龈沟液血管内皮生长因子水平与牙周病变临床指标的关系

刘 硕，李仲影，刘艳如，薛 毅，王 琳，仇立斌，李 炜

龈沟液血管内皮生长因子水平与牙周病变临床指标的关系

刘 硕1，李仲影1，刘艳如2，薛 毅2，王 琳1，仇立斌1，李 炜1

目的探讨龈沟液中血管内皮生长因子(VEGF)与牙周病变主要临床指标的关系。方法选择牙周健康组12例，牙龈炎组12例，慢性牙周炎组24例(又分为静止期和活动期，各12例)，采用酶联免疫吸附 (ELISA)试验对龈沟液(gingival crevicular fluid，GCF)中VEGF的水平进行检测，数据采集完成后应用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果健康牙龈、慢性龈缘炎、慢性牙周炎静止期至慢性牙周炎活动期位点 GCF中VEGF水平逐渐升高 (P＜0.05)，VEGF的浓度与牙龈指数(GI)、附着丧失(AL)呈正相关;其相关系数分别是 0.341、0.325(P 均 ＜0.05)，与牙周探诊深度(PD)(r=0.236，P ＞0.05)无相关。结论龈沟液中VEGF水平与牙周病变发展密切相关，VEGF水平有可能作为评价牙周组织炎性反应与破坏程度的参考标志。

血管内皮生长因子;龈沟液;慢性牙周炎

牙周病是以炎性反应及牙周支持组织破坏为特点的感染性疾病，其病因多样，发病机制复杂，我国成年人患病率约为50%［1］。目前还没有精确的方法监测牙周组织炎性反应的动态变化，临床上常用的牙周指标如牙龈指数(gingival index，GI)、牙周探诊深度(probing depth，PD)、牙龈附着丧失(attachment loss，AL)等来反映牙周炎性反应和组织破坏的情况。观察龈沟液的量和内容物的变化，对了解牙周疾病的病情变化，评价治疗效果等均有重要的临床意义［2－8］。血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor，VEGF)是一种特异性作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，有诱导血管生成的作用，与血管的发生和生长有密切联系［9］。近年许多学者研究证明，龈沟液(gingival Crevicular Fluid，GCF)中VEGF的水平高低与该部位的炎性反应程度和骨破坏程度有关［10，11］。因此，为进一步探讨 VEGF与牙周病临床指标的关系，对龈沟液中VEGF的量及内容物的变化进行检测，为临床治疗提供参考。

1 对象与方法

1.1 对象 选取到武警河北总队医院口腔科门诊就诊并自愿参加本实验的牙周病患者36例，以及参加正常体检的健康者12例。入选者全身无系统性疾病，6个月内未曾服用任何抗生素及避孕药物，未接受过牙周治疗，妇女无妊娠及哺乳期;所有观察牙牙体无龋坏及充填物，并排除吸烟、饮酒等不良生活习惯。所有患者均接受系统全口的牙周检查，观察牙拍数字化牙片，依据《牙周病学》［12］诊断标准分为牙周健康组、慢性龈缘炎组和慢性牙周炎组。依据华西医科大学口腔医学院赵江川［13］提出的慢性牙周炎活动期诊断标准，将慢性牙周炎组分为静止期组与活动期组两个亚组。各组资料如下:牙周健康组12例，其中男7例，女5例，年龄20～60岁，平均40.3 岁，要求 PD ＜2 mm，GI=0，AL=0 mm，X 线无牙槽骨吸收;慢性龈缘炎组12例，其中男6例，女6例，年龄20～63 岁，平均43.3 岁，要求 GI≥1，AL=0 mm，并排除青春期龈炎、妊娠期龈炎、增生性龈炎及其他牙龈病;慢性牙周炎静止期组12例，男6例，女6例，年龄20～62岁，平均42.6岁;慢性牙周炎活动期组12例，男7例，女5例，年龄22～66岁，平均46.2 岁;要求 PD≥4 mm，GI≥1，AL≥2 mm。各组间患者的年龄差异无统计学意义。

1.2 方法

1.2.1 实验仪器与试剂 数字化牙科成像系统(Schick公司，美国)，电子天平(BP110S，德国Sartorius公司)，高速台式离心机(LD4－2A型，r=8 cm，北京医用离心机厂)，Whatman 3号滤纸(Whatman公司，英国)，VEGF ELISA试剂盒(Adlitteram Diagnostic Laboratories美国)。

1.2.2 位点的选择 牙周健康组选取右上第一磨牙为观察牙;慢性龈缘炎组选取临床症状最明显的部位为观察部位，如:牙龈红肿，探诊出血;慢性牙周炎组依据X线片所示，选取牙槽骨吸收并附着丧失最大者为观察牙;上述人员如指定牙缺失者则选取左上第一磨牙为观察牙。

1.2.3 龈沟液样本的采集 隔湿取样牙位，器械去除受试牙的龈上菌斑，吹干受试牙牙面及周围牙龈黏膜，将准备就绪的2条滤纸分别插入受试牙的近中颊和远中舌牙周袋内，遇到轻微阻力止，留置30 s后取出(舍去带血或被唾液污染的标本)，称重，减去原重量，换算成体积，－70℃冰箱保存待检测。

1.2.4 观察指标 记录受试牙PD、GI、AL;为防止临床检查对GCF质和量的影响，临床观察指标的检测和记录均在取样后进行。

1.2.5 龈沟液中VEGF的检测 采用酶联免疫吸附试验对龈沟液中VEGF水平进行检测。所有样本收集完毕后，将冰冻样本在室温下解冻，加入100 μl PBS 缓冲液(0.01 mol/L，pH=7.4)，微型混合器震荡5 min，3000 r/min，10 min离心后取上清液用于检测VEGF。用VEGF酶联免疫试剂盒测定VEGF水平。

1.3 统计学处理 应用 SPSS13.0软件，4组间VEGF水平与GCF量的比较采用单因素方差分析，四组间两两比较采用LSD法;VEGF与GI的关系采用Spearma相关检验，VEGF与 PD、AL的关系采用Pearson相关检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

各组GCF量、VEGF浓度与牙周病变各指标见表1。从健康牙龈、慢性龈炎、慢性牙周炎静止期至慢性牙周炎活动期位点，GCF量及VEGF浓度均升高，且差异有统计学意义 (P＜0.05)。VEGF浓度与GI、AL存在正相关关系，相关系数分别是0.341、0.325(P均 ＜0.05)，而与 PD 则无相关关系，相关系数为0.236(P ＞0.05)。

表1 四组间每位点中VEGF浓度与GCF量及各项临床检验指标的比较(n=12;±s)

表1 四组间每位点中VEGF浓度与GCF量及各项临床检验指标的比较(n=12;±s)

注:与牙周健康组比较，①P＜0.05;与慢性龈缘炎组，②P＜0.05;与慢性牙周炎静止期比较，③P＜0.05

组别 GCF(μl) VEGF(ng/μl) 牙龈指数 牙周探诊深度(mm)牙龈附着丧失(mm)牙周健康组0.767 ±0.358 23.519 ±13.376 0 1.517 ±0.420 0慢性龈缘炎组 1.125±0.617① 30.348±19.594① 1.530±0.674① 1.875±0.365 0慢性牙周炎静止期组 1.483 ±0.781①② 34.039 ±28.125①② 1.751 ±0.622①② 3.267 ±1.614 4.167 ±1.642①②慢性牙周炎活动期组 2.192 ±1.312①②③ 57.831 ±25.208①②③ 2.083 ±0.669①②③ 4.350 ±1.485 4.833 ±1.801①②③

3 讨 论

牙龈炎性反应的最初表现是龈沟探诊出血，它比牙龈颜色及水肿的改变出现早［14］，而且比较客观，故临床上常以探诊后出血作为牙龈有无炎性反应的一个可靠、安全、方便、客观性的指标。但由于炎性反应和出血在牙龈炎和牙周炎中均可存在，不能区分牙周不同病变组织的变化，所以并不能明确诊断。本研究结果表明，龈沟液中VEGF的浓度与牙龈指数的相关系数为0.341，经统计学检验具有相关性。提示VEGF与牙龈指数可能和牙周的急性炎性反应期有关，牙龈炎与牙周炎在急性期时，临床表现为牙龈红肿，有出血倾向，与龈沟液中的VEGF的促血管生成可增加血管通透性的作用有关，其机制尚需进一步实验研究。但根据统计学原理，表示关系密切程度的确定系数r2为0.116，表明龈沟液中影响VEGF的浓度因素中仅有11.6%与牙龈指数有关，数值并不大，尚不能说明龈沟液中VEGF的浓度变化与牙龈指数变化具有明显相关性，这可能是由于GI主要反映牙龈组织的炎性反应程度，不能反映深部牙周支持组织的炎性反应和破坏程度。同理推测牙龈出血症状是较粗糙的临床指征，仅依据牙龈出血判定牙周炎是否处于活动性病变并不十分准确，需参考其他指标综合判定。

牙周袋是病理性加深的龈沟，也是牙周炎的重要病理改变之一，是否存在真性牙周袋是牙周炎和龈炎的重要区别。本研究结果显示，龈沟液中VEGF的浓度与牙周探诊深度的相关系数 r为0.236，经统计学检验无相关性，这可能由于牙周探诊受许多因素的影响，如所用探针的设计，探诊力量、方向、位置，根面上附着牙石，牙龈炎性反应，牙邻面接触区阻挡，牙根外形，以及触觉误差、视觉误差、记录误差等。研究发现，牙龈炎是影响PD测量值的重要因素之一。健康牙龈在一般探诊压力下，探针尖端越过龈沟底而终止于结合上皮内，而在有炎性反应的牙龈，由于组织水肿，结缔组织内的胶原纤维大部分破坏，同样的探诊力量可使探针穿透袋底部而达到结缔组织内，终止于炎性反应区外围的正常胶原纤维的冠方，导致PD值增加。研究还发现，临床探诊检查时，不同检查者之间探诊力量不同，同一检查者探诊不同位点时探诊力量也不同，范围为 5 ～135 g［15］。

牙周附着水平是衡量和判断牙周组织状况的一个重要指标，附着丧失能客观地反映出牙周组织的破坏程度［16］。本研究结果显示，龈沟液中VEGF的浓度与附着丧失的相关系数r为0.325，经统计学检验有相关性。Prapulla等［17］也曾做过类似研究，结果与本试验一致，他认为VEGF在牙周组织的破坏中发挥一定的作用，其浓度水平可以在一定程度上反映牙周的破坏程度。但根据统计学原理，表示关系密切程度的确定系数r2为0.106，提示在影响龈沟液VEGF浓度的因素中，有10.6%与附着丧失有关，数值并不大，尚不能提示龈沟液VEGF的浓度变化与附着丧失变化强烈相关，需要进一步研究。

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Vascular endothelial growth factor level in gingival crevicular fluid in periodontal disease

LIU Shuo1，LI Zhongying1，LIU Yanru2，XUE Yi2，WANG Lin1，QIU Libin1，and LI Wei1.1.Hebei Provincial Corps Hospital of Chinese People’s Armed Polices Forces，Shijiazhuang 050081，China;2.Bethune International Peace Hospital，Shijiazhuang 050071，China

ObjectiveTo study the relationship between the vascular endothelial growth factor(VEGF)level in gingival crericalar fluid(GCF)and periodontal clinical parameters.Methods The GCF samples were collected in 12 periodontally healthy individuals，12 gingivitis and 24 chronic periodontitis patients.VEGF levels in GCF were measured by enzyme － linked immunosorbent assay(ELISA).The data were analyzed using SPSS13.0 software package.Results The VEGF concentrations were higher in patients with periodontal disease than in persons with healthy gingiva.There was a statistical difference between the four groups(P ＜0.05).The concentration of VEGF in GCF was positivly related to gingival index(GI)and attachment loss(AL)and not related to probing depth(PD) .Conclusions VEGF level in GCF is closly related progression of periodontal disease，and can be regarded as an useful index to reflect the status of periodontal disease.

vascular endothelial growth factor;gingival crevicular fluid;chronic periodontitis

R781.41

刘 硕，男，1974年出生。硕士，主治医师，主要从事口腔治疗和修复工作。

1.050081 石家庄，武警河北总队医院;2.050071 石家庄，白求恩国际和平医院

(2012－06－13收稿 2012－10－09修回)

(责任编辑 武建虎)