牛人工授精技术要点

张书国

（贵州省遵义县虾子镇农业服务中心，遵义 563125）

人工授精已成为养牛业的现代化繁殖技术，对提高养牛业的遗传繁殖速度和生产效率起到了重大推进作用。可提高优良公牛的配种效率，扩大母牛配种头数，加速母牛育种工作进程和繁殖改良速度，减少种公牛饲养头数，减低饲养管理费用，有利于扩大公牛配种地区范围和提高母牛配种受胎率，笔者在实践操作过程中采用以下措施，熟练掌握发情鉴定、饲养管理、适时输精、输配操作技术等，结合实际情况，现将牛冷冻精液人工授精技术要点总结如下，仅供参考。

1 牛冷冻精液输精站建设

1.1 人工授精操作室

1.1.1 精液处理室 面积可为8～10 m2，要求屋顶、墙壁、地面平整。室内放置有液氮罐贮存冷冻精液，并进行冷冻精液的解冻及精液品质检查。

1.1.2 直检、输精室 面积为30～40 m2。室内安置有1～2个6柱栏，用于对母牛直肠检查进行发情鉴定、妊娠诊断和不孕症的防治，同时亦用于母牛输精。要求室内光线充足，地面平整，便于清除粪便。

1.2 母牛系留场（棚）

根据配种范围内的适繁母牛数来确定一定面积的场地，用于栓系来站检查和配种的母牛。一般距种公牛栓系场应保持20 m以上距离，或用墙壁圈舍隔开。

2 器械和药物的准备

2.1 药液的配制

75%酒精及75%酒精棉球；1／3 000新洁尔灭溶液，生理盐水棉球。

2.2 解冻液配制

2.2.1 2.9%柠檬酸钠溶液。

2.2.2 葡-柠溶液：葡萄糖3.0 g、柠檬酸钠1.4 g、蒸馏水加至100 m1。

2.2.3 复方蔗-柠溶液：蔗糖1.15 g、柠檬酸钠1.7 g、磷酸二氢钾0.325 g、碳酸氢钠0.09 g、氨苯磺胺0.3 g、蒸馏水加至100 m1。

2.3 器械

30 L液氮贮存罐1个；3 L液氮贮存罐1个；30 L液氮运输罐1个；生物显微镜及显微镜保温箱；恒温水浴箱；各式牛用输精器；手提式高压灭菌器。

2.4 器械的洗涤

人工授精用的器械在每次使用以后，均需用洗涤剂洗刷干净，特别是注射器、输精器内的残留精液均应彻底洗涤干净，并需保持洁净、干燥，存放于清洁的橱柜内。

2.5 器械消毒和冲洗

2.5.1 玻璃棒、金属镊子、搪瓷方盘需用75%酒精棉球消毒。

2.5.2 解冻用小试管、解冻液、注射器、生理盐水棉球、毛巾、纱布需用高压蒸汽消毒。要求消毒温度达到115℃维持30 min。

2.5.3 颗粒及安瓿型冷冻精液输精器需经高压蒸汽消毒。当连续为数头母牛输精时，每输精1头母牛后，输精器可用75%酒精棉球由前向后擦拭消毒，待干燥后，再用生理盐水棉球擦拭后，可再用于另一头母牛输精。

2.5.4 细管型冷冻精液输精器的前段接头需以高压蒸汽消毒，接杆部分可以75%酒精棉球消毒，待干燥后再用生理盐水棉球擦拭，每次用于输精，只需更换输精器接头即可。

2.5.5 凡是接触精液的器械如解冻小试管、颗粒及安瓿型冷冻精液输精器，贮存精液容器等均需经彻底消毒，并再经灭菌的解冻液冲洗2次，以保持精子的适宜环境。

3 精液品质检查

3.1 精子活率评定

3.1.1 颗粒型冷冻精液应先取2.9%柠檬酸钠溶液1～1.5 m1，加温到38±2℃，投入颗粒冷冻精液一粒，轻轻摇荡，当溶化尚余1/2～1/3时，脱离加温使其在外界温度下溶化，用压片法立即在150～600倍显微镜下检查。

3.1.2 检查精子活率用的显微镜载物台应保持35℃～38℃温度。

3.1.3 在显微镜视野下，呈直线前进运动的精子数占全部精子数的百分率来评定精子活率。100%的精子呈直线前进运动者评为1.0；90%的精子呈直线前进运动者评为0.9，以此类推。

3.2 精子活率标准

每头份冷冻精液的直线前进运动精子数必须达到以下标准：细管型1 000万个以上／支；颗粒型1 200万个以上／粒；安瓿型1 500万个以上／安瓿。

3.3 精子顶体完整率评定

采用姬姆萨染色法作显微镜观察或用干拢相差显微镜观察。每个样品应观察精子总数500个。解冻后精子顶体完整率不得低于40%。

4 冷冻精液的包袋、标记和运输。

4.1 冷冻精液的包装

细管型冷冻精液应封闭严密；颗粒型冷冻精液必须以无菌容器包装；安瓿型冷冻精液应封闭严密，耐受冷冻。

4.2 冷冻精液的标记

4.2.1 细管、安瓿的外壁和颗粒冷冻精液容器上应标记或栓系有标记牌。注明站名、公牛号、精液制冻日期、批号以及该批冷冻精液的精子活率。

4.2.2 不同品种公牛的冷冻精液可用不同颜色包装加以区别。

4.3 冷冻精液运输

4.3.1 移动液氮贮存罐时，应提握罐柄、轻拿轻放、防止冲撞。

4.3.2 液氮贮存罐及液氮运输罐装车运输时，应在罐底加防震软垫。罐体应加外套装入木箱，牢固地加以栓系，防止倾倒。

4.3.3 运输冷冻精液应有专人押送，办理好交接手续卡片。途中应随时注意检查并及时补充冷源。

5 冷冻精液贮存

5.1 液氯贮存

在液氮贮存罐内贮存的冷冻精液，必须切实地浸没于液氮中。

5.2 提筒贮存

取放贮存冷冻精液的提筒，只允许上提到液氮罐的罐颈段之下，严禁提出罐外，在罐内脱离液氮的时间不得超过10s。

5.3 转移

在向另一液氮贮存罐内转移冷冻精液时，精液提筒不得脱离液氮5s。

5.4 取放冷冻精液

取放冷冻精液之后，应及时盖上罐塞，以减少液氮消耗及防止异物落人罐内。

5.5 预防精液混杂

严防不同畜种、品种、个体公畜的冷冻精液混杂，难以辨识。

5.6 定期清理洗刷

对长期用作贮存冷冻精液的液氮罐应定期清理和洗刷。

6 冷冻精液的解冻

6.1 细管、安瓿型冷冻精液

可用38士2℃温水直接浸泡解冻。

6.2 颗粒型冷冻精液

应逐粒分别用38±2℃的1～1.5 ml的解冻液解冻。不得将2粒以上的颗粒冷冻精液投入到一份解冻液中解冻。

6.3 解冻

解冻后的精液温度不得超过外界环境温度，一般应控制在10℃以下。

6.4 使用

细管型冷冻精液应在1 h内用于输精；安瓿、颗粒型冷冻精液应在2 h内用于输精。

6.5 运输

解冻后精液需作运输时，应置于4℃～5℃温度下不得超过3 h。

7 输精

7.1 健康检查

母牛需经发情鉴定及健康检查后才能给予输精。

7.2 输精准备

母牛在输精前，外阴部应经清洗，以1／3 000新洁尔灭溶液或酒精棉球擦拭消毒，待干燥后，再用生理盐水棉球擦拭。

7.3 剂量

发情母牛每次输入1头份解冻后冷冻精液。

7.4 精子质量要求

输精用精子活率应达0.3以上，输入的直线前进运动精子数，细管型冷冻精液为1 000万个以上；颗粒型冷冻精液为1 200万个以上；安瓿型冷冻精液为1 500个以上。

7.5 精子输入方法

采用直肠把握输精法将精液注入到子宫颈内口或子宫体部位。

7.6 记录

输精母牛须作好记录。各项记录必须按时，准确，并定期进行统计分析。