较[J].中华检验医学杂志,2004,27(10)：717-718.

12.乔卓青,周泽平,李尚珠.巨大血小板综合征的诊疗进展[J].国际输血及血液学杂志,2011,34(5):358-361