多肿瘤蛋白芯片中NSE检测的临床意义

邹 华 王 东 彭 韬 谢家印 杨雪琴 单锦露

肿瘤标志物(tumor markers,TM)是指肿瘤细胞分泌或脱落到体液、组织中的物质，或是在宿主对体内寄生物反应产生并进入到体液、组织中的物质。1种肿瘤可以有多种不同的肿瘤标志物，不同肿瘤也可以表达相同的肿瘤标志物。C-12型多肿瘤芯片常用于肿瘤的临床诊断，具有检测快速、易于操作，以及高通量、联合指标分析等优点，同时对肿瘤高危人群的筛查也具有显著的临床意义[1]。本文对资料完整的25 076例多肿瘤蛋白芯片检测结果进行回顾性分析，重点分析不同人群和常见肿瘤中NSE(神经元特异性烯醇化酶)阳性检测率，探讨NSE单项及联合其他肿瘤标志物与不同人群及常见肿瘤的相关性，为深入了解C-12型多肿瘤芯片中NSE阳性检测在肿瘤筛查和诊断中的重要价值，提供临床依据。

1 材料与方法

1.1 临床资料

我院自2003年12月至2011年7月，应用浙江湖州数康生物科技有限公司生产的C12型肿瘤诊断用蛋白芯片试剂盒(简称C12)，采用化学免疫法完成多肿瘤蛋白芯片检测38 600例次，其中诊断不明确者4 229例，同一患者多次检测达11 106例次，可供分析的病例共25 076例，其中男性15 993例，女性9 083例；年龄12～94岁，平均55.82岁。恶性肿瘤患者均经细胞学或组织学检查确诊。

25 076例可供分析的病例中，恶性肿瘤组(肿瘤组)11 485例，包括肺癌4 004例、肠癌1 178例、肝癌1 069例、食管癌785例、乳腺癌477例、胃癌375例、胰腺癌266例、卵巢癌208例、子宫内膜癌78例、前列腺癌63例及其它肿瘤2 982例，男性7 226例，女性4 259例，平均年龄55.86岁；良性病变组(良性组)3 803例，男性2 248例，女性1 555例，平均年龄55.91岁；正常体检组(正常组)9 788例，男性6 519例，女性3 269例，平均年龄55.73岁。3组患者性别、年龄差异无统计学意义(P>0．05)。

1.2 检测方法

抽取空腹静脉血2 ml，分离血清，-20℃保存待测。72 h内应用HD2001A 生物芯片检测仪进行检测，试剂盒为浙江湖州数康生物科技有限公司生产的C12型肿瘤诊断用蛋白芯片试剂盒(简称C12)。12 种肿瘤标志物包括：糖类抗原199(CA19-9)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原242 (CA242)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原153 (CA153)、甲胎蛋白(AFP)、铁蛋白( Ferritin)、游离型前列腺特异性抗原(fPSA)、前列腺特异性抗原( PSA)、生长激素( HGH)及绒毛膜促性腺激素β(β-HCG)。严格按说明书进行操作。正常参考值范围为:CA125<35 U/mL，CA19-9<35 U/mL，CA153<35 U/mL，CA242<20 U/mL，CEA<5 ng/mL，AFP<20 ng/mL，NSE<13 ng/mL，PSA<5 ng/mL，fPSA<1 ng/mL，HGH<7.5 ng/mL，Ferritin<219 ng/mL(女)、322 ng/mL(男)，β-HCG<3 ng/mL，高于正常参考值判定为升高或阳性。

1.3 统计学分析

应用SPSS 18.0统计软件分析处理数据，年龄采用t检验，其它资料采用卡方检验。

2 结果

2.1 不同人群NSE阳性检测率

由表1可见，11485例恶性肿瘤患者中，NSE检测阳性者103例(0.90%)；3 803例良性病变中，NSE检测阳性者14例(0.37%)；正常体检9 788例中，NSE检测阳性者3例(0.03%)。肿瘤组NSE检测阳性率显著高于良性疾病组及正常组 (P<0.05)；良性疾病组NSE检测阳性率显著高于正常组(P<0.05)。

表1 各组中NSE检测阳性率情况(例，%)

2.2 各种肿瘤患者中NSE检测阳性率情况

由表2可见， NSE检测阳性率前列腺癌最高(3.20%)，其次为卵巢癌(1.92%)、肺癌(1.15%)、肝癌(0.94%)。各肿瘤患者NSE检测阳性率比较无显著差异(P>0.05)。

表2 各种肿瘤中NSE检测阳性率情况(例，%)

注：其他肿瘤包括皮肤癌、肾癌、头颈部肿瘤、恶性淋巴瘤、恶性黑色素瘤、胸腺瘤等

2.3 各良性疾病中NSE检测阳性情况

3803例良性疾病中NSE检测阳性者14例，其中慢性胃炎2例，急性胃炎、冠心病、脑梗塞、慢性肾炎、肾病综合征、肾功能不全、肝硬化、胆囊息肉、结核性心包炎、梗阻性黄疸、不完全性肠梗阻、膀胱乳头状瘤各1例，各类良性疾病中NSE检测阳性率无显著差异(P>0.05)。

2.4 肿瘤患者中NSE联合其它肿瘤标志物检测阳性情况

由表3可见，103例NSE检测阳性的肿瘤患者中，其他肿瘤标志物检测阳性率最高的是CA125(78.64%)，其次为Ferritin(72.82%),CEA(52.43%)和CA199(44.66%)。

表3 NSE与其他肿瘤标志物联合检测阳性情况(例，%)

3 讨论

肿瘤标志物是目前早期发现肿瘤和评估疗效的手段之一。多肿瘤芯片通过利用抗原抗体特异性结合的免疫学原理，在固相基质上结合多肿瘤标志物抗体，捕捉被检测者血清中的对应肿瘤标志物，通过特定的化学反应产生光信号，实现对肿瘤标志物定量检测到目的[2]。同时，通过联合检测克服单一肿瘤标志物检测作为诊断手段其灵敏度和特异度的有限性，提高恶性肿瘤的诊断准确率，降低漏诊率[3]，因而在恶性肿瘤的临床诊断中得到了广泛应用。

神经元特异性烯醇化酶 (NSE) 是神经和神经内分泌组织中1种参与糖酵解的酸性蛋白酶,为二聚体的烯醇化酶异构酶的1种，是有价值的脱羧基化细胞系列细胞肿瘤标志物，主要作用是催化二磷酸甘油变成烯醇式磷酸丙酮，可以反映细胞更新及凋亡率。正常情况下，NSE主要特异性地存在于神经元和神经内分泌细胞的胞质中，在起源于神经内分泌细胞的肿瘤组织也有异常表达[4]。

NSE升高最常见于神经母细胞瘤、小细胞肺癌 (SCLC) ，在其它肿瘤如甲状腺髓质癌、嗜铬细胞瘤、胰岛细胞瘤、黑色素瘤、视网膜母细胞瘤等患者的血清NSE也可升高。目前 NSE已作为神经系统损伤和 SCLC的标志物,被用于肿瘤的鉴别诊断、放化疗疗效判断、预后监测等[5]。不同组织类型的肺癌患者的癌组织和血清中NSE 含量按高低排列依次为SCLC、大细胞癌、鳞癌和腺癌[6]。卢先锋等[7]统计分析712篇文献，共统计5 2832例肺癌患者血清，NSE灵敏度39.73%。王勇等[8]NSE单项检测敏感度0～44.78%，联合检测灵敏度50%～89.47%。国内外文献显示 NSE不仅在 SCLC 中明显升高,也在一些NSCLC中明显升高,总阳性率达 50%左右[9]。小细胞肺癌是1种神经内分泌起源的肿瘤，NSE是目前诊断小细胞未分化肺癌最敏感、最特异的标志物，可作为鉴别肺癌病理类型的重要指标[10]。FIZAZI动态观察135例小细胞肺癌患者，发现NSE水平对小细胞肺癌患者预后判断很有意义[11]。

不同方法的NSE测定有一定差异。放免法测定灵敏度高，特异性强，样品不需要分离纯化，可直接测定[12]。蔡燕燕采用放射免疫法，检测 374例肺癌患者、161例肺良性病变和 158例正常对照组血清NSE水平,结果显示肺癌患者血清NSE水平显著性高于肺良性疾病患者和正常对照组,小细胞肺癌血清NSE水平为最高,且NSE水平有随肺癌分期升高而增高的趋势[13]。酶联免疫吸附ELISA法检测小细胞肺癌患者血清神经元烯醇化酶 NSE的敏感度为 80%[14]。应用液相芯片技术，定量检测人血清NSE灵敏度为93.5%，特异度为97%[15]。

本组资料显示，应用C12型肿瘤蛋白芯片检测NSE，恶性肿瘤患者NSE检测阳性发生率明显高于良性病变患者及正常体检者，但NSE检测阳性在各种肿瘤中的差异无统计学意义。NSE检测阳性在恶性肿瘤患者中灵敏度低，肺癌NSE灵敏度仅1.15%，其中小细胞肺癌其阳性率仅1.30%。同时，本中心应用C12型肿瘤蛋白芯片，检测CEA、CA19-9等其他11项肿瘤标志物其阳性率与文献报道的基本相符合[16,17]。何江、黄窍铭、王玉芳、郑玲等[18～21]用C12型肿瘤蛋白芯片对恶性肿瘤及肺癌检测的结果也显示NSE检出阳性率偏低(0～15%)。分析C12型肿瘤蛋白芯片检测NSE阳性率低的原因，可能包括以下因素：NSE指标在血清中很不稳定，其活性将会随时间的延长而迅速下降，检出率则相应降低；联合检测随着肿瘤标志物检测项目增多单项检测灵敏度下降；高浓度的钩状效应导致被检测的肿瘤指标阳性率降低；机体或组织中一些抗体与肿瘤标志物形成免疫复合物。此外，不排除少数由于操作和技术上的失误引起检测结果的偏差。

目前主张在一定范围内有选择地采用多项肿瘤标志物联合检测来提高诊断灵敏度[22]。本研究发现，C12型肿瘤蛋白芯片中NSE阳性率低，这是此肿瘤蛋白芯片系统存在的缺陷，但是，我们可以对肿瘤标志物的组合考虑其检测方法的可行性及经济性，对某一恶性肿瘤优选出3～5项较敏感的标志物以获得满意的灵敏度和特异度。根据不同肿瘤特性分别设计针对不同肿瘤的特异性较高的肿瘤标志物蛋白芯片，如设计专门针对肺癌的CEA、CA153、NSE、CYFRA21-1、SCC、CA125等联合检测芯片，有助于肺癌及其组织学分型的早期诊断[23]。通过结合患者的临床及影像资料，选择针对不同肿瘤的特异性较高的肿瘤标志物蛋白芯片进行检测，以期更能实现协助诊断、疗效评价、预后监测等重要意义。

虽然C12型肿瘤诊断用蛋白芯片中NSE阳性率较低，但NSE单项或联合其它肿瘤标志物仍可用于多种肿瘤的筛查和临床诊断。

[1] 李心河,单宁宁,高 扬,等.多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在临床应用中的评价〔J〕.检验医学,2009,24(7):523.

[2] Weinberger SR,Dalmasso EA,Fung ET.Current achievements using protein chip array technology〔J〕.Curr Opin Chem Biol,2002,6(1):86.

[3] 仲召阳,王 东,李增鹏,等.多肿瘤标志物蛋白芯片检测对肿瘤诊断的临床意义〔J〕.第三军医大学学报,2008,30(17):1658.

[4] Tracy MR,Hedges S B.Evolutionary history of the enolase gene family〔J〕.Gene,2000,259(1-2):129.

[5] Ferrigno D,Buccheri G,Giordano C.Neuron-specific enolase is an effective tumour marker in non-small cell lung cancer (NSCLC)〔J〕.Lung Cancer,2003,41(3):311.

[6] Plebani M,Basso D,Navaglia F.Clinical evaluation of seven tumor markers in lung cancer diagnosis:Can any combination improve the results[J].Br J Cancer,2005,72( 1):170.

[7] 卢先锋,杨学琴,张志敏,等.肺癌血清肿瘤标志物meta分析〔J〕.中国肺癌杂志,2010,13(12):1136.

[8] 王 勇,卜智斌,张志培,等.C - 12多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在肺癌诊断中的价值〔J〕.现代肿瘤学,2011,19(1):49.

[9] Ruibal A,Nunez MI,Rodriguez J,et al.Cytosolic levels of neuron-specific enolase in squamous cell carcinomas of the lung〔J〕.Int J Biol Marker，2003,18 (3)：188.

[10] 张小红,王 静,王红民.血清NSE、TSGF、CA12-5、CYF-RA21-1 联合检测对肺癌的诊断价值〔J〕.肿瘤基础与临床,2006,19( 1):16 .

[11] Fizazi K,Cojean I,Pignon JP,et al.Normal serum neuron specific enolase( NSE) value after the first cycle of chemotherapy：an early predictor of complete response and survival in patients with small lung〔J〕.Cancer,1998,82( 6):1049.

[12] 梁 成,孔凡元.神经元特异烯醇化酶检测与临床研究〔J〕.宁夏医学院学报,2004,26(2):129.

[13] 蔡燕燕,曾波航.神经元烯醇化酶在肺癌中的临床意义〔J〕.中国肿瘤,2007,16 (8):631.

[14] 张翠玲,寇大庆,白洪涛,等.神经元烯醇化酶对小细胞肺癌诊断的临床应用〔J〕.中国医师进修杂志,2006,29 (8)：70.

[15] 彭 娟,陈 纬,吴英松,等.液相芯片技术定量检测人血清CEA、AFP和NSE〔J〕.热带医学杂志,2007,7(1):19.

[16] 杜 佳,王 东,杨雪琴,等.基于多肿瘤标志物蛋白芯片检测恶性肿瘤血清癌胚抗原的诊断价值分析〔J〕.第二军医大学学报,2012,33(5):523.

[17] 向大开,谢家印,罗 维,等.多肿瘤标志物芯片中CA19-9表达水平升高对恶性肿瘤的诊断价值〔J〕.实用癌症杂志,2012,27:147.

[18] 何 江,余伍忠,刘 丽,等.C - 12多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对肺癌的诊断价值〔J〕.现代肿瘤学,2009,3:468.

[19] 黄窍铭,葛明建,罗 鹏.多肿瘤标志物芯片检测系统对非小细胞肺癌的诊断及组织分型的临床研究〔J〕.重庆医学,2010,39(15):2045.

[20] 王玉芳,李首庆,杨广民,等.多肿瘤标志物联合检测在恶性肿瘤诊断中的价值分析〔J〕.中国现代医药杂志,2009,11(3):5.

[21] 郑 玲,伍建蓉,杨 红,等.肺癌患者血清中12种肿瘤标志物的表达〔J〕.肿瘤,2009,29(8):786.

[22] 韩景银.肿瘤标志物联检对常见肿瘤诊断的评价〔J〕.放射免疫学杂志,2005,18(2):86.

[23] 黄 滢,高兴华,郭柳薇.肿瘤标志物联合检测在肺癌中的诊断价值〔J〕.广西医学,2010,32(8):908.