保产达生片质量标准初步试验研究

徐静逍， 徐学艾， 熊丽娟

(云南中医学院， 云南 昆明 650500)

保产达生片为昆明市制剂中心生产的医院制剂，保产达生片主要由当归(Angelica sinensis(Oliv.)Diels)、黄芪(Astragalus memeranaceus(Fisch.)Bge.var)等药材组成，具有荣养气血阴精，充盈胞脉冲任，强健母体的功效。临床用于治疗胎漏、胎动不安、滑胎、胎萎不长。当归为方中主要药物，具有补血活血，滋养气血，调经止痛，润肠通便等功效，古人称之为血中之圣药。佐之以补则补，能养营养血，补气生精，安五脏，强形体，益神志，凡有形虚损之病，无所不宜。阿魏酸(Ferulic Acid)是当归(Angelica sinensis(Oliv.)Diels)植物中的主要活性成分。为了更好地控制该制剂的质量，保证临床用药安全有效，本文探索建立本制剂定性鉴别当归的薄层色谱(thin layer chromatography，TLC)法；采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatog raphy，HPLC)法测定阿魏酸的含量。实验结果表明本法简便、快捷、准确，可用于该制剂的质量控制参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 戴安U3000高效液相色谱仪(HP-1110四元泵；HP-1 110 DAD检测器；HP C13.(Chen station化学工作站，Agilent公司)；KQ3200超声波清洗器(超声功率120W，工作频率40 KHz；昆山市超声仪器有限公司)；UV-1601紫外分光光度仪(日本津岛)；AE240分析天平。

1.2 试药 保产达生片 (片剂)规格：0.3 g/片，批号：100304为昆明市中医医院制剂室生产〗阿魏酸对照品(纯度均>98%.中国药品生物制品检定所，批号0773-9910)，对照药材当归(批号：YP20101103 云南白药千草堂药材公司 产地：甘肃)，甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 薄层色谱鉴别

当归的鉴别 取本品5 g，研碎，加石油醚(60～90℃)15 mL，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)[1]试验。吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。试验结果见图1：

1.阴性对照;2.当归药材;3.供试品

3 含量测定

高效液相色谱法(附录Ⅵ D)[1]测定。

3.1 色谱条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：乙腈-0.085%磷酸(17∶83)；流速：1.0 mL/min；检测波长316 nm；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000。柱温：室温。进样量：10 uL。

3.2 溶液的制备

3.2.1 供试品溶液 取重量差异项下的本品20片，研细，取约1.0 g，精密称定。置具塞锥型瓶中，精密加入70%甲醇35 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min(功率100 W，频率40 kHz)，放冷，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

3.2.2 对照品溶液 精密称取阿魏酸对照品10 mg，置50 mL棕色量瓶中，加70%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.21 mg/mL的阿魏酸储备液，精密量取3 mL，置50 mL棕色量瓶中，加70%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.0126 mg/mL的阿魏酸对照品溶液。

3.2.3 阴性对照溶液 按处方组成，制备不含当归的阴性模拟制剂，按上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

3.3 系统适用性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 uL，按上述色谱条件分别进样测定，按外标法以峰面积计算供试品中阿魏酸的含量。结果见图2.由图可见，阿魏酸峰保留时间约 7.30 min，阴性对照溶液在阿魏酸峰位置无干扰峰，阿魏酸峰与其他组分可基本分离。理论塔板数按阿魏酸峰计算不低于5000。

a.对照品

b.供试品

c.阴性对照

4.4 线性关系考察 阿魏酸：精密吸取4.2.2项下阿魏酸对照品溶液(0.0126 mg/mL)，分别进样2、5、7、10、15、20 μL，以进样量(mg)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线(见图3)。试验结果见表 1

得回归方程：Y=82.629 X﹢0.037 r=0.9999

表1 线性关系考察

结果表明阿魏酸在0.0252～0.2520mg范围内与峰面积具有良好的线性关系。

图3 标准曲线图

4.5 精密度试验 精密吸取阿魏酸对照品溶液10 mL重复进样连续测定5次，得峰面积的积分值RSD为0.31%，说明仪器的精密度良好。试验结果见表2。

表2 精密度试验结果

4.6 重复性试验 按供试品测定方法测定，对同一批样品(批号：100304)重复测定5份，结果保产达生片的平均含量为25.600 mg/片，RSD为0.61%，表明方法的重复性良好。试验结果见表3

表3 重复性试验结果

4.7 稳定性试验 取供试品溶液(批号：100304)分别于配制后0、1、2、4、8 h依样品测定法测定，记录色谱图(见图4)。结果阿魏酸峰面积的RSD为0.31 %，表明供试品溶液在8 h内基本稳定。试验结果见表4

表4 稳定性试验结果

4.8 加样回收率试验 取同一批号(批号：100304)已知含量为0.998 mg/g样品约0.25 g，共5分，精密称定。分别精密加入阿魏酸对照品溶液(精密称取阿魏酸对照品12mg，置50 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇使溶解，并稀释得浓度为0.2400 mg/mL的溶液)1 mL，即0.2400 mg，再精密加入70%甲醇29 mL，进样测定，计算回收率。试验结果见表5，表明方法可行。

a.0 h色谱图

b.8 h色谱图

表5 加样回收率试验结果

4.9 样品测定 分别精密称取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪中，测定含量，计算阿魏酸的总量，即得。按外标一点法以峰面积测得样品中阿魏酸的含量为50.875～51.296 mg/g。本制剂拟以阿魏酸的含量作为指标性成分，暂定保产达生片主要药物当归的阿魏酸含量不低于50 mg/g。试验结果见表6。

表6 样品测定试验结果

5 讨论

本品的薄层色谱鉴别通过多次实验，斑点清晰，结果明显。制剂中各药的供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上至少显一个相同颜色的斑点，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，而所有刚性样品在此相应的化置上没有斑点显示，表明样品中其他组分对鉴别无干扰。

当归为保产达生片中的主要药物，主要有效成分为阿魏酸，故选择它作为本制剂的含量测定指标成分。

阿魏酸不稳定。遇光和热易分解，据文献报道。盛有阿魏酸对照品溶液的棕色瓶用黑纸包好放在4℃的环境中2周内基本稳定，在溶剂中加入1 mL流动相(含有酸性物质冰醋酸)，放置一月仍较稳定。故阿魏酸对照品容易置于棕色瓶中避光保存。

考察了超声和加热回流2种样品提取方式，根据试验结果，将提取方式选为超声处理30 min，同时还考察了提取溶媒的种类、用量和提取时间，并进行了系统的分析和讨论，结果表明本法简便、快捷、专属性强、重现性好，可用于保产达生片的质量控制。

[1]国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2005：附录Ⅵ B.