GC 法同时测定妇科十味片中α-香附酮和藁本内酯

王红，韩晓萍

(青海省食品药品检验所，青海西宁810016)

妇科十味片属于妇科常用药，具有疏肝理气、养血调经之功效，用于血虚肝郁所致月经不调、痛经、月经前后诸证［1］。处方中包括香附、川芎、当归、元胡、白术、甘草、红枣、白芍、赤芍、熟地黄、碳酸钙等十一味药，在现行的质量标准［2］中，【鉴别】项下仅有当归、川芎，香附和芍药苷的TLC鉴别;【含量测定】项下对白芍和赤芍中的芍药苷进行了HPLC测定，无法全面有效控制药品的质量。文献检索表明，有学者用HPLC法分别对其中的延胡素乙素，阿魏酸和α-香附酮进行定量测定研究［3-5］。但此处方中含有大量的挥发性药材，如香附、当归、川芎等，其中香附为占总方比重约50%，为方中君药，生粉投料;而当归和川芎作为临床常用补血活血之药对［6］，处方量约为20%，为部分生粉投料。为了更好地控制这部分物质在制剂中的存在情况，本研究采用GC法对妇科十味片中的α-香附酮和藁本内酯进行了定量测定研究，方法可行，质量可控。

1 仪器和试药

Agilent 6890型气相色谱仪，FID检测器(美国珀金埃尔默公司)，Agilent 5973型质谱检测器;HH-6温控水浴锅(国华电器有限公司);KQ5200型超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

α-香附酮(国家标准物质中心提供，批号为A0588，HPLC法分析纯度≥98%);藁本内酯(国家标准物质中心提供，批号为A0219，HPLC法分析纯度≥98%);妇科十味片样品(市售，3个厂家，分别编号为S1、S2、S3、)。正己烷、乙酸乙酯均为色谱纯，乙醚为分析纯。

2 方法和结果

2.1 色谱条件色谱柱为hp-5 ms毛细管柱(60 m×0.32 mm×0.25 μm)，进样口温度280℃，升温程序为:初始温度45℃，保持2.0 min，再以40℃/min升温至160℃，保持2.0 min，再以1.0℃/min升温至180℃，保持2.0 min，再以4.0℃/min升温至260℃，保持2.0 min，分流比30∶1，载气(氮气)体积流量:1.5 mL/min。检测器温度300℃，H2流量:45 mL/min，空气体积流量:450 mL/min，灵敏度倍数为1［7-9］。

2.2 对照品溶液的制备称取α-香附酮、藁本内酯各约10 mg，精密称定分别为10.23 mg、11.58 mg，置于5 mL量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液(每1 mL含α-香附酮、藁本内酯分别为2.046 mg、2.316 mg)。

2.3 样品溶液制备取本品10片(薄膜衣片除去包衣)，研细，精密称取1.5 g，置于索氏提取器中，加入乙醚50 mL，索氏提取3 h，提取液置于蒸发皿中，并用10 mL乙醚洗涤索氏提取器，合并两次的乙醚液，低温挥干，残渣加乙酸乙酯溶解转移至2 mL量瓶中，定容，摇匀，过滤即可［10］。

2.4 测定法分别精密吸取上述溶液各1 μL，注入气相色谱仪，测定，即得。测定色谱图见图1，结果表明，此色谱条件分离良好。

图1 藁本内酯(A)、α-香附酮(B)、乙酸乙酯空白溶剂(C)和供试品溶液(D)色谱图Fig.1 Chromatograms of α-cyperone(A)，ligustilid(B)，ethyl acetate(C)and sample(D)

2.5 专属性试验用GC-MS方法对上述两种溶液中的两个目标物质进行了一致性确认。GC参数同上，MS部分［11］:溶剂延迟2 min，EI源，电子能量70eV，扫描范围:50～500 m/z，GC-MS结果确认了供试品溶液中的目标峰和对照品溶液的一致性，表明在相应检测时间处无杂质峰干扰。

2.6 方法学考察取同一厂家妇科十味片(S1)进行分析测定，对其进行方法学考察。

2.6.1 线性范围考察分别精密吸取上述对照品贮备溶液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL置于2 mL量瓶中，加乙酸乙酯稀释并定容至刻度，制备成一系列的标准对照品溶液，按2.1项的色谱条件进行分析测定，以峰面积和进样量进行线性回归，结果见表1，表明各对照品在进样范围内呈现良好的线性。

表1 线性考察结果Tab.1 Results of linearity test

2.6.2 精密度考察取同一对照品溶液，按2.1项色谱条件，连续进样5次，测得α-香附酮、藁本内酯的峰面积，计算得RSD分别为0.84%、0.78%，试验表明该方法精密度良好。

2.6.3 重复性试验取同一批号样品5份，按正文拟定的方法进行测定分析，结果α-香附酮平均含量为0.323 3 mg/片、RSD为0.56%;藁本内酯平均含量为0.375 9 mg/片、RSD为0.81%，结果表明，本方法的重复性较好。

2.6.4 稳定性考察取同一供试品溶液，分别在制备后的0、4、8、14、20、26、32 h进样测定，分别测得α-香附酮、藁本内酯的峰面积，其RSD依次分别为0.84%、0.68%，试验表明在32 h内，α-香附酮和藁本内酯的稳定性良好。

2.6.5 加样回收率测定精密称取已知含有量的样品6份，每份约0.75 g，精密称定，各分别加入一定量的α-香附酮、藁本内酯对照品，按2.3项下方法制成供试品溶液，进样分析，计算回收率，结果见表2，结果表明本方法回收良好。

2.7 样品测定按上述建立好的方法对3批市售样品中的该两种成分进行定量测定，结果见表3。

3批样品的含量均在线性范围之内，试验表明市售不同厂家的妇科十味片中α-香附酮和藁本内酯的含有量差异较大，为保证药品疗效，需要进一步建立质量标准进行规范。

表2 加样回收率试验结果Tab.2 Results of recovery test

表3 样品测定结果(n=3)Tab.3 Results of sample determination(n=3)

3 讨论

3.1 对于所采用的α-香附酮和藁本内酯对照品，标示为HPLC级别，在研究中我们采用进行了峰面积归一化法标示，发现在GC分析中两者的纯度仅为90%左右，因仅为研究性分析，故最终样品含量未进行折算。

3.2 样品提取方法考察在提取溶剂的考察上，不仅对正己烷、乙酸乙酯、乙醚等溶剂的单独提取情况进行了考察，而且也考察了乙醚-正己烷(1∶1)混合溶剂［12］;在提取方法和时间的考察上分别研究了浸泡、超声、振荡和索氏提取法，综合整个GC图谱及方法可操作性，最终选定样品处理方法为乙醚索氏提取3 h、低温挥干后，乙酸乙酯定容分析。

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