茶毛虫核型多角体病毒毒株分化对病毒增殖和毒效的影响

唐美君，殷坤山，郭华伟，肖 强

(中国农业科学院 茶叶研究所，浙江 杭州 310008)

茶毛虫 (Euproctis pseudoconspersa Strand)又名茶黄毒蛾，是我国高山茶园和有机茶园常见的害虫。茶毛虫核型多角体病毒 (EpNPV)是控制茶毛虫种群的重要病原物［1］。茶毛虫病毒杀虫剂具有防效高、持效期长、对环境安全等优点［2-4］，近年来在茶叶生产中得到了广泛应用，受到了有机茶农的欢迎。有研究报道，采自贵州、湖北、浙江和湖南的EpNPV毒株之间存在较大的致病力差异，不同毒株之间的遗传距离也有较大差距，表明不同毒株之间出现了遗传分化［5］。这种毒株分化对EpNPV大量增殖是否会有不利影响，以及不同毒株组合后对毒效是否有增效作用，目前尚不明确。为了筛选合适的病毒毒株用于病毒生产和田间应用，进行了Ep NPV毒株分化对病毒增殖和毒效的影响研究，旨在为EpNPV的生产和应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 供试昆虫

从田间 (江苏宜兴)采集茶毛幼虫，以鲜茶叶为饲料，在 (23.5±0.5)℃，相对湿度70%～80%和光周期12 h/12 h(白天/晚上)的人工气候室中连续饲养。

1.2 供试毒株

供试毒株分别为贵州毒株、湖北毒株、浙江毒株、湖南毒株4个茶毛虫核型多角体病毒分离株。2009年分别从贵州中八、湖北襄樊、浙江雁荡和湖南长沙采集，将各毒株分别进行病毒增殖，按虫尸捣碎、过滤、差速离心、显微镜测、定量稀释的方法获得各分离株1×109PIB·mL-1的纯病毒原液备用。

1.3 试验方法

1.3.1 对病毒增殖产量的影响

分别配制浓度为1×106PIB·mL-1的浙江毒株、贵州毒株、湖北毒株和湖南毒株的病毒液各1 000 mL备用。从茶园剪取带老叶茶枝，分别在各毒株病毒液中浸湿，晾干后放入有铜纱网盖的木盒(46 cm×32 cm×17 cm)中。接入5龄茶毛虫幼虫，在 (24.5±0.5)℃、相对湿度70% ～80%、光周期12 h/12 h的恒温培养室内饲养。幼虫取食带病毒叶3 d后无病毒叶片继续饲养。每处理设3次重复，每重复供试虫100头。

幼虫开始死亡后，逐日收集虫尸，并称重。幼虫全部死亡或化蛹后，提取虫尸中的病毒，用血球计数法测定病毒多角体含量，计算病毒产量。

1.3.2 对病毒毒效的影响

首先配制浓度为1×106PIB·mL-1的浙江毒株、贵州毒株和湖北毒株病毒液单剂各400 mL，然后将浙江毒株分别与贵州毒株、湖北毒株按体积比1∶1进行混配，形成2个病毒浓度为1×106PIB·mL-1的混剂。从茶园剪取老叶，分别在各病毒液中浸湿，晾干后放入500 mL罐头瓶中。接入2龄茶毛幼虫，同等条件下饲养，以饲喂不加病毒的茶叶为对照。每处理设3次重复，每重复供试虫50头以上。待幼虫开始死亡后，逐日检查死虫数。

采用Sakai公式计算毒株混用后的协同毒力指数，然后判定两者的协同作用。

1.4 数据统计

采用DPS软件统计分析病毒产量的数据，进行单因素试验方差分析，均值之间的差异显著性采用邓肯氏新复极差法进行检验。

2 结果与分析

2.1 对病毒增殖产量的影响

结果 (表1)表明，浙江毒株较其他3个毒株病毒产量略高，每克虫尸的病毒产量为48.17×108PIB，其他3个毒株的病毒产量40.44×108～46.06×108PIB·g-1，4个毒株的病毒增殖产量没有显著差异 (F=0.128 0，n=3，P=0.940 6)。

显微观察结果显示，浙江毒株和贵州毒株增殖的病毒，多角体大而均匀;其余2个毒株增殖的病毒则多角体大小不匀，小的较多。此外，浙江毒株各次增殖的产量稳定，其余3株的产量不稳定。因此，人工大量增殖EpNPV时选用浙江毒株为最佳。

表1 Ep NPV分离株病毒增殖的产量比较

2.2 对病毒毒效的影响

供试的4个毒株毒力强弱依次为浙江毒株＞贵州毒株＞湖北毒株 ＞湖南毒株［5］。本研究选取了毒力最强的浙江毒株分别与贵州毒株、湖北毒株进行组合，结果表明 (图1)，浙江毒株与贵州毒株1∶1混配，其协同毒力始终为相加作用;浙江毒株与湖北毒株1∶1混配，前期表现为拮抗作用，后期为相加作用。不同分离株组合后总体上为相加作用，未见增效作用。因此，在实际应用EpNPV时以单一毒株为宜。

图1 茶毛虫核型多角体病毒分离株混配后的协同毒力

3 小结与讨论

昆虫病毒的毒力强弱是评价该病毒应用潜力的重要指标。但并非毒力越强越好。如果毒力太强，以至于寄主种群不能在自然界较长时间存活，该毒株也会无法生存和流行;同时，在昆虫病毒的增殖生产过程中，如果毒株的毒力太强，将无法实现人工大量增殖［6］。已有的研究表明，EpNPV浙江毒株的毒力强于其他 3个毒株［5］。本研究表明，Ep NPV毒株分化对病毒增殖没有不利影响，4个毒株的病毒增殖产量相差不大，但浙江毒株优于其他3个毒株;强弱毒株组合后的协同作用总体为相加作用，没有发现有增效作用。因此，浙江毒株是适宜用于室内病毒增殖和田间茶毛虫防治的较理想的EpNPV分离株。

［1］ 齐义鹏，叶林柏，刘岱岳，等.用茶毛虫核型多角体病毒防治茶毛虫 ［J］.生物防治通报，1986，2(1):43.

［2］ 孙椒德，吴光远，林阿祥，等.茶毛虫核型多角体病毒制剂的防效 ［J］.华东昆虫学报，1996，5(1):55-59.

［3］ 冷杨，肖强，殷坤山.茶毛虫核型多角体病毒 Bt混剂的作用特性 ［J］.植物保护学报，2007，34(2):177-181.

［4］ 唐美君，殷坤山，郭华伟，等.茶毛虫核型多角体病毒和Bt混剂的配比筛选及药效评价 ［J］.植物保护，2010，36(5):165-167.

［5］ 付建玉，席羽，唐美君，等.茶毛虫核型多角体病毒不同分离株的毒力水平与遗传结构关系分析 ［J］.茶叶科学，2011，31(4):289-294.

［6］ 孙修炼，胡志红.我国昆虫病毒杀虫剂的研究与应用进展［J］.中国农业科技导报，2006，8(6):33-37.