HPLC法测定黄藤素微丸胶囊中盐酸巴马汀的含量*

刘 波， 杨 惠， 王京昆

(云南省药物研究所， 云南 昆明 650111)

黄藤素微丸胶囊是由防已科植物黄藤(Fibraurea recisa Pierre.)的茎中提取的生物碱黄藤素(也称盐酸巴马汀、盐酸棕榈碱或掌叶防已碱)加工而成的微丸胶囊剂。有清热解毒的作用，临床用于妇科炎症、菌痢、肠炎、呼吸道及泌尿道感染、外科感染等。

微丸属于多单元给药系统，能将一个剂量的药物分散在千百个微小圆形隔室内，用药后药物质点广泛分布在胃肠道粘膜表面，使药物吸收完全，从而提高生物利用度。由于微丸粒径小，受消化道输送食物节律影响小，所以药物在体内很少受到胃排空功能变化的影响，在体内的吸收具有良好的重现性。同时，微丸的粒径均匀，流动性好，不易压碎，易充填，是一种理想的剂型。

本文采用高效液相色谱法测定黄藤素微丸胶囊中的盐酸巴马汀，结果表明该方法简便、准确、重复性好，可作为黄藤素微丸胶囊含量测定方法。

1 仪器与试药

实验用仪器为美国Agilent公司1100型HPLC仪。包含四元泵；紫外检测器；Agilent Technologies ChemStation色谱工作站；盐酸巴马汀对照品：由中国药品生物制品检定所提供，批号0732-200005(供鉴别用，经面积归一化法计算，含量为98.91%)。黄藤素微丸胶囊由云南省药物研究所药物制剂研究室提供。乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：ZorBax Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-0.4%磷酸(25：75)为流动相，检测波长为345 nm，流速为1.0 mL·min-1，柱温40 ℃。理论塔板数按盐酸巴马汀色谱峰计算应不低于3000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸巴马汀对照品适量，加1%盐酸甲醇液制成每1 mL含0.1 mg的溶液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品内容物，研细，精密称取约50 mg，置25 mL容量瓶中，加1%盐酸甲醇液20 mL，超声处理20 min，冷却至室温，加1%盐酸甲醇液至刻度，滤过，取续滤液1 mL，置25 mL容量瓶中，加1%盐酸甲醇液至刻度，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 取阴性样品内容物，研细，精密称取约50 mg，置25 mL容量瓶中，加1%盐酸甲醇液20 mL，超声处理20 min，冷却至室温，加1%盐酸甲醇液至刻度，滤过，取续滤液1 mL，置25 mL容量瓶中，加1%盐酸甲醇液至刻度，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3 系统适应性实验 在2.1色谱条件下，分别取对照品溶液、供试品溶液，以及不含盐酸巴马汀的阴性样品溶液10 μL进样分析，结果见图1，供试品色谱中，在与对照品色谱图相应的保留时间上，有相同的色谱峰，而阴性对照在此无干扰。

图1HPLC色谱图

A.样品 B.空白样品 C.盐酸巴马汀对照品

3 方法学考察

3.1 线性关系考察 精密称取盐酸巴马汀对照品6.55 mg置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取对照品溶液0.5、1、2、3、4、5、6 mL分别置10 mL容量瓶中，用1%盐酸甲醇液定容至刻度，摇匀。精密吸取10 μL，分别进样，检测，以进样量(μg)为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，得回归方程：Y=376 13.651X-18.300，r=0.999 84，结果盐酸巴马汀在0.131～1.572 μg范围内呈良好的线性关系。

3.2 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液10 μL，重复进样6次，以峰面积计算，结果盐酸巴马汀的RSD为0.13%(n=6)，表明本法的精密度较好。

3.3 重现性实验 取同一批号样品6份，按供试品溶液的制备方法制备，进样10μl测定，以峰面积计算盐酸巴马汀的含量为23.34%，测定结果的RSD为1.06%(n=6)，表明本法的重现性较好。

3.4 稳定性试验 取同一批供试品，分别于0、1、2、3、6、12、24 h进样，进样体积10 μL，以峰面积计算，结果RSD为0.28%(n=7)，所得的样品中盐酸巴马汀峰面积基本一致，说明样品在24 h内基本稳定。

3.5 加样回收率试验 准确称取已知含量的黄藤素微丸胶囊样品，精密加入适量的盐酸巴马汀对照品溶液，照色谱条件测定，计算回收率，结果见表1，RSD=2.46%(n=9)。

表1 加样回收率试验结果

3.6 样品的含量测定 按盐酸巴马汀含量测定方法测定3批样品，结果三批样品的含量为平均每粒含盐酸巴马汀100.71、100.37、100.43 mg，根据以上结果，将黄藤素微丸胶囊中盐酸巴马汀的含量参照胶囊制剂的装量差异定为：每粒含盐酸巴马汀为90～110 mg。

4 讨论

4.1 前处理方法的选择 选用同一批黄藤素微丸胶囊，取内容物研细后，精密称定，平行称取5份，溶剂选用甲醇、1%盐酸甲醇液，分别选用下列五种常用提取方法提取：(1)(2)(3)置25 mL容量瓶中，加1%盐酸甲醇液20 mL，分别超声处理10、20、30 min，放冷至室温，加1%盐酸甲醇液定容至刻度，滤过，取续滤液1 mL，置25 mL容量瓶中，加1%盐酸甲醇液定容至刻度，即得。(4)置25 mL容量瓶中，加甲醇20 mL，超声处理20 min，放冷至室温，加甲醇定容至刻度，滤过，取续滤液1 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，即得。(5)置25 mL容量瓶中，加1%盐酸甲醇液20 mL，水浴20 min，振摇2～3次，放冷至室温，加1%盐酸甲醇液定容至刻度，滤过，取续滤液1 mL，置25 mL容量瓶中，加1%盐酸甲醇液定容至刻度，即得。

提取后用同一方法进行测定，结果表明，方法(2)、(3)提取率最高且相近，为节约检测时间故采用方法(2)来处理样品。

4.2 检测波长的选择 通过对盐酸巴马汀的甲醇溶液进行全波长扫描，结果盐酸巴马汀在265 nm、345 nm、348 nm处有最大吸收，但在345 nm处的吸收值最大，与文献报导一致1～3，因此，选用345 nm作为检测波长。

4.3 流动相的选择 根据查阅的相关文献资料1～3和质量标准，笔者做了如下的研究：(1)乙腈-水-十二烷基磺酸钠(30∶70∶0.1 g)；(2)乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾水溶液(30∶70)；(3)乙腈-0.4%磷酸(25∶75)

实验结果表明，方法(1)流动相主峰有拖尾，色谱峰的对称性较差，方法(2)、方法(3)色谱峰峰型都较好，分离度高，但方法(3)色谱峰的对称性较好，故将流动相定为乙腈-0.4%磷酸(25：75)，能得到较为满意的色谱峰，提高了测定结果的准确性。

4.4 色谱分离耐用性试验 考察了DiamonsilTM-C18、ZorBax Eclipse XDB-C18、ZorBar SB-C18三种不同型号的十八烷基硅烷键合硅填充柱，都能满足盐酸巴马汀含量测定的条件。

为了得到更好的分离结果，将黄藤素微丸胶囊中盐酸巴马汀含量测定的色谱条件定为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4%磷酸(25：75)为流动相；检测波长为345nm；理论塔板数按盐酸巴马汀色谱峰计算应不低于3000。

[1]金佩芬，缪华蓉，钱亚萍，等.HPLC测定戊己丸中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量[J].中成药，2001.23(1)：21.

[2]黄捷，桑彤，覃红萍.反相高效液相色谱法测定金鸡胶囊中盐酸巴马汀及盐酸小檗碱的含量[J].中国医院药学杂志，2002.22(12)：35.

[3]毛颐晴，彭瑜.高效液相色谱法测定黄藤素片中盐酸巴马汀的含量[J].中成药，2004.7(12)：65.