芪红胶囊水提工艺研究

刘兆龙 聂继红 张艳君

1.新疆医科大学附属中医医院药学部，新疆 乌鲁木齐 830000;

2.新疆自治区人民医院科研教育中心，新疆 乌鲁木齐 830000

芪红胶囊水提工艺研究

刘兆龙1聂继红1张艳君2

1.新疆医科大学附属中医医院药学部，新疆 乌鲁木齐 830000;

2.新疆自治区人民医院科研教育中心，新疆 乌鲁木齐 830000

目的:优选芪红胶囊水提工艺。方法:以丹酚酸B提取量和浸膏得率为指标，采用L9(34)正交设计试验，对提取时间、提取次数、加水倍量等因素进行考察，以确定最优提取工艺。结果:最优工艺为用12倍量水，回流提取2次，每次1h。结论:优选得到的芪红胶囊水提工艺稳定、可行。

芪红胶囊;水提工艺;正交试验;高效液相色谱法

芪红胶囊为新疆医科大学附属中医医院心内一科主任王晓峰主任医师的临床经验方，由红景天、丹参、黄芪、红花等七味药组成，处方中黄芪具有补气升阳、益卫固表、利水消肿、托疮生肌等作用，尤以补中益气、升举清阳为主要功效，是补气之要药［1］。红花味辛，微苦，性温，归心，肝经，是活血通络，去瘀止痛之良药，为传统而又珍贵的中药［2］。丹参具有活血化瘀、养血安神、凉血消痛的功效。在治疗方面，如冠心病、心肌梗塞、缺血性中风等疾病方面有比较明显的疗效［3］。本实验是对该方中丹参、红花、黄芪用水提取，采用单因素及正交试验设计优选其水提工艺。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters 2695高效液相色谱仪 (美国 Waters公司);AL204电子天平 ［梅特勒 －托利多仪器 (上海)有限公司］;AG135电子天平 ［梅特勒－托利多仪器 (上海)有限公司］;SK3300LH超声清洗器 (上海科导超声仪器有限公司);Direct－QTM5超纯水仪 (Millipore Corporation，Bedford，MA，U.S.A.)。

1.2 试药

丹酚酸B对照品 (中国药品生物制品检定所，批号111562－200302);甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，试验中其它试剂均为分析纯。红花、黄芪、丹参等药材由新疆维吾尔自治区中医医院提供，经检验均符合中国药典2010年版一部项下规定。

2 方法与结果

根据试验设计，红花、黄芪、桂枝采用水提法进行提取。在工艺研究中，拟采用HPLC法测定水提液中丹酚酸B的含量，以丹酚酸B提取量及水提浸膏得率为指标，进行综合评价，利用单因素及正交实验对以上三味药材进行水提工艺筛选，采用综合评分优选水提工艺组合，其中丹酚酸B提取量及水提浸膏得率的权重系数分别为0.8、0.2。

综合评分=(各样品中丹酚酸B提取量∕该组中丹酚酸B最大提取量) ×0.8×100+(该组中最小浸膏得率∕各样品浸膏得率) ×0.20×100

2.1 水提液中丹酚酸B的含量测定

2.1.1 色谱条件:

色谱柱:VP－ODS柱 (4.6mm×150mm，5μm);流动相:甲醇－乙腈 －2%甲酸 (24∶9∶67)，检测波长为286nm，柱温35℃，流速1ml/min。

2.1.2 供试品溶液的制备及测定

按处方量称取各味药材分别粉碎至过1号筛，加水回流提取一定时间，滤过，定容。样品溶液经微孔滤膜(0.45μm)过滤后，取5μL注入高效液相色谱仪测定，供试品溶液高效液相色谱图，见图1。

2.1.3 对照品储备液的制备

精密称取丹酚酸B对照品适量，置于25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，摇匀得到对照品储备液 (浓度为0.139mg/ml)。

2.1.4 标准曲线的绘制

分别吸取该对照品储备液 1ml、2ml、3ml、4ml置于5ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，取10μl进样，测定。以峰面积积分值 (Y)为纵坐标，对照品浓度 (X)为横坐标进行回归，得回归方程为:Y=12035181X－44053;相关系数r=0.9999。结果显示在0.0277mg/ml～0.139mg/ml范围内，丹酚酸B峰面积与浓度呈良好的线性关系。对照品溶液高效液相色谱图见图2。

2.1.5 精密度试验

取同一对照品溶液在同一天内重复进样6次，并连续测定5d，计算日内及日间精密度，结果分别为日内精密度RSD=0.9156%;日间精密度RSD=0.5023%。表明本方法精密度良好。

2.1.6 加样回收率试验

按处方量称取各味药材分别粉碎至过1号筛，加入适量的丹酚酸B对照品溶液，制备相应的样品共6份，按2.1.1项下色谱条件进行含量测定，结果平均加样回收率为99.76%，RSD为1.43%(n=6)。

2.1.7 阴性对照试验

精密称取芪红胶囊处方中醇提部分除丹参以外的药材，按照相应方法制备缺丹参的阴性对照溶液。用高效液相色谱法测定，进样量5μl。结果表明，芪红胶囊处方中水提部分中其余药材对丹酚酸B的含量测定没有干扰。阴性对照溶液见图3。

2.2 提取工艺筛选［4］

根据单因素试验结果，以丹酚酸B提取量及水提液的浸膏得率为考察指标，加水倍数分别为10、12、14倍;提取时间分别为0.5、1.0、1.5h;提取次数为1、2、3次。因此确定因素水平见表1。

表1 正交实验设计因素水平表

以丹酚酸B提取量及浸膏得率为指标，采用综合评分的方法，权重系数为丹酚酸B提取量为80，浸膏得率为20，满分为100。进行正交试验，结果见表2。

表2 L9(34)正交试验设计表

NO A B C D丹酚酸B提取量(mg/g)浸膏得率(%)综合评分7 3 1 3 2 26.55 32.53 92.04 8 3 2 1 3 25.36 23.68 93.08 9 3 3 2 1 25.45 22.69 94.09 K1 272.65 277.05 276.58 278.10 K2 283.03 279.27 281.28 277.72 K3 279.21 278.57 277.03 279.07 R 10.38 2.22 4.70 1.35

对正交试验结果进行方差分析，分析结果见表3。

表3 方差分析

由表2极差分析结果可知，对提取影响大小顺序为A＞C＞B，最佳提取工艺为A2C2B2。表3方差分析结果表明，加水倍数对提取效果有显著性影响 (P=0.0173)。结合工业大生产，确定最优工艺确定为A2C2B2，即12倍量水，回流提取2次，每次1h。

2.3 验证实验

取一定处方量药材，按正交试验筛选出的提取条件A2B2C2进行验证，结果见表4。

表4 验证实验结果

3 讨论

在确定供试品溶液的HPLC色谱条件时，首先采用了药典方法［5］，结果样品峰与杂质峰未能有效分离。在查阅大量资料后反复试验，当流动相改为甲醇－乙腈－2%甲酸(24∶9∶67)时，丹酚酸B峰与其他组分色谱峰能较好地分离，并且峰形较好，基线平稳。

本试验采用单因素试验及正交设计试验，最终确定12倍量水，回流提取2次，每次1h的方法为最优工艺。优选得到的芪红胶囊水提工艺简易、稳定、可行，为工业化生产提供了一定的依据。

［1］周慧生.黄芪的临床应用［J］.亚太传统医药，2007，5:37－38.

［2］杨晓君.吴桂荣.红花的现代研究 ［J］.农垦医学，2004，26(4):301－304.

［3］陈冠军.张瑞红，王莉.浅析丹参的药理作用［J］.中外医疗，2010，23:125.

［4］ 张荣泉.丹参水溶性出发提取工艺研究 ［J］.中药材，2001，24(11):818.

［5］ 中国药典 (一部) ［S］.2005:71.

The study of extraction process by water on qi hong capsule

Liu Zhao－long1，Nie Ji－hong1，Zhang Yan－jun2

1.Pharmaceutical preparation section of Traditional Medical Hospital，Urumqi 830000，China

Objective:To optimize the extraction process by water of qi hong Capsule.Methods:We use the extraction content of salvianolic acid B and extractum yield as the index and orthogonal test design to choose the best extraction process.The optimum extraction condition consists of the extraction time，the time of extraction and the volume of water.Results:The best extraction process was 12 times the volume of water，extracted 2 times，1 hour each time.Conclusion:The optimized process is feasible and stabilization for extraction of qi hong Capsule.

qi hong Capsule;extraction process by water;orthogonal test design;HPLC

R284.2

A

1007－8517(2011)20－0028－03

2011.09.12)