新生儿缺氧缺血性脑病患儿T淋巴细胞亚群和D－二聚体及心肌酶水平的变化及意义

刘艳萍，覃绍鹏，黄献文，金伶

新生儿缺氧缺血性脑病患儿T淋巴细胞亚群和D－二聚体及心肌酶水平的变化及意义

刘艳萍，覃绍鹏，黄献文，金伶

目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)T淋巴细胞亚群、D－二聚体及心肌酶水平的变化及意义。方法选取2008年1月—2011年6月我院新生儿科足月HIE患儿65例为研究对象，分为轻度组24例、中度组21例、重度组20例，另随机选择同期、健康、足月新生儿30例作为对照组。检测所有受检新生儿T淋巴细胞亚群的百分率，血浆D－二聚体、α－羟丁酸脱氢酶(α－HBDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK－MB)水平，并进行相关性分析。结果4组外周血D－二聚体、α－HBDH、CK、CK－MB水平比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。其中对照组与轻度组、中度组、重度组外周血D－二聚体、α－HBDH、CK、CK－MB水平比较，差异均有统计学意义(P＜0.05);轻度组与中度组、中度组与重度组、轻度组与重度组百分率、D－二聚体、α－HBDH、CK、CK－MB水平比较，差异均有统计学意义(P＜0.05);轻度组与中度组、重度组百分率比较，差异均有统计学意义(P＜0.05);轻度组、中度组与重度组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。Spearman相关分析，HIE患儿外周血与D－二聚体呈负相关(r=－0.46，P＜0.05);与CK－MB呈负相关(r=－0.89，P＜0.05);D－二聚体与CK－MB呈正相关(r=0.43，P＜0.05)。结论新生儿HIE的发生、发展是多因素参与的复杂过程，其中免疫、炎症反应、血管内皮细胞损伤、凝血/纤溶系统等异常可能是同步发生，并相互关联。

缺氧缺血，脑;T淋巴细胞;D－二聚体;心肌酶

新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic－ischemic encephalopathy，HIE)是指新生儿因围生期脑血供和气体交换障碍所致的一种全脑性损伤，严重者可导致新生儿死亡或不可逆性脑损害，如智力低下、脑性瘫痪、生长和发育落后、癫痫等［1］。缺氧缺血性脑损伤发生后，神经元通过分泌细胞因子来激活下丘脑－垂体－肾上腺轴和交感神经系统的活性，进而抑制免疫系统［2］;通过一系列级联反应进一步激活凝血系统［3］，严重者会导致多器官系统的损害，如脑、心、肾、肺、胃肠等器官均有不同程度的损害［4］。基于此，本研究通过检测HIE患儿外周血T淋巴细胞亚群、D－二聚体及心肌酶的水平，探讨三者的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2008年1月—2011年6月我院新生儿科足月HIE患儿65例为研究对象，均符合中华医学会儿科学分会新生儿学组2005年修订的诊断标准［5］:(1)有明确可导致胎儿宫内窘迫的异常产科病史以及严重胎儿宫内窘迫表现〔胎心＜100次/min，持续5 min以上;和(或)羊水Ⅲ度污染〕，或分娩过程中有明显窒息史;(2)出生时出现重度窒息，Apgar评分1 min≤3分，并延续至5 min时仍≤5分;或脐动脉血气pH值≤7.0;(3)出生不久出现神经系统症状，并持续24 h以上。依据HIE病情分度标准，分为轻度组24例、中度组21例、重度组20例。另选择同时期新生儿科出生的健康足月新生儿30例为对照组。所有新生儿排除感染性疾病、先天畸形、溶血性疾病等，母亲均无自身免疫性疾病及其他可能影响新生儿免疫功能的疾病，新生儿住院期间均未使用可影响免疫功能的药物。均已征得新生儿家长知情同意。各组新生儿性别构成、胎龄、日龄、出生体质量比较，差异均无统计学意义(P＞0.05，见表1)，具有可比性。

1.2 检测方法所有受检新生儿于入新生儿科次日清晨7:00空腹抽取股静脉血5 ml，分注3管;应用美国BD Facscalibur流式细胞仪以间接免疫荧光检测血浆T淋巴细胞亚群的百分率;应用法国STAGO全自动血凝仪检测血浆D－二聚体;应用日本奥林巴斯AU2700全自动生化分析

仪检测血清α羟丁酸脱氢酶(α－HBDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK－MB)。均使用仪器配套试剂，严格按仪器规程和试剂盒说明进行操作及判断结果，试剂均在有效期内使用。

1.3 统计学方法采用SPSS 15.0统计学软件进行统计处理，计量资料以(±s)表示，多组间比较采用方差分析;两两比较采用q检验;计数资料采用χ2检验;相关性采用Spearman等级相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

表1 各组新生儿一般资料比较Table 1 Comparison of general data among each group

表2 四组新生儿观察指标比较(±s)Table 2 Comparison of observation indexes among four groups

表2 四组新生儿观察指标比较(±s)Table 2 Comparison of observation indexes among four groups

注:α－HBDH=α羟丁酸脱氢酶，CK=肌酸激酶，CK－MB=肌酸激酶同工酶;与对照组比较，*P＜0.05;与轻度组比较，▲P＜0.05;与中度组比较，△P＜0.05

组别例数CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)CD4+/CD8+D－二聚体(mg/L)心肌酶(U/L)α－HBDHCKCK－MB对照组3087±659±827±62.86±1.150.28±0.05118±42137±6614±4轻度组2478±7*51±8*24±5*2.50±1.06*0.86±0.11*273±101*256±120*59±13*中度组2175±9＊▲48±9＊▲22±7＊▲2.34±0.96*2.14±0.29＊▲466±130＊▲845±290＊▲140±60＊▲重度组2071±10＊▲△46±10＊▲20±7＊▲2.01±0.72＊▲△6.25±0.36＊▲△695±206＊▲△1 658±385＊▲△195±75＊▲△F 4.814.424.113.355.127.519.248.20 P值＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.01＜0.05＜0.05值

3 讨论

脑组织代谢旺盛，其耗氧量约占全身耗氧量一半，在胎儿期因母婴间血液循环及气体交换障碍使得血氧浓度降低，引起脑损害疾病包括新生儿HIE，是新生儿科中严重的疾病之一，围生期窒息是其主要的病因［6］。在缺氧情况下，脑组织的能量代谢障碍、通气功能障碍以及脑微血管通透性增高产生血管源性脑水肿，继而发生选择性神经元坏死、基底神经节变性一系列病理改变［7］。

T淋巴细胞是一个具多功能的细胞群体，细胞免疫的过程中，各T淋巴细胞亚群的相互作用和影响，对维持机体的免疫功能稳定发挥极其重要作用［8］。代表总T淋巴细胞，分为调节免疫反应活性的辅助性T细胞亚群，以为细胞标记;还包括抑制性T细胞亚群，以为细胞标记。细胞作用为促进体液免疫，细胞则是抑制其反应，比值水平反映了免疫系统内环境的稳定性［9］。生理状态下辅助性与抑制性T细胞亚群维持着动态平衡，失调则会导致免疫损伤。本研究结果显示，HIE患儿细胞数量较正常新生儿均明显减少，且重度HIE患儿下降更明显，即患HIE时机体处于免疫抑制状态，这与卞洪亮等［10］、张向东等［11］研究结论一致。HIE患儿的免疫功能抑制机制可能在于:(1)缺氧缺血时，神经元产生大量细胞因子激活了下丘脑－垂体－肾上腺轴以及交感神经系统活性，从而抑制免疫系统;(2)缺氧缺血时，中枢神经系统自身内分泌功能改变，通过神经内分泌递质抑制了免疫系统，但是其确切机制尚需进一步的探讨。

D－二聚体作为纤溶酶水解交联纤维蛋白降解后形成的特异性可溶性降解产物，是体内高凝状态以及纤溶亢进的分子标记物之一［12］。本研究结果显示，HIE患儿外周血D－二聚体水平明显升高，其中重度HIE患儿较轻、中度患儿明显升高，表明机体内纤溶性增高，既有血栓形成倾向又有纤溶亢进，处于一种高水平动态平衡。其原因可能是脑组织缺氧缺血时，体内的血液重新分布、内皮细胞损伤以及组织因子暴露，激活了内、外源凝血系统，导致凝血功能亢进，血液呈现高凝状态，导致出现弥漫性血管内凝血(DIC)的可能性增加。这与文献报道HIE患儿D－二聚体水平明显增高，且与病情呈正相关是一致的［13］。

心肌酶在人体内广泛分布，同时存在于许多组织器官中，包括心肌、骨骼肌、肝脏、肾脏等重要的组织器官［14］。在机体正常状态，CK－MB在心肌细胞的含量最高而血清含量极微，心肌细胞受损伤后2～13 h内血清CK－MB活性会急剧上升，上升的程度和心肌坏死面积成正比，因此CK－MB水平对判断心肌损害具有高度的灵敏性和特异性，是心肌损害的一个很重要的诊断指标。本研究结果显示，HIE患儿外周血α－HBDH、CK、CK－MB水平均显著升高，可能与机体免疫反应，细胞因子、炎性递质导致心肌细胞损伤等有关［15］。

本研究中，HIE患儿包括轻、中、重度各病情程度的患儿，但应排除其他影响血T淋巴细胞、D－二聚体及心肌酶的因素，如本研究中的新生儿排除感染性疾病、先天畸形、溶血性疾病等，母亲无自身免疫性疾病及其他可能影响到新生儿免疫功能的疾病，且未使用可影响免疫功能的药物。本研究因时间所限，所选研究样本较少，在后续研究中可进一步扩大研究样本，选取其他有意义的T淋巴细胞亚群或其他血清学指标进行相关研究。

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3 张玉侠，高丽艳.新生儿缺氧缺血性脑病与血浆D－二聚体含量关系的临床研究［J］．华北煤炭医学院学报，2006，8(6):756－757.

4 曹亚敏.新生儿缺氧缺血性脑病合并心肌损害40例临床诊治［J］．陕西医学杂志，2009，38(11):1535－1536.

5 中华医学会儿科学分会新生儿学组.新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准［J］．中华儿科杂志，2005，43(8):584.

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8 郑玉兰，吴金如，李向阳，等.流式细胞仪检测恶性胸腔积液中T淋巴细胞亚群变化［J］．现代预防医学，2010，37(14):2720－2721.

9 刘义红，熊丽萍，沈红元.毛细支气管炎患儿红细胞免疫及T细胞亚群变化的研究［J］．中国当代儿科杂志，2011，13(3):202－204.

10 卞洪亮，肖志辉，刘伟东，等.新生儿缺氧缺血性脑病与T辅助细胞亚群功能失衡研究［J］．中国新生儿科杂志，2006，21(1):1－4.

11 张向东，纪健玲.新生儿缺氧缺血性脑病辅助性T细胞分化异常的初步研究［J］．南通大学学报:医学版，2006，26(2):126－128.

12 石海矾，陈益平，狄军波，等.巨细胞病毒肝炎患儿血浆D二聚体、血管性假血友病因子变化及复方甘草酸苷治疗的研究［J］．中国当代儿科杂志，2010，12(4):272－274.

13 Sartori MT，Serena A，Saqqiorato G，et al.Variations in fibrinolytic parameters and inhibin－A in pregnancy:related hypertensive disorders［J］．Thromb Haemost，2008，6(2):352－358.

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15 周明琪，刘兰.缺氧缺血性脑病患儿心、肾功能损害检测及意义［J］．山东医药，2007，47(25):80.

Correlation of T Lymphocyte， D－dimer and Myocardial Enzymes in Neonates with Hypoxic－ischemic Encephalopathy

LIU Yan－ping，QIN Shao－peng，HUANG Xian－wen，et al.Department of Laboratory Medicine，Liuzhou People's Hospital，Liuzhou 545001，China

ObjectiveTo investigate the levels and correlation of serum T lymphocyte，D－dimer and myocardial enzymes in neonates with hypoxic－is chemic encephalopathy(HIE).Methods65 full－term neonates with HIE admitted to neonates department of our hospital from January 2008 to June 2011 were divided into mild group(24 cases)，moderate group(21 cases)and severe group(20 cases).Meanwhile，30 full－term healthy neonates of the same period were selected as control group.Serum T lymphocyte subsets percentageplasma D－dimer，α－HBDH，CK and CK－MB were detected and the correlation was analyzed.ResultsThelevels in peripheral blood，D－dimer，α－HBDH，CK and CK－MB among the four groups all showed statistically significant differences(P＜0.05).The levels ofD－dimer，α－HBDH，CK and CK－MB in the control group showed statistically significant differences compared with those in the mild group，moderate group and severe group(P＜0.05).TheD－dimer，α－HBDH，CK and CK－MB all showed statistically significant differences between mild group and moderate group，moderate group and severe group and mild group and severe group(P＜0.05).The levels ofin mild group showed statistically significant differences compared with those in the moderate group and severe group(P＜0.05).Thein mild group and moderate group showed statistically significant difference compared with that in severe group(P＜0.05)．Spearman correlation analysis showed that thein peripheral blood was negatively correlated with D－dimer in HIE neonates(r=－0.46，P＜0.05).Thewas negatively correlated with CK－MB(r=－0.89，P＜0.05).The D－dimer was positively correlated with CK－MB(r=0.43，P＜0.05).ConclusionThe occurrence and development of HIE in neonates is a complicated course involving various factors.Immune，inflammatory reaction，vascular endothelial cell injury and coagulation/fibrinolytic system abnormality may occur simultaneously and relate to each other.

Hypoxic－ischemic，brain;T lymphocyte;D－dimer;Myocardial enzymes

R 722.12

A

1007－9572(2012)11－3842－03

10.3969/j.issn.1007－9572.2012.11.091

545001广西柳州市人民医院检验科(刘艳萍，覃绍鹏)，儿科(黄献文，金伶)

刘艳萍，545001广西柳州市人民医院检验科;E－mail:cdsoft@163.com

2012－03－10;

2012－09－25)(本文编辑:陈素芳)