几种抗菌素对鸡大肠杆菌的抑菌试验

范国英,刘志科,李冲,张秋雨,耿中伟,陈桂香

（河南科技学院,河南新乡453003）

鸡大肠杆菌病（Colibosiscillo）是由大肠埃希氏杆菌的某些特定血清型引起的鸡的一种传染性疾病的总称,其临床特征主要包括大肠杆菌肉芽肿、腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、气囊炎、眼炎、卵黄性腹膜炎等.大肠杆菌为革兰氏阴性菌,主要寄居在人和动物肠道中,对营养要求不高,在普通培养基上生长良好,并广泛分布于水、土壤或腐败物中.不同品种不同日龄的鸡群均可发病,尤其对雏鸡危害更大.一旦感染大肠杆菌病,轻者造成鸡群生产性能下降,重者导致发病鸡群死亡,给养禽业造成巨大的经济损失.20世纪80年代以来,大肠杆菌在我国养禽业中的发生越来越普遍,越来越严重,对养禽业构成极大的威胁[1-2].

通过临床常用的几种抗生素药物对提取的发病鸡大肠杆菌进行分离培养和药敏试验,进一步说明鸡大肠杆菌耐药性的问题,为养殖户对大肠杆菌的治疗提供科学的依据.

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验药物先锋霉素、青霉素、强力霉素、氨苄西林、卡那霉素、四环素、复达欣、新霉素、红霉素、头孢噻呋、苯唑青霉素、氨苄青霉素、美满霉素、先锋霉素Ⅳ等药敏片,营养琼脂、蒸馏水、氯化钠、氢氧化钠、牛肉膏、蛋白胨等购于河南新乡鼎盛医疗器械有限公司.各种培养基的配置均由河南科技学院动科学院基础兽医教研室配置.

1.1.2 试验菌种从卫辉市某鸡场采集有腹泻症状疑似大肠杆菌病病鸡的粪便,共采集30例病料.

1.1.3 器械与试剂电子天平,购于河南新乡鼎盛医疗器械有限公司；电热恒温培养箱,电热鼓风干燥箱,蒸汽高压灭菌锅,微量加热器等均购于上海博迅实业有限公司.

1.2 方法

1.2.1 培养基的制备蛋白胨10 g,牛肉膏3 g,氯化钠5 g,琼脂20 g,蒸馏水1000 mL.将除琼脂以外的各种成分溶于蒸馏水中,加热煮沸,使溶液稳定,过滤.加入15%氯化钠溶液,调整pH值为6.8～7.0,加入琼脂,搅拌使琼脂溶化.分装,121℃高压灭菌15 min[3-4].

1.2.2 细菌的分离与鉴定无菌采取其肝脏、心血和肺脏的组织,分别划线接种到有培养基的平板上,37℃培养20 h.培养后涂片进行革兰氏染色镜检[5].

1.2.3 菌悬液的制备离心取上清接种于营养肉汤培养基中,置37℃恒温箱中培养,18 h后用无菌生理盐水配制成含活菌数约为106个/mL的菌悬液,待用.

1.2.4 纸片扩散法用接种环取菌液0.1 mL,均匀涂布于琼脂平皿上,用无菌镊子分别夹取灭菌纸片,贴在含菌平皿上,每平皿等距离放置药敏片10片,盖上平皿,置37℃培养24 h后取出,测量抑菌圈直径（mm）,取其平均值,即为该药对大肠杆菌的抑菌结果.判定标准：抑菌圈直径小于10 mm为低度敏感；抑菌圈直径在10～18 mm之间为中度敏感；抑菌圈直径大于18 mm为高度敏感[4].

2 结果与分析

2.1 细菌的分离鉴定结果

在营养琼脂平板上培养后,形成中等大小,圆形凸起,表面光滑湿润,浅灰色半透明菌落.革兰氏染色镜检,可见两端钝圆、多数散在排列的革兰氏阴性短杆菌.

2.2 药敏试验结果

药敏试验结果见表1.

表1 不同药敏片对大肠杆菌的抑菌圈大小Tab.1 Bac teriostasis circle sizes bydiffent antibiotics ofEscherichia colimm

由表1可知,该大肠杆菌对青霉素、复达欣、头孢复方、苯唑青霉素均不敏感,对卡那霉素、氨苄西林、新霉素、氨苄青霉素低敏,对先锋霉素、四环素、先锋霉素Ⅳ、红霉素、美满霉素中度敏感.本次药敏试验未发现高度敏感的抗菌药物.

本次药敏试验结果表明,临床上常用抗菌药物中已有很多对大肠杆菌产生了严重的耐药性.禽类大肠杆菌病的多重耐药菌株普遍存在,且日趋上升.禽类大肠杆菌病的耐药性日益严重,其药敏谱越来越窄,可选用的抗菌药物也越来越少,随着大肠杆菌多重耐药性的逐渐增加,联合用药的效果也必然会越来越差[6].

3 讨论与结论

不利的外界条件常是导致禽类大肠杆菌病爆发的主要原因.如饲养管理不当、舍内空气不流通,不及时清理粪便造成的空气中氨气浓度过高,鸡群饲养密度过大,舍内温度过低、湿度过大,以及由于更换饲料,注射疫苗,气温的变化等一些应激因素或是禽类机体由于其他疾病等因素造成的抵抗力下降等都会引起禽类爆发大肠杆菌病.禽类大肠杆菌病的爆发一般具有：可感染不同日龄的禽类,且发病症状典型；发病率、死亡率以及复发率高；同时与其他疾病的混合感染率非常高；可经呼吸道、消化道等途径传播,也可经垂直传播；由于药物的耐药性严重使得大肠杆菌病的治疗相当困难[6].

多年来,由于抗生素类药物的滥用导致大肠杆菌病的耐药菌株越来越多,耐药谱也越来越广.本试验已证明大肠杆菌对包括卡那霉素、青霉素、新霉素、氨苄西林、庆大霉素等药物都有不同程度地产生了耐药性,对四环素、先锋霉素Ⅳ、强力霉素、红霉素等中度敏感.试验中几种抗生素类药物均未对该种大肠杆菌菌株产生很好的敏感性.对于大肠杆菌病的治疗仅靠某种药物已很困难,必须采取综合的防治措施.另外,由于发病鸡饮食较差,一味的将药物拌到饲料中饲喂的话,采食药物的量达不到治疗剂量而没有使药物发挥作用.将不溶于水的药物制成水溶性或联合用药治疗效果较好.孟志敏等用甲砜霉素可溶性粉末对鸡大肠杆菌的治疗试验取得了较好的效果,建议将不溶水的甲砜霉素制成可溶性的药物用于饮水效果较好[7].冯善祥采用一种西药复方制剂氟苯尼考-硫酸黏菌素可溶性粉对鸡大肠杆菌病进行治疗试验,发现复方制剂对鸡大肠杆菌病具有明显的保护作用,可用于鸡大肠杆菌病的防治[8].

在生产过程中长期使用某种抗生素类药物或某类抗生素类药物对疾病的治疗和控制上,疗效确切,但机体极易产生抗药性,从而导致药物的疗效降低.对大肠杆菌曾有很好抑菌效果的氨苄西林和头孢曲松在本试验中却没有表现出来很好的抗菌活性,可见大肠杆菌已对该药产生了耐药性.细菌耐药性已成为全球关注的热点之一.在这种情况下,人们开始更多的关注一些天然药物.经国内外研究发现,某些天然植物具有良好的抗菌活性,并且与合成抗菌药物联合使用时,能增强抗菌药物的抗菌活性,同时可以抑制或者消除细菌的耐菌性.邵泽光等以黄连、黄芩、黄柏、黄芪等七种中药复方制剂配合乳酸环丙沙星对发病鸡进行治疗,治愈率达98%,有效率达100%,明显优于中药组和乳酸环丙沙星组单独用药的治疗效果[9].高迎春等用一种中药提取制剂地锦草颗粒对鸡大肠杆菌病进行临床疗效试验,其有效率治愈率分别达到了76.9%和69.2%,中药提取制剂能明显的消除大肠杆菌的多重耐药性,对耐药基因的扩散有抑制作用[10].鲁改儒采用不同的中药复方制剂与庆大霉素等抗生素类药物对肉仔鸡大肠杆菌病进行治疗对比试验,结果显示中药复方制剂的治疗效果优于抗生素治疗效果[11].

由于不同养殖场的饲养规模﹑饲养水平以及不同的用药习惯,使得不同地区的大肠杆菌病的耐药性差异很大.不同地区的大肠杆菌病都有其各自不同的药敏谱,即使新一代的抗生素类药物的治疗效果也不见得就好.目前我国禽类大肠杆菌病的耐药性越来越严重且非常复杂,几乎所有的抗菌药物即使是新一代的抗菌药物也已产生了耐药性.临床上如不进行药敏试验很难找出高效适用的抗菌药物.传统的将抗生素类药物作为保健药物的饲养模式如不改变,只会使禽类大肠杆菌病的耐药性越来越严重,使得我国的大肠杆菌病的防治工作也越来越困难.

本文通过对临床常用的几种抗生素药物对提取的发病鸡大肠杆菌进行分离培养和药敏试验,得出相关数据,以期能为养殖户对大肠杆菌的治疗提供科学的依据.

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[3] 崔保安,卢中华,毛春生,等.河南省鸡埃希氏大肠杆菌血清型分析的研究[J].中国兽医科技,1993,23（8）：7-8.

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[5] 李本科.鸡大肠杆菌的分离鉴定[J].山东畜牧兽医,2012,33（1）：17-18.

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[7] 孟志敏,牛小飞,李连缺,等.甲砜霉素可溶性粉对人工感染鸡大肠杆菌病的药效学研究[J].湖北农业科学,2012,51（1）：120-122.

[8] 冯善祥.复方制剂对鸡大肠杆菌病的临床疗效观察[J].中国畜牧兽医,2011,38（2）：236-238.

[9] 邵泽光,丰西科,高春风.中西药治疗大肠杆菌病的试验[J].中国畜禽种业,2011（1）：145-147.

[10] 高迎春,张传津,都业良.地锦草颗粒对人工感染鸡大肠杆菌病临床疗效试验[J].中兽医医药杂志,2012（1）：52-55.

[11] 鲁改儒.中药复方制剂防治肉仔鸡大肠杆菌病的疗效观察[J].黑龙江畜牧兽医：科技版,2011（2）：117-119.