血液标本处置方式和时间对血糖浓度的影响及统计学问题探讨

牟卫东（重庆市云阳县中医院检验科 404500）

由于血液标本离体后红细胞对葡萄糖进行酵解作用，导致血液标本中血糖浓度降低，因此将血液标本中红细胞与血清进行分离处置和放置时间是影响血糖浓度的重要因素［1-3］。大量研究重复该类研究实验，但由于作者对统计学知识的不熟悉，在统计学方法选择上存在一些误用，特别是在考察血液标本放置不同时间点对血糖浓度检测的影响时均采用配对t检验，直接导致犯同一类错误的概率增大，即把本无差异两个总体均数判为有差异，使结论的可信度降低［1-7］。为此，作者选择3种常见的血液标本离体后状态，放置不同时间后进行血糖浓度测量，以分析其对血糖浓度检测的影响，重点在于给出了这类实验设计正确的数据统计方法，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 按照随机抽样原则选取临床诊断无糖尿病的健康体检人员30例，男17例，女13例，年龄31～52岁（平均43.8岁）。所有参与人员签署了知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 血糖浓度检测仪器为深圳迈瑞BS－800全自动生化分析仪及配套校准品、质控品，检测试剂为葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法），批号141512003，由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供。

1.2.2 方法 按照参考文献［5］对血液标本进行处理，抽取清晨空腹静脉血9 mL，不抗凝，分装成6管，各1.5 mL，分别编号A、B、C、D、E、F管。血液标本进行以下处理：A管离心，分离血清；B管离心，不分离血清；C管、D管、E管、F管静置于室温中（27℃），检测前离心。在距离采血时间1 h测A、B管；2 h测 A、B、C管；4 h测 A、B、D管；6 h测 A、B、E管；8 h测 A、B、F管。每份样品平行测定2次，取均值记录。按样本处理方式进行分类，A 管为第1组，B管为第2组，C、D、E、F为第3组。

1.3 统计学处理 用统计学分析软件SPSS 13.0进行统计分析，实验数据用表示。不同处理方式下血液标本不同时间点血糖值检测结果间的均值比较采用方差分析；以A管第1小时测量值为对照组，各组不同时间点血糖值与对照组两两比较采用Dunnett－t检验；作为比较，各组不同时间点血糖值与对照组比较还采用配对t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 血液标本不同处理方式下放置不同时间对血糖测量值的影响 按处理方式的不同对血液标本匹配为3个组，血液标本的处理方式对血糖测量结果有显著影响（F＝84.216，P＜0.01），同时标本放置时间对血糖结果也存在显著影响（F＝14.621，P＜0.01），见表1。

表1 处理方式和放置时间对血糖测量结果方差分析

表2 不同处理方式的血液标本放置不同时间血糖测定结果的比较（mmol／L

表2 不同处理方式的血液标本放置不同时间血糖测定结果的比较（mmol／L

注：－表示无数据。采用配对t检验与0 h相比，a P＜0.01；与0 h相比，b P＜0.05，c P＜0.01。

放置时间（h）第1组（离心，分离血清）第2组（离心，不分离血清）第3组（未离心，37℃水浴）0 6.02±1.12 6.02±1.12 6.02±1.12 1 6.02±1.12 5.56±1.10a －2 5.93±1.10a 5.39±1.10a 5.12±1.10ab 4 5.87±1.12a 4.87±0.80ab 4.37±1.14ac 6 5.82±1.11a 4.89±1.04ac 3.43±1.20ac 8 5.66±1.07a 4.55±1.02ac 2.72±1.24ac F 0.457 7.062 38.487 P 0.767 ＜0.01 ＜0.01

2.2 血液标本不同处理方式下放置不同时间血糖结果比较为进一步了解标本放置时间对血糖值测量结果的影响，每组间进行方差分析，后用Dunnett－t检验进行两两比较，结果见表2。结果显示采用第1组处理方式处理血液标本，血糖测定值在各时间点差异无统计学意义（F＝0.457，P＞0.05）；采用第2组和第3组处理方式，发现随着放置时间的延长，血糖测量值均逐渐降低，而第3组处理方式下血糖值下降更为显著，如图1所示；与对照组相比，第2组在第4小时时血糖值下降差异具有统计学意义（P＜0.05），而第6、8小时血糖值显著降低（P＜0.01）；第3组则在第2小时时血糖值降低差异就具有统计学意义（P＜0.05）。各组放置不同时间后血糖值与0 h采用配对t检验，发现各时间点血糖值均显著降低（P＜0.01）。

图1 不同处理方式的血液标本血糖值随放置时间的变化曲线

3 讨 论

血液标本采集后，红细胞仍然酵解葡萄糖，使标本血糖浓度降低［8］。众多研究显示，标本放置时间、保存温度、血清分离、采用不同的抗凝剂均对血糖测量的稳定性产生影响［1-2，4，7］。本实 验结果也显示，血液标本处理方式和放置时间对血糖浓度具有显著影响，提示临床医生在分析血糖检测结果时，要注意实验前因素对检测结果的影响。另一方面，临床实验室在重视室内质量控制的时候，也要充分认识实验前质量控制的重要性。这需要加强临床医生及临床实验室对这一常规检测项目充分认识和沟，从而使血糖检测更有助于相关疾病诊疗和检测。

t检验和方差分析均是对计量资料间均值比较的常用统计学方法，然而一些临床医务人员由于并不熟悉这两种统计学方法，在实际运用中难免出现一些不妥甚至误用现象。通过分析已发表血液标本处理和放置时间对血糖浓度影响系列研究中的相关文章，最常见的错误在于对多个不同时间点的标本血糖值均数进行比较时，采用配对t检验方法，这样做使得增大了犯同一类错误的概率α，即可能把本来无差异的两个总体均数判为有差异，使结论的可信度降低。本文给出以一种正确的该类实验的统计学方法，同时与文章报道的采用配对t检验统计学方法相比，得出的结论截然不同，发现每组不同时间点与对照组相比，差异有统计学意义，即采用配对t检验增大了假阳性概率。

通过纠正该类研究的统计学方法发现，对血液标本及时离心并分离血清血糖值在8 h内差异无统计学意义；离心但不分离血清将在第4小时血糖值浓度出现降低；不离心置于室外下的标本则在第2小时血糖值浓度出现降低。因此，为保障血糖检测结果的准确性，在血液标本不能及时送检情况下，采血人员应及时对血液标本进行血清分离操作。

［1］吴鑫，陈峰.室温下血液标本放置时间对血糖测定结果的影响［J］.检验医学与临床，2011，8（9）：1131－1132.

［2］谭国萍.血液标本放置时间和抗凝剂对血糖检测结果的影响［J］.实用医技杂志，2004，11（7）：1292－1293.

［3］夏历，谢小兵.血糖测定中影响因素的探讨［J］.湖南师范大学学报：医学版，2007，4（1）：33－35.

［4］沈红五，陈宏梅，徐秀群，等.标本放置时间与保存温度对血糖血钾结果的影响［J］.护理学杂志，2011，26（8）：61－63.

［5］魏成翠，刘阿玲，贾琳.血液标本放置时间对血糖检测结果的影响［J］.中国误诊学杂志，2009，9（15）：3559－3560.

［6］任爱英.血液标本放置时间对血糖测定结果的影响［J］.检验医学与临床，2010，7（1）：59－60.

［7］刘学政.血液标本放置时间和处理方式对血糖浓度的影响［J］.国际检验医学杂志，2012，33（3）：368－369.

［8］王正芳.糖尿病患者静脉血液离体后不同时间血糖浓度的变化［J］.中国社区医师：医学专业，2011，30（13）：30.