OLFM4在宫颈病变的表达及意义

朱高香 侯洪春

(1.泰山医学院，山东 泰安 271016；2.济南市妇幼保健院，山东 济南 250001)

宫颈癌是由癌前病变，即宫颈上皮内瘤变逐步发展形成的，经过了CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、早期浸润癌和浸润癌五个阶段，涉及细胞凋亡、细胞异常增殖及细胞的粘附等多个方面。本研究采用免疫组化法检测OLFM4在不同宫颈组织中的表达情况，探讨其与宫颈癌发生和病理学特征的关系，为宫颈癌的靶向治疗提供新的目标。

1 材料与方法

1.1标本 选取2008年1月至2011年8月在济南市妇幼保健院经宫颈活检、环形电切术及手术切除的宫颈组织蜡块标本135例，其中正常宫颈组织20例、宫颈上皮内瘤变83例(CINⅠ25例，CINⅡ31例，CINⅢ27例)、宫颈鳞癌32例。患者年龄21～66岁，中位数年龄42岁。宫颈癌根据FIGO标准分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期14例；肿瘤最大径线：≤4 cm 23例，>4 cm 9例；组织分化程度：高分化组7例，中分化组13例，低分化组12例；肌层浸润深度：浸润浅肌层22例，浸润深肌层10例；无淋巴结转移者21例，有淋巴结转移者11例。患者术前均未接受放化疗，临床资料完整。

1.2免疫组化染色 采用S-P法，DAB显色。石蜡切片脱蜡水化后，高温高压EDTA抗原修复，3%H2O2消除内源性过氧化酶活性，山羊血清工作液封闭，滴加辣根酶标记的链霉卵白素工作液，DAB显色，苏木素复染。用已知阳性组织切片为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3结果判定 以胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。首先计数阳性细胞率：无阳性细胞为0分；1%～10%为1分；10%～50%为2分；50%～80%为3分；>80%为4分。然后根据染色强度判断：无着色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。根据两者的乘积判断结果：0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。

1.4统计学方法 采用SPSS13.0统计软件分析处理。多个样本率的比较采用Kruskal-Wallis检验，两样本率的比较用Mann-Whitney检验，相关性分析采用Spearman相关分析。

2 结 果

2.1 OLFM4在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达

OLFM4阳性颗粒主要定位于胞浆，胞核亦可见少量着色。其在正常宫颈组织、CIN、宫颈癌各组中的表达情况见图1-5，阳性表达率分别为20.0%、94.0%、96.8%，有逐渐上升的趋势，CIN组与宫颈癌组及正常宫颈组相比，差异均有统计学意义(P<0.01)；宫颈癌组与CIN组相比，差异亦有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2 OLFM4在各级CIN中的表达

CIN组内随病变程度的增加，OLFM4阳性表达率分别为92.0%、93.5%、96.3%，有逐渐上升的趋势，CINⅡ与CINⅢ及CINⅠ相比，差异均有统计学意义(P<0.01)；CINⅡ与CINⅢ阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。见表1

2.3 OLFM4表达与宫颈癌临床病理特征的关系

OLFM4的表达与宫颈癌临床分期、肿瘤大小、肌层浸润深度及淋巴结转移无关(P>0.05)，但在组织高中分化组表达水平显著高于低分化组(P<0.01)。

表1 OLFM4在不同宫颈组织中的表达

注：1,2,3组比较，P<0.01；1,2组比较，1,3组比较，P<0.01，2,3组比较，P=0.019；4,5组比较，P<0.01，4,6组比较，P=0.01，5,6组比较，P=0.095。

表2 OLFM4的表达与宫颈癌临床病理之间的关系

注：1,2,3组比较，P=0.003，1,2组比较，P=0.541，1,3组比较，P=0.004，2,3组比较，P=0.005；1,2,3组r=-0.589，P<0.01。

3 讨 论

肿瘤的生长大多由于细胞凋亡与细胞增殖的失衡所导致。OLFM4基因最早克隆于人类的原始粒细胞，定位于人类染色体13q14.3[1]，其产物OLFM4蛋白属于olfactomedin相关蛋白家族，N-末端为线圈结构域，C-末端为家族均有的250个氨基酸构成的olfactomedin结构域[1]，具有490个氨基酸和六个均匀分布的N-连接糖基化序列[1]，83、85、226、246和437位为半胱氨酸残基，其任一突变均可影响OLFM4的三级结构、聚合和分泌[2]。胞内定位主要在线粒体，小部分分布于细胞核[2]。

OLFM4在多种肿瘤组织中高表达，尤其是消化系统肿瘤[3-6]，在肿瘤的形成及发展转移过程中发挥着重要的作用，可通过抑制cyt-c的释放及caspase 3和caspase 9的活化来减弱H2O2、TNFα诱导的细胞凋亡[7-8]，亦可与IFN-β/RA 联合诱导的促凋亡因子GRIM-19发生蛋白间的相互作用[8，9]，减弱其介导相关凋亡基因Gadd153、PIG12和c-Abl的表达[10]，从而抗细胞凋亡。同时，OLFM4还可以作用于DNA合成的S期到有丝分裂的G2/M期来调控细胞周期，促进肿瘤细胞的增殖[5]，这可能与它调节cyclin、CDK和其它效应分子(如Chk-1)有关[11]，另外，OLFM4可能类似于抗凋亡蛋白家族survivin和cIAP-1/2，作用于PI3K/PKB的下游[12]，从而促进肿瘤细胞生长。OLFM4还与胞外粘附分子凝集素、钙粘素相互作用，参与肿瘤细胞的粘附和转移[9]。

OLFM4亦与肿瘤的临床病理特征有关。Oue等[3]研究发现Ⅰ/Ⅱ期胃癌组织中表达率高于Ⅲ/Ⅳ期，分别为64%和45%(P=0.0172)。分化好或分化中等的胃癌中OLFM4无论是在mRNA还是血清蛋白水平都比分化差或未分化的胃癌高[3-4]，zhang等[1]亦发现OLFM4基因转录水平与胃癌组织浸润深度、转移度、分化程度明显相关，可见，OLFM4已经成为胃癌发生、分化和进展的一个标记物[3，4]。

本研究通过免疫组化S-P法显示OLFM4在正常宫颈组织、CIN 和宫颈癌中的阳性表达率分别为20.0%、94.0%、96.8%，说明随宫颈病变程度的增加，OLFM4的表达水平逐渐升高，而且随着宫颈癌组织分化程度的降低，OLFM4的表达水平亦降低，提示OLFM4的表达与宫颈癌的发生及恶性程度有相关性。但OLFM4的表达与临床分期、肿瘤大小、肌层浸润深度及淋巴结转移不相关。结果还需要更多的研究来证实。

综上，本研究认为OLFM4是宫颈癌发生发展的危险因素之一，一定程度上可反映宫颈癌的恶性程度和预后，对评价患者的病情轻重及预后有一定的意义，是一项有潜在价值的肿瘤相关标记物。

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