全国5个不同地区乳香醋炙前后乙酸辛酯的含量变化

张会敏，王 萌，郭长强

（山东省中医药研究院，山东 济南 250014）

乳香为橄榄科植物乳香树Boswellia carteriiBirdw.及同属植物Boswellia.bhaw-dijianaBirdw.树皮渗出的树脂［1］，主产于利比亚、苏丹、土耳其、索马里、埃塞俄比亚等地。乳香为常用树脂类中药，具有活血化瘀、消肿止痛、祛腐生肌之功效。临床用药多为醋炙品，而醋炙品的药理及化学含量测定的报道极少［2］。由于乳香为进口中药，来源较广，市售乳香的质量评价颇为重要。实验研究［3-4］表明乳香中的主要有效成分为挥发油类，而乙酸辛酯占乳香挥发油的40％左右。为了明确醋炙法是否能够影响乳香中乙酸辛酯的含量，比较醋炙前后乳香中乙酸辛酯的含量变化，本文对购自全国5个不同地区的乳香生品进行统一醋炙，采用文献［5］改进方法：茴香醛内标法，利用气相色谱测定法对不同地区的市售乳香醋炙前后的乙酸辛酯含量进行测定比较。

1 仪器、试剂与材料

HP-6890气相色谱仪；FID检测器；毛细管色谱柱HP INNOWAX（30m×0.53mm×1.0μm）；AG245电子天平（METTLER TOLEDO）；乙酸辛酯（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：111671-200401）；茴香醛（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：110838-200504）：无水乙醇（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20070103）。

乳香：购自全国5个不同地区，外观性状及规格见表1。

表1 5个不同地区乳香的外观性状及质量评价

醋炙乳香：由本实验室醋炙制得。炮制程度的判定依据《山东省炮制规范》（1990版）［6］、《中国药典》（2010版）［1］。取生乳香300g，于140℃时不停翻炒9min，至表面微溶时，喷淋5％米醋，即15mL，再翻炒1min，至醋液被吸尽，呈油亮光泽时，迅速出锅，放凉即得。

2 方法与结果

2.1 气相色谱条件 进样口温度：230℃；柱程序升温：130℃（3min）-30℃/min-200℃（4min）；检测器温度：250℃；载气流速（N2）：6.3mL/min；进样量：1.0μL。

2.2 溶液制备 乙酸辛酯对照品溶液的制备：精密称取乙酸辛酯87.0mg，置10.0mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，混匀，作为对照品储备液。精密量取5.75mL对照品储备液，置10.0mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，混匀，作为对照品应用液（5.0mg/mL）。

内标溶液的制备：精密称取茴香醛113.0mg，置10.0mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，混匀，作为内标对照品储备液。精密量取8.85mL储备液，置10.0mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，混匀，作为内标应用液（10.0mg/mL）。

2.3 供试品溶液制备 取乳香及醋炙乳香样品50g，称定重量，置500mL烧瓶中，加水300mL，沸石数粒，连接挥发油提取器与回流冷凝管。加热至沸，保持微沸5h，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，将水缓缓放出，放置1h以上，再读取挥发油量，并将挥发油保存至装有适量无水硫酸钠的容量瓶中，备用。取50μL已提取的挥发油样品，置10.0mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，混匀，精密量取100.0μL溶液，置1.0mL量瓶中，精密加入50μL内标溶液，加入无水乙醇至刻度，混匀，进样1.0μL分析，内标法计算含量。

2.4 标准曲线 精密量取乙酸辛酯对照品溶液（5.0mg/mL）0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、4.0mL，置10.0mL量瓶中，分别加内标溶液（10.0mg/mL）500μL，加无水乙醇至刻度，作为标准曲线溶液，分别进样分析，以乙酸辛酯的浓度为横坐标，以A标/A内为纵坐标，得标准曲线如下：Y=4.049 1X+1.033 5，r=0.999 0。

2.5 方法精密度试验 日内精密度：取标准曲线中0.5mg/mL乙酸辛酯对照品溶液，进样1.0μL，连续测定6次，以乙酸辛酯与内标的峰面积比值计算精密度测得RSD为1.09％。日间精密度：取标准曲线中0.5mg/mL乙酸辛酯对照品溶液，进样1.0μL，每日测定1次，连续测定5d，以乙酸辛酯与内标的峰面积比值计算精密度测得RSD为1.02％。

2.6 重复性实验 按上述条件对同一乳香挥发油样品（北京华邈乳香）进行含量测定，每个样品平行进样2次，连续进行6次测定，RSD为1.68％。

2.7 加样回收率实验 取用于重复性实验的乳香样品适量，精确加入乙酸辛酯对照品及内标溶液适量，按上述条件进行6次加样回收实验，内标法计算含量，计算得平均回收率为105.3％，RSD为1.09％。结果见表2。

2.8 样品含量测定 按上述方法测定5个市售乳香样品及其炮制品的挥发油中的乙酸辛酯绝对含量，结果见图1，图2，表3，表4。

表2 加样回收率结果

图1 生品乳香中乙酸辛酯的GC色谱图

图2 醋炙乳香中乙酸辛酯的GC色谱图

表3 5个不同产地生乳香样品中乙酸辛酯的绝对含量（n=3）

表4 5个不同产地醋炙乳香样品中乙酸辛酯的绝对含量（n=3）

3 结语

3.1 内标法是一种间接或相对的校准方法 在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校准和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时，内标物应满足以下几个条件：1）内标物与被分析物质的物理化学性质要相似（如：沸点、极性、化学结构等）。2）内标物应能完全溶解于被测样品（或溶剂）中，且不与被测样品起化学反应。3）内标物的出峰位置应该与被分析物质的出峰位置相近，且又不共溢出，目的是为了避免GC的不稳定性所造成的灵敏度的差异。4）选择合适的内标物加入量，使得内标物和被分析物质二者峰面积的匹配性大于75％，以免由于它们处在不同响应值区域而导致的灵敏度偏差。茴香醛恰好满足以上几点，是笔者优选出的最适内标物，故本文采用茴香醛内标法对不同地区的市售乳香醋炙前后的乙酸辛酯含量进行测定。

3.2 本文所测乙酸辛酯的含量为其在药材中的绝对含量，而非在挥发油中的含量 气相测定结果显示，5个不同地区的生乳香样品中乙酸辛酯的绝对含量均在1.02～1.22（mL/g，％）；其醋炙品的含量均在1.00～1.20（mL/g，％）。可见，生乳香与醋炙乳香中乙酸辛酯的含量相差甚微，没有显著差异。原因可能有二：一是市售乳香生品可能都来自同一国家，醋炙品为统一炮制；二是醋炙过程温度不高、时间短，仅有少量的乳香珠表面沸点低的挥发油受热有所挥发。

［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京：化学工业出版社，2010：207.

［2］崔锐，周金云.乳香化学和药理的研究进展［J］.中国药学杂志，2003，38（6）：704.

［3］刘青，于宗渊.气相色谱法测定乳香挥发油中乙酸辛酯的含量［J］.时珍国医国药，2007，18（6）：1416.

［4］卢兖伟，王琦，李胜群，等.气质联用法分析炮制对乳香挥发油的影响［J］.中成药，1996，18（11）：20.

［5］宋光林，郭峰，曾广铭，等.乳香中乙酸辛酯含量的测定［J］.贵州科学，2008，26（1）：57.

［6］山东省中药炮制规范编委会.山东省炮制规范［S］.济南：山东科学技术出版社，1990：246.