黄连生物碱的提取纯化及降脂作用

侯 宏，李学刚＊，李 平，王小华，冯 平

（1.西南大学药学院，重庆 400715；2.重庆北碚区中医院，重庆 400700）

黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensisFranch，三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云连Coptis teeta wall.的干燥根茎。其活性成分为原小檗碱型生物碱，主要包括盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀及总生物碱。研究［1-5］表明，黄连有抗菌、抗病毒、抗心律失常、抗肿瘤、降血糖及降血脂等作用。黄连提取纯化方法很多，有水提、醇提以及柱层析纯化等［6-8］，本实验采用乙醇结合酸溶碱沉的方法提取生物碱并再进一步纯化，在降血脂方面研究提供依据。

1 材料

1.1 药材和试剂 黄连采自重庆石柱黄连GAP基地；柱层析硅胶D101大孔树脂、乙醇、硫酸、Ca（OH）2（成都科隆试剂公司）；脂脉康胶囊（12粒×3板/盒，批号20090502，国药准字ZI4020737，山西安特生物制药股份有限公司）；胆固醇（安徽天启化工科技有限公司，纯度≥92.8％）。猪油、鲁花花生油（超市购买），总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定试剂盒（南京建成生物研究所）。

1.2 主要仪器 RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）；TG16-W微量高速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；EOSBRAVO全自动生化分析仪。

1.3 动物 鹌鹑，雌雄各半，2个月龄，体质量（130±20）g，购于重庆万盛鹌鹑养殖场。

2 方法和结果

2.1 提取和分离 黄连干燥根茎（10kg）粉粹，95％乙醇浸泡24h过滤，倒出滤液，反复3次，合并滤液，减压浓缩得浸膏2 000g，通过预实验，浸膏采用5倍量的0.5％H2SO4溶解，放置2h，再加Ca（OH）2调pH值9～10，然后其将一部分加入装有D101大孔树脂的柱中，先用蒸馏水洗至无色，再用95％乙醇以2BV/h洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得总生物碱的量；另一部分用氯仿、正丁醇萃取，其中取正丁醇萃取物上硅胶柱色谱，并利用重结晶手段，得到化合物小檗碱、黄连碱及巴马汀。

2.2 黄连生物碱对血清TC、TG、LDL-C及HDL-C的影响 选用健康鹌鹑70只用普通饲料适应性喂养1周，随机分为7组：正常对照组，模型组，脂脉康组（460mg/kg，按人用量通过体表面积折算）及小檗碱、黄连碱、巴马汀、总生物碱组（剂量100mg/kg，根据前期血脂实验研究所得）。除正常组喂普通饲料外，其余各组喂高脂饲料（79％普通饲料+14％猪油+6％花生油+1％胆固醇）［9-10］。于实验开始后第4周禁食12h，颈静脉取血1mL，分离血清，利用全自动生化分析仪测定血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C。结果用均数±标准差（±s）表示，并进行t检验，见表1。

结果显示，用高脂饲料连续喂养鹌鹑4周后血清TC、LDL-C、HDL-C与正常组相比明显升高，表明造模成功；与模型组相比，所有药物组均可以降低鹌鹑血脂指标，其中，小檗碱、黄连碱、巴马汀可明显降低血清TC，差异有统计学意义，但总生物碱降TC效果不明显，均可明显降TG，差异有统计学意义，在一定程度上药物组均可提高HDL-C，但差异无统计学意义。黄连碱降血脂指标最明显。

表1 黄连生物碱对鹌鹑TC、TG、LDL-C、HDL-C的影响（±s，n=10） mmol/L

表1 黄连生物碱对鹌鹑TC、TG、LDL-C、HDL-C的影响（±s，n=10） mmol/L

注：与正常组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

组 别 TC TG LDL-C HDL-C正 常 组 6.29±0.81 2.37±0.97 1.83±0.90 2.54±0.57模 型 组 34.88±1.01##5.65±1.92# 28.36±1.16# 5.32±0.33##脂 脉 康 组 33.97±1.27 2.76±0.48 21.23±1.74△ 6.30±0.27小 檗 碱 组 22.46±2.72△ 2.74±0.45 17.72±2.87△△ 5.62±0.41黄 连 碱 组 23.54±3.75△ 2.56±0.22 16.36±3.76△△ 5.87±0.46巴 马 汀 组 25.55±4.75△ 2.96±0.52 20.78±3.13△ 5.77±1.05总生物碱组 31.79±7.39 3.27±0.81 25.48±2.34 6.01±0.46

3 小结

高血压、高血脂等心脑血管疾病的增加已成为当今社会影响人类健康的一大难题，因此，具有降压、降脂功效的药物研发一直受到人们的重视。本实验建立鹌鹑高血脂模型，结果表明小檗碱、黄连碱、巴马汀均能显著降低TC、TG及LDL-C，有望开发为降血脂类药物。

［1］崔学军.黄连及其有效成分的药理研究进展［J］.中国药师，2006，9（5）：469-470.

［2］丁秀丽.黄连素在糖尿病治疗中的应用［J］.长春中医药大学学报，2009，25（6）：899.

［3］王静，张国成.黄连素治疗老年Ⅱ型糖尿病神经病变的临床研究［J］.长春中医药大学学报，2009，25（2）：193-194.

［4］左彦方，郭毅，姜昕，等.小檗碱对兔动脉粥样硬化及血脂的影响［J］.中国脑血管病杂志，2006，3（5）：204-207.

［5］魏敬，蒋建东，吴锦丹，等.盐酸小檗碱的调脂作用的研究［J］.中华糖尿病杂志，2005，13（1）：49-51.

［6］张乐佳，夏新华.黄连提取工艺的研究［J］.中成药，2001，23（6）：398-400.

［7］武佳，谭桂莲，杨红.黄连中盐酸小檗碱提取工艺探究［J］.时珍国医国药，2007，18（2）：437-438.

［8］胡冬华，袁绪富.黄连素的提取及分子活性部位研究［J］.长春中医药大学学报，2006，22（1）：67.

［9］陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1993：519-520.

［10］侯永坤，潘雨利，冷艳华.脂溶胶囊对高脂大鼠降脂作用的实验研究［J］.吉林中医药，2008，28（11）：843-845.