Ki67 在不同分子类型乳腺癌组织中的表达及意义

沈三弟 陈卓荣 黄 湛 肖高芳 雷睿文

Ki67 是与细胞增殖相关的核抗原，是1983年由Gerdes等发现[1]。其表达随细胞周期的变化而变化，能反映肿瘤的增殖活性，是公认的细胞增殖活性标志物。已有大量研究报道其在肿瘤的诊治与预后监测等方面均显示出重要临床价值，特别是在乳腺癌中，有望成为继ER 、PR、 HER-2之后应用于乳腺癌的又一生物标志物。

临床上根据乳腺癌ER 、PR、 HER-2分子表达特征将乳腺癌分成3种类型：导管型(Lumina型：ER/PR+)、Her-2型(ER/PR-，Her-2+)、三阴型(TN型：ER-、PR、 HER-2-)。

本研究采用免疫组织化学法(IHC)，检测368例乳腺癌组织中Ki67表达情况，并分析其与乳腺癌类型、原发肿瘤大小(PTD)、腋窝淋巴结(ALN)转移情况和病理分期等因素的关系，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

我科2009年1月～2011年12月，收治368例浸润性乳腺癌患者，其中Lumina型221例，Her-2型83例，TN型64例。患者术前均未接受放化疗等治疗，术后均经病理组织学检查确诊。按照AJCC 第7版TNM 分期标准：Ⅰ期 78例，Ⅱ期 229 例，Ⅲ期 61例，由于0期及Ⅳ期较少，未纳入。

1.2 免疫组织化学染色

Ki67的MIB-1抗体及工作液均购自福州迈新生物技术开发有限公司。组织标本用10%甲醛固定24 h，常规石蜡包埋，制作 4 μm 厚切片。以已知阳性标本作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 判断标准

Ki67 阳性细胞为胞核着色，取任意5个高倍镜视野，以阳性细胞所占细胞总数的平均值作为Ki67阳性率：阳性率<10%为弱阳性(+)，10% ～ 50%为阳性(++)，>50%为强阳性(+++)。

1.4 统计学处理

应用SPSS13.0 统计软件包进行统计学处理。分别采用Wilcoxon秩和检验与Spearman秩相关方法分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Ki67 在Lumina型、Her-2型、TN型乳腺癌组织中的表达情况

Ki67在Lumina型、Her-2型、TN型乳腺癌组织中，呈弱阳性、阳性、强阳性表达分别有：56、98、67例；24、32、67例；18、25、31例。经Wilcoxon秩和检验分析，Ki67表达强度3种类型乳腺癌组织间比较无显著性差异(χ2=0.015，P=0.993)，见表1。

表1 Ki67表达与乳腺癌组织分子类型的关系(例)

2.2 Ki67表达与乳腺癌临床病理因素的关系

在Lumina型乳腺癌组织中，Ki67表达强度与PTD、ALN及TNM病理分期呈正相关性(γs=0.167，P=0.013；γs=0.142，P=0.035；γs=0.165，P=0.014)，而在Her-2型与TN型乳腺癌组织中，Ki67表达强度与PTD、ALN、病理分期等病理因素无显著相关性(P>0.05)，见表2。

表2 Ki67表达与乳腺癌组织临床病理因素的关系(例)

3 讨论

乳腺癌是一类高度异质性的恶性肿瘤，无论在组织形态、免疫表型、生物学行为还是治疗反应上都存在着极大的差异。2001年Perou和Sorlie等[2]通过cDNA微阵列技术，将乳腺癌分为5个亚型：Lumina A，Lumina B，HER-2型，基底细胞样型和正常乳腺样型；不着其治疗方法和预后明显不同。Cheang等[3]将三阴性(ER-、PR-、HER-2-)作为的基底细胞样型主要特征，于是提出了TN型乳腺癌这一概念。临床上更为简便实用的分类方法是利用IHC检测ER、PR和HER-2这3种常用的标记物，将乳腺癌分为3种类型：Lumina型，激素受体表达阳性，预后良好；HER-2型，激素受体阴性，但HER-2基因表达阳性；基底细胞样型，激素受体和HER-2表达缺失，即TN型，预后较差[4～6]，增殖指数高，近期复发率、转移率高。

Ki67是与细胞增殖相关的核抗原，位于细胞核内。其表达随细胞周期的变化而变化。MacCallum等[7]的研究结果认为，Ki67是细胞分裂中核糖体合成的关键因子，对细胞增殖必不可少。故Ki67是目前应用最广泛的增殖细胞标志之一。有研究表明，在多种实体恶性肿瘤中 Ki67 表达水平远高于正常组织，并与恶性肿瘤的发展、转移及预后有关[8]。Jalava 等[9]根据Ki67表达强度判断乳腺癌的增殖活性：≤15%为低度，16%～30%为中度，>30%为高度，然后通过增殖活性高低来指导治疗方案。本研究是根据Aleskandarany等[10]研究将Ki67表达强度分为3个等级：阳性细胞数<10%为弱阳性(+)，10%～50%为阳性(++)，>50%为强阳性(+++)。

相对于Lumina型乳腺癌而言，Her-2型与TN型乳腺癌的恶性程度较高，复发及转移几率较大，预后差，尤其是TN型乳腺癌。有文献报道Ki67在TN型乳腺癌中表达强度较非TN型乳腺癌高[11]，但是本研究发现，Ki67在该3种类型乳腺癌中表达强度并无显著性差异，可能与Ki67表达强度的分级标准不同有关，Ki67表达强度大于30%的也许TN型较Lumina型多，但如果以大于50%作为强阳性标准，则TN型并不比其它两型乳腺癌多。

经过统计学分析表明：Lumina型乳腺癌PTD、ALN、病理分期等因素与Ki67表达强度呈正相关性，肿瘤越大、淋巴结发生转移、分期越晚，Ki67表达越强，预后越差。对于Her-2型与TN型乳腺癌而言，无论在肿瘤大小、ALN有无转移、分期早晚等方面，与Ki67表达强度均无显著性相关，故对这两型乳腺癌来说，Ki67指导治疗及判断预后的意义相对较差。

因此，Ki67 表达强度与Lumina型乳腺癌的病理因素相关，对Lumina型乳腺癌的治疗及判断预后有重要意义。

[1]Gerdes J,Schwab U,Lemke H,et al.Production of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associated with cell proliferation〔J〕.Int J Cancer,1983,31(1):13.

[2]Sorlie T,Perou C M,Tibshirani R,et al.Gene expression patterns of breast carcinomas distinguish tumor subclasses with clinical implications〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A,2001,98(19):10869.

[3]Cheang M C,Voduc D,Bajdik C,et al.Basal-like breast cancer defined by five biomarkers has superior prognostic value than triple-negative phenotype〔J〕.Clin Cancer Res,2008,14(5):1368.

[4]Carey L A,Dees E C,Sawyer L,et al.The triple negative paradox:primary tumor chemosensitivity of breast cancer subtypes〔J〕.Clin Cancer Res,2007,13(8):2329.

[5]Banerjee S,Reis-Filho J S,Ashley S,et al.Basal-like breast carcinomas:clinical outcome and response to chemotherapy〔J〕.J Clin Pathol,2006,59(7):729.

[6]Rakha E A,El-Sayed M E,Green A R,et al.Prognostic markers in triple-negative breast cancer〔J〕.Cancer,2007,109(1):25.

[7]De M,Pa H.The location of pKi67 in the outer dense fibrillary compartment of the nucleolus points to a role in ribosome biogenesis during the cell division cycle〔J〕.J Pathol,2000,190(5):537.

[8]邓秀娟,吴海根.Ki67、PTEN 在卵巢浆液性肿瘤中的表达及临床意义〔J〕.实用癌症杂志,2011,26(4):365.

[9]P J,T K,L J.Ki67 immunohistochemistry:a valuable marker in prognostication but with a risk of misclassification:proliferation subgroups formed based on Ki67 immunoreactivity and standardized mitotic index〔J〕.Histopatholog,2006,48:674.

[10]Aleskandarany M A,Green A R,Benhasouna A A,et al.Prognostic value of proliferation assay in the luminal,HER2 positive and triple negative biological classes of breast cancer〔J〕.Breast Cancer Res,2012,14(1):R3.

[11]祝玉祥，章佳新，邵稳喜，等.ki67 在三阴性乳腺癌组织中的表达及意义〔J〕.中国现代普通外科进展,2010,13(9):679.