阿胶泡腾片对小鼠免疫功能的影响

毛跟年， 宋怡敏， 毛瑞娟， 邵静可

(陕西科技大学 生命科学与工程学院， 陕西 西安 710021)

0 引言

阿胶(CollaCoriiAsini) 又名驴皮胶、付致胶，其与人参、鹿茸并称“中药三宝”，始载于《神农本草经》[1]，是马科动物驴(EquusasinusL.)的皮经去毛后熬制而成的板状胶块制剂，主要成分为胶原蛋白[2].阿胶具有很好的补血作用，中医用来治疗血虚萎黄、眩晕心悸、虚风内动和吐血尿血等症[3].现代药理研究表明，阿胶对血液、造血系统及免疫系统等方面均有明显作用，具有增强记忆、抗疲劳、耐缺氧等作用[4].阿胶泡腾片是将原料阿胶块粉碎过筛后，再经过特殊工艺加工而成的片剂.目前还没有阿胶泡腾片药效研究的相关资料.本文通过动物实验研究了阿胶泡腾片对小鼠免疫功能的影响，以便为临床应用提供理论依据.

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1受试样品

阿胶泡腾片，陕西科技大学生命学院生药实验室提供；原料阿胶块，山东东阿阿胶股份有限公司提供.

1.1.2试剂

无水乙醇、氯化钠、碳酸钠等均为分析纯试剂.

1.1.340 mL/L、200 mL/L鸡血红细胞混悬液

将加有抗凝剂的鸡血，经2000 r/min离心10 min，弃去上清液，沉淀的红细胞用生理盐水轻轻吹打，经2000 r/min离心10 min，反复洗涤3次后，再用生理盐水分别配制成40 mL/L、200 mL/L鸡红细胞混悬液.

1.1.4实验动物

昆明种小鼠，体重18～22 g，西安交通大学医学院动物中心提供，合格证号：SCXF(陕)2007-001.

1.1.5仪器设备

TDL-40B型电子天平，上海精密科学仪器有限公司生产；752型紫外分光光度计，上海光谱仪器有限公司生产；游标卡尺.

1.2 方法

1.2.1小鼠给药剂量的确定

根据阿胶泡腾片中阿胶含量、成人每日推荐的阿胶使用量，以及人与动物给药剂量的换算关系，确定出小鼠阿胶泡腾片的等效剂量作为中等剂量，再以此为基础确定出低剂量和高剂量.研究确定的阿胶泡腾片对低、中、高剂量组小鼠的每日灌胃量分别为1.85 g/kg体重、3.70 g/kg体重和7.40 g/kg体重，给药体积0.1mL/10 g体重.

1.2.2免疫器官重量法[5]

取小鼠60只，雌雄各半，随机分成5组，空白对照组、阳性对照组、阿胶泡腾片低剂量组、中剂量组及高剂量组，每组12只.阿胶泡腾片低剂量组、中剂量组及高剂量组小鼠分别灌胃1.85 g/kg、3.70 g/kg、7.40 g/kg体重阿胶泡腾片，给药体积0.01 mL/g体重；阳性对照组灌胃等体积7.40 g/kg体重原料阿胶块；空白组小鼠灌胃等体积蒸馏水.各组小鼠每天清晨空腹灌胃1次，连续14 d.末次灌胃24 h后，称量各组小鼠体重，然后将小鼠脱臼处死，摘取脾脏、胸腺，称重，计算胸腺指数和脾脏指数.

1.2.3小鼠碳廓清试验[6]

小鼠分组、给药剂量、给药方法及时间同“免疫器官重量法”.末次灌胃2h后，各组小鼠均尾静脉注射0.01 mL/g体重用生理盐水稀释5倍的墨汁，立即计时，于注射墨汁后2min、15 min时经尾静脉采血0.05 mL，移入到含2mL0.1% Na2CO3溶液的试管中，混匀后测定吸光度，计算碳廓清指数K(carbon expurgation).

(1)

其中A1为2min时所采血样的吸光值；A2为15 min时所采血样的吸光值；t1为2min；t2为15 min.

1.2.4小鼠迟发型变态反应试验[7]

小鼠分组、给药剂量、给药方法及时间同“免疫器官重量法”.在灌胃至第6d时，各组小鼠均腹腔注射0.01 mL/g体重40 mL/L鸡血红细胞混悬液，进行致敏.在灌胃第10 d，各组小鼠于左后足跖部皮下均注射0.01 mL/g体重200 mL/L鸡血红细胞混悬液，进行攻击.同时，于攻击前及攻击后24 h测量各组小鼠左后足跖同一部位厚度，以足跖增厚程度表示迟发型变态反应值(delayed type hypersensitivity, DTH).

1.2.5数据处理

2 结果与讨论

2.1 阿胶泡腾片对小鼠免疫器官指数的影响

各组小鼠称重后处死，摘取脾脏及胸腺，用生理盐水清洗干净并用滤纸擦干表面水分后，称重，计算小鼠胸腺指数和脾脏指数.结果如表1所示.

由表1可知，灌胃不同剂量阿胶泡腾片和原料阿胶后，各试验组小鼠和阳性对照组小鼠免疫器官指数均有所增加.与空白对照组小鼠相比，各试验组小鼠和阳性对照组小鼠脾脏指数均有极显著差异(P<0.01).阿胶泡腾片中剂量组、高剂量组及阳性对照组小鼠胸腺指数与空白对照组小鼠相比均存在显著性差异(P<0.05)，但阿胶泡腾片低剂量组小鼠胸腺指数与空白组小鼠相比未见显著差异(P>0.05).与阳性对照组相比，阿胶泡腾片各剂量组小鼠免疫器官指数均无显著差异(P>0.05).表明所选用的阿胶泡腾片各剂量在增加小鼠免疫器官指数方面均能产生与原料阿胶相似的效果.

表1 小鼠免疫器官指数测定结果

注：与空白对照组相比，A.P<0.01，B.P<0.05，C.P>0.05，与阳性对照组相比，c.P>0.05.

2.2 阿胶泡腾片对小鼠碳廓清指数的影响

用紫外-可见分光光度计在波长680 nm处测定各小鼠血样的吸光度值，计算小鼠碳廓清指数.结果如表2所示.

表2 小鼠碳廓清指数测定结果

注：与空白对照组相比，A.P<0.01，C.P>0.05,与阳性对照组相比，b.P<0.05，c.P>0.05.

由表2可见，灌胃原料阿胶及不同剂量阿胶泡腾片后，小鼠碳廓清指数均有不同程度增加.与空白对照组相比，阿胶泡腾片高剂量组及阳性对照组小鼠碳廓清指数具有极显著差异(P<0.01)，但阿胶泡腾片低剂量组及中剂量组小鼠碳廓清指数的差异并不显著(P>0.05).与阳性对照组相比，阿胶泡腾片低剂量组碳廓清指数有显著差异(P<0.05)，阿胶泡腾片中剂量组及高剂量碳廓清指数均无显著差异(P>0.05).表明中剂量和高剂量阿胶泡腾片在提高小鼠碳廓清指数方面具有与原料阿胶相似的效果.

2.3 阿胶泡腾颗片对小鼠足肿胀度的影响

按照上述方法试验后，用游标卡尺测定小鼠足跖厚度，计算DTH值.结果如表3所示.

表3 小鼠DTH值测定结果

注：与空白对照组相比，A.P<0.01，B.P<0.05,与阳性对照组相比，c.P>0.05.

由表3可见，灌胃阿胶泡腾片和原料阿胶后，阿胶泡腾片各剂量组小鼠和阳性对照组小鼠DTH值均有不同程度增加.与空白对照组相比，阿胶泡腾片低剂量组、中剂量组小鼠DTH值均具有显著差异(P<0.05)，而阿胶泡腾片高剂量及阳性对照组DTH值均存在极显著差异(P<0.01).与阳性对照组相比，阿胶泡腾片各剂量组小鼠DTH值均未见显著差异(P>0.05).表明所选用的阿胶泡腾片各剂量在提高小鼠足肿胀度方面均能产生与原料阿胶相似的效果.

3 结束语

阿胶为传统经典中药，在我国应用历史已超过2 500多年.阿胶中主要成分是胶原蛋白.现代中医学认为，阿胶具有补血、抗疲劳、提高机体免疫功能等多种功效.阿胶泡腾片是以传统阿胶块为主要原料，经过现代特殊工艺技术研制而成的一种新剂型.为了明确阿胶泡腾片对机体免疫功能影响，本文以小鼠为实验动物，以成人每日推荐阿胶使用量为基础，根据阿胶泡腾片中阿胶实际含量，换算出小鼠等效剂量作为中等剂量，再扩大到两倍或缩小到两倍分别作为高剂量及低剂量.本文所选用的阳性对照药为原料阿胶块，阳性对照药的剂量与阿胶泡腾片高剂量的等效剂量相同.

胸腺为中枢免疫器官，脾脏为外周免疫器官.脾脏指数和胸腺指数与机体免疫功能有直接关系，机体免疫功能在一定程度上会随免疫器官指数上升而增强.对小鼠灌胃阿胶泡腾片后，小鼠胸腺指数和脾脏指数均有所增加，表明阿胶泡腾片能够不同程度促进小鼠中枢和外周免疫器官发育，提高机体免疫功能，与原料阿胶具有相似的效果.

巨噬细胞吞噬能力可以反映机体的非特异性免疫功能.当颗粒状异物(如碳粒)静脉注射进入机体后，能迅速被巨噬细胞吞噬清除.此时，若将异物量恒定，测定异物在血液中被吞噬细胞消除的速率，就可以反映巨噬细胞的吞噬功能[8].碳廓清试验结果显示，给小鼠灌胃中剂量和高剂量阿胶泡腾片后，小鼠碳廓清指数明显增加，提示使用与原料阿胶等效剂量或低于等效剂量的阿胶泡腾片，均能明显提高小鼠巨噬细胞吞噬能力，增强小鼠非特异性免疫功能.

T淋巴细胞在机体免疫应答以及移植排斥反应中起重要作用.T淋巴细胞在特异性免疫应答中介导细胞免疫，包括迟发型变态反应.鸡血红细胞作为半抗原注射进入小鼠体内后，能与小鼠体内蛋白结合成完全抗原，即可以刺激T淋巴细胞增殖分化产生效应性T淋巴细胞.当一定浓度的鸡血红细胞混悬液被重新注射到小鼠足跖部位时，即可诱发效应T淋巴细胞产生局部迟发型变态反应，24～48h内达到最高峰.迟发型变态反应试验结果显示，给小鼠灌胃阿胶泡腾片后，能不同程度的提高小鼠的DTH值.提示阿胶泡腾片能够激发小鼠T细胞介导细胞免疫应答，增强小鼠的细胞免疫功能.

[1] 吴长虹, 王若光. 阿胶的历史沿革,研究现状及相关思考[J]. 湖南中医药大学学报, 2008, 28(6): 77-79.

[2] 刘文义, 王莉丽. 阿胶补益成分分析方法的研究进展[J]. 齐鲁药事, 2009, 28(11): 682-684.

[3] 毛跟年, 郭 倩, 瞿建波,等. 阿胶化学成分及药理作用研究进展[J]. 动物医学进展, 2010, 31(11): 83-85.

[4] 常德有, 杨 靖, 董福慧. 阿胶对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化功能的影响[J]. 中国老年学志,2009, 29(24):3 230-3 232.

[5] 徐燕萍, 胡小庆, 湛学军,等. 莪术对免疫抑制小鼠免疫功能的影响[J]. 山东医药, 2012, 52(4): 51-53.

[6] 丁永芳, 周玲玲, 方泰惠. 紫七软肝颗粒对小鼠免疫功能的影响[J]. 中国中医药信息杂志, 2003, 10(5): 20-21.

[7] 袁红波, 赵 文, 赵仁邦,等. 金丝小枣糖浆对小鼠免疫功能的影响[J]. 中国食品学报, 2008, 8(1): 13-16.

[8] 杨 莲, 段小花, 李松梅,等. 普洱茶对免疫低下小鼠单核-巨噬细胞洗脱碳粒廓清功能的影响[J]. 云南中医中药杂志, 2008, 29(10): 43-44.