知母皂苷及其苷元的药理作用研究进展

蔡 飞，王维泓，高守红，陈万生(.解放军广州军区机关门诊部药械科，广东 广州 50080;.第二军医大学附属长征医院药学部，上海 00003)

中药知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎，始载于《神农本草经》，现为《中国药典》收载，国内外学者对其化学成分和药理作用等方面做了大量的研究工作。其化学成分主要有皂苷类、黄酮类、双苯吡酮类、木脂素类、有机酸类、多糖类以及无机元素等成分，其中皂苷及其苷元是具有广泛药理活性的最主要成分，根茎含量约为6%，且种类较多［1］。知母中所含皂苷为甾体皂苷，主要为知母皂苷A、B以及异菝葜皂苷等，皂苷元是皂苷水解后去掉结合糖基的产物，主要有菝葜皂苷元(sarsasapogenin)，马尔可皂苷元(markogenin)，新吉托皂苷元(neogitogenin)，薯蓣皂苷元(diosgenin)等。近年来，有关知母皂苷及其苷元的药理活性研究有较大进展，值得关注，现综述如下。

1 对老年痴呆症的防治作用

脑组织中胆碱能M受体密度下降与患老年痴呆症密切相关，N受体数量与大脑的学习记忆功能密切相关。夏宗勤和Hu等［2～4］证明知母皂苷元能使痴呆模型大鼠脑内M1受体密度增加，其学习记忆能力明显增强，对老年性痴呆的胆碱能系统功能渐进性退化发挥一定的预防和治疗作用。实验表明［5］知母总皂苷能显著提高衰老大鼠脑内的N受体数量，而且知母总皂苷在大鼠体内经吸收转化后可抑制大鼠脑皮质乙酰胆碱酯酶的活性［6］，从而发挥益智和抗老年痴呆的作用。Lee等［7］的研究也表明知母皂苷A-Ⅲ主要通过抑制乙酰胆碱酯酶及炎症因子的表达而改善小鼠的学习和记忆障碍。也有研究［8］提出知母皂苷通过抗氧化作用而发挥改善学习和记忆障碍的作用。另外，有研究［9］表明知母皂苷B可通过抑制tau蛋白的异常磷酸化，维护海马神经元的正常结构和功能，从而达到治疗老年痴呆症的目的。同时，我们的研究［10］表明知母皂苷 B-Ⅱ可通过提高白介素-10(IL-10)和抗炎症细胞因子的表达而起到改善学习和记忆障碍的作用。总之，大量的研究已经证实通过不同的作用途径，知母皂苷及其苷元具有良好的改善老年痴呆症状的作用。

2 对脑缺血损伤的保护作用

Oh等［11］对脑缺血大鼠灌服以知母皂苷为主要成分的知母水提物，发现脑缺血再灌注损伤得到显著改善，其作用机制可能和降低嗜中性粒细胞渗入脑组织有关。我们的研究［12］也表明，大鼠脑缺血损伤后灌服不同剂量的知母总皂苷，大鼠偏瘫症状评分减小，缺血侧脑半球水肿程度减轻，脑梗塞体积缩小，且作用强度与剂量存在一定关系。病理检查结果显示，知母总皂苷能减轻缺血侧大脑出血坏死、减轻神经细胞和神经纤维的损伤，从而对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。实验表明［13］，知母皂苷能明显减轻自由基损伤、炎症反应以及一氧化氮的毒性作用，因而对脑缺血再灌注大鼠具有一定的保护作用。吴非等［14］发现一氧化氮合酶(NOS)的表达变化在脑缺血再灌注损伤的机制中起着重要作用，推测知母皂苷主要降低脑组织中神经元型NOS表达，同时增加内皮型NOS表达，而表现出一定的脑神经保护作用。

3 抗凝血作用

Niwa等报道知母皂苷A-Ⅲ及马尔可皂苷元对人血小板聚集有抑制作用［15］。李素燕等［16］也报道知母皂苷A-Ⅲ在体、内外对大鼠血小板聚集和血栓形成均有抑制作用，但不影响体内凝血时间，这说明知母皂苷A-Ⅲ可能只是影响血小板的聚集、粘附和活化，而对血液中的各种凝血因子和血细胞因子没有影响。Dong等［17］首次分离得到知母皂苷B时就发现其对兔血小板聚集具有抑制作用。Kodama研究小组［18，19］还发现知母皂苷Ⅰ、Ⅰa、B-Ⅰ、B-Ⅱ、B-Ⅲ、A-Ⅲ、E1和E2均对人血小板聚集具有显著的抑制作用，此作用随皂苷浓度的升高而增强，但知母皂苷A-Ⅲ对人血红细胞具有强的溶血作用，知母皂苷Ⅰa具轻微溶血作用，其它皂苷无此作用，且皂苷抗血小板聚集及溶血作用强弱与C-22位所连基团相关。最近，Chen等［20］发现菝葜皂苷元、薯蓣皂苷元在体外通过抑制组织因子的表达也显示出一定的抗凝血活性。

4 抗氧化作用

Zhang和 Meng 等［18～21］发现知母皂苷Ⅰ、Ⅰa、B-Ⅱ和B-Ⅲ均对甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(fMLP)、花生四烯酸(AA)诱导的过氧化物有抑制作用，此作用强度与浓度呈正比关系，但对卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)诱导的过氧化物有增强作用。知母皂苷B-Ⅰ仅对fMLP诱导的过氧化物有增强作用，而对其它两者诱导的过氧化物基本无作用，知母皂苷A-Ⅲ对PMA诱导的过氧化物有增强作用而对AA诱导的过氧化物有显著抑制作用。知母皂苷E1、E2对fMLP诱导的过氧化物有显著抑制作用而对PMA诱导的过氧化物有增强作用，但对AA诱导的过氧化物无作用［19］。邓云等［22］的研究也显示知母皂苷B-Ⅱ对体外培养的原代大鼠神经细胞具有明显的抗氧化损伤作用。由于知母皂苷对过氧化物的产生有抑制作用，因而其也可能具有抗炎作用。实验表明［13］知母皂苷有清除氧自由基的作用，使细胞内氧化还原反应处在一个动态平衡之中，因而改善脑内自由基代谢，对慢性应激引起的脑过氧化损伤有保护作用。

5 抗肿瘤作用

较早的文献［23］报道知母皂苷能抑制新生大鼠甲胎蛋白(AFP)的基因表达，使人肝癌细胞转染的裸鼠生存期延长。近年来，知母皂苷的抗肿瘤活性越来越受到重视。王丽娟等［24］发现薯蓣皂苷元在小鼠体内对肉瘤、腹水型肝癌和宫颈癌等有显著的抑制作用，在体外对小鼠肺上皮癌细胞、人宫颈癌细胞和人乳腺癌细胞等也有明显的抑制作用。Trouillas等［25］考察了菝葜皂苷元、异菝葜皂苷元、薯蓣皂苷元对人源1547骨肿瘤细胞的生物活性，发现它们可造成肿瘤细胞的凋亡和生长周期停滞。Ni等［26］发现，菝葜皂苷元能诱导人肝肿瘤细胞HepG2的凋亡，作用机制在于其导致肿瘤细胞中线粒体活性氧的瞬时暴增，中断了细胞生长周期。Huang等［27］也发现菝葜皂苷元对人源A2780、HO-8910、Eca-109、MGC-803、CNE、LTEP-a-2和KB等多种肿瘤细胞以及小鼠L1210肿瘤细胞均有不同程度的细胞毒性。Sy等［28］发现知母皂苷A-Ⅲ通过线粒体介导诱发Hela肿瘤细胞的凋亡，而且构效关系表明知母皂苷A-Ⅲ的糖链是其发挥活性的必需结构，而其母核菝葜皂苷元没有相应活性。King等［29］进一步研究表明知母皂苷B-Ⅱ没有抗肿瘤活性，但其酶解后生成的知母皂苷A-Ⅲ能诱导多种肿瘤细胞凋亡，且对正常细胞无影响。其作用途径主要有两条，一是抑制mTOR靶点的磷酸化，二是诱导内质网应激阻断真核起始因子的磷酸化和半胱天冬酶的激活。另外，Kang等［30］以人结肠癌细胞 HCT-15证明诱导细胞凋亡和中断生长周期是知母皂苷A-Ⅲ抗肿瘤活性的作用机制，并且在转染此癌细胞的裸鼠体内验证了知母皂苷A-Ⅲ能显著抑制肿瘤生长。

6 抗骨质疏松作用

维A酸可造成小鼠骨丢失为主的骨质疏松，杨茗等［31］发现菝葜皂苷元可对抗维A酸所致的小鼠股横径、骨矿物质及骨胶原的减少，升高雌二醇及骨钙素值，降低碱性磷酸酶及抗酒石酸酸性磷酸酶水平，从而对维A酸所致小鼠骨质疏松具有一定的防治作用，其机制可能与减缓雌激素水平的降低，抑制骨的高转换有关。进一步实验表明，知母皂苷元能促进体外培养的成骨细胞增殖与分化成熟，对分化成熟的破骨细胞无明显影响，但可抑制骨髓细胞向破骨细胞的分化。Nian等的实验［32］表明，知母皂苷对卵巢切除致骨丢失大鼠模型连续给药12周，可明显增强大鼠血清碱性磷酸酶活性，同时降低血清骨钙素浓度，抑制骨矿物质密度下降，对大鼠模型具有显著的成骨促进作用，但不影响破骨细胞数量，这充分说明知母皂苷通过促进骨形成而非抑制骨质吸收防止卵巢切除导致的骨丢失。另一实验［33］也表明，知母皂苷B-Ⅱ不仅能提高卵巢切除大鼠的骨矿物质密度，还能促进骨形成。

7 抗炎作用

我们最近的实验［34］表明知母皂苷B-Ⅱ具有体外抗炎活性，在mRNA和蛋白表达水平可抑制白介素-1β(IL-1beta)、肿瘤坏死因子-α(TNF-alpha)和白介素-6(IL-6)等炎症因子的生成，同时抑制细胞核因子-κB(NF-kappaB)和促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38 MAP kinase)的激活。因而抑制NF-κB的转录活性，以及抑制p38 MAP kinase的激活是其可能的作用机制。同时，Kim等［35］发现知母皂苷B也具有抗炎作用，且作用途径与知母皂苷B-Ⅱ相同。邓云等［13］的研究表明在模型大鼠体内知母皂苷还能降低血液中白细胞及中性粒细胞数量，从而发挥抗炎作用。

8 降血压作用

李泽松等［36］证明知母皂苷作用于血管内皮细胞后，血管紧张素酶原基因、肾上腺素α2A受体基因及内皮素转换酶-1基因的表达均有不同程度的下调，从而发挥调控血管内皮细胞功能达到降低血压的作用。也有研究［37］报道，知母皂苷及其苷元可使动物模型病理性升高的β肾上腺素受体水平趋于正常，且这种作用与糖皮质激素及其受体无关。研究表明［38］知母皂苷A-Ⅲ能拮抗去氧肾上腺素引起的血管收缩，可能是由于其促进血管内皮细胞和平滑肌细胞钙离子内流而导致NO的释放增加。Xiao等［39］发现知母皂苷具有抑制血管平滑肌细胞增殖和促进其凋亡的作用，且作用机制也是依赖NO通路实现的。

9 降血糖作用

有报道［40］称知母皂苷A-Ⅲ能降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型的血糖水平，且呈剂量依赖性关系，其作用机制可能为抑制肝内糖原分解或异生。李春梅等［41］研究了知母皂苷对正常小鼠和糖尿病小鼠糖耐量及空腹血糖的影响，发现知母皂苷对正常小鼠无降血糖作用，但可使糖耐量曲线趋于平缓，其能显著提高糖尿病小鼠糖耐量，降低实验性糖尿病小鼠的空腹血糖，从而发挥一定的降糖作用。

10 降血脂作用

韩兵等［42］采用高脂饲料喂养鹌鹑建立高脂血症和动脉粥样硬化模型，知母皂苷连续灌胃给药2周，可显著降低血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白含量，提高高密度脂蛋白/总胆固醇比值，缩小斑块面积，减轻动脉粥样硬化程度，表现出对高脂血症及动脉粥样硬化明显的抑制作用。而付宝才等［43］的研究也表明，对高脂饲料造模的SD大鼠灌胃知母皂苷30 d后，知母皂苷能显著增强高脂血症大鼠肝脏低密度脂蛋白受体的活性，加快血中低密度脂蛋白的清除，从而起到调控血脂水平的作用。

11 其它作用

Ren等［44］发现知母总皂苷对多种抑郁模型具有一定的抗抑郁作用，作用机制可能与其增强去甲肾上腺素能及5-羟色胺能神经系统有关，亦有可能是对抗皮质酮诱导的细胞损伤。另外，知母皂苷有杀血吸虫宿主钉螺的作用，其中知母皂苷A-Ⅲ活性最强［45］。最近还有研究［46］表明知母皂苷 A-Ⅲ、B-Ⅲ、D及菝葜皂苷元对皮肤过敏和瘙痒具有抑制作用。

12 结语

综上所述，知母皂苷及其苷元具有丰富的生物活性和药理作用。有关它们的活性、药理作用和制备工艺等方面的专利已被大量申请，相应的新药研究与开发工作也正在进行之中。尤其是知母皂苷及其苷元在老年痴呆症、心脑血管系统疾病、肿瘤及骨质疏松等方面的预防和治疗作用逐渐被人们深入认识和广泛报道，越来越受到重视，因而有效部位或单体成分(如知母皂苷B-Ⅱ、A-Ⅲ等)的临床应用前景广阔，但其作用机制及体内代谢等方面还需要进一步系统深入的阐明，以期为新药开发积累充分的研究资料。

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