旋毛虫病(trichinellosis)是一种严重的人兽共患寄生虫病,人体感染旋毛虫主要因生食或半生食含有幼虫囊包的猪肉及其肉制品所致。我国除海南省以外的其他省、市、自治区均有动物或人感染旋毛虫病的报道[1-2]。据2001—2004年全国人体重要寄生虫病现状调查,我国10个省(市、区)的人群旋毛虫血清抗体阳性率为3.31%[3],估计我国人体旋毛虫感染者达4 000多万。河南省为我国旋毛虫病的高发区,1984-2004年曾发生16次人体旋毛虫病暴发[4-5],但河南省东部的商丘地区尚无旋毛虫病的报道。鉴于此,笔者在2010-2011年对河南商丘地区农村屠宰生猪的旋毛虫感染情况进行了调查。
1.1 调查现场与肉样采集 分别于2010、2011年农历春节前夕随机选取河南省商丘某县农村的3个生猪屠宰点作为调查现场,从每头屠宰猪的膈肌角采集50g左右的肌肉样本,并记录生猪来源及饲养方式。
1.2 检验方法
1.2.1 直接压片镜检法 将肉样逐一编号,从不同部位随机剪取米粒大小的肉样24个,用2张载玻片将肉样压薄至透过它能看到报纸上的字为准,并用湿棉线在载玻片两端固定,光镜下低倍镜(×40)观察。为提高工作效率,每2张载玻片间同时放置5个肉样。
1.2.2 人工消化法 对所有肉样进行人工消化法检查。分别从每份膈肌的不同部位剪取5g肉样,每8份肉样混合后为1份混合样本(总重量40g)。将混合样本分别置于搅拌器搅碎后,按1g肌肉:20mL人工消化液[0.7%盐酸-1%胃蛋白酶(活性1∶3 000)-0.85%NaCl置于42℃消化4h~5h,肌肉消化完全后收集于锥形量杯中室温沉淀30min,弃去上清,镜检并计数底部液体中的旋毛虫幼虫[6]。若在某份混合样本中发现幼虫,则按编号对8份肉样逐个消化检查。
1.3 统计学分析 采用预测统计分析软件包PASW Statistics 18.0对数据进行描述性分析,应用卡方检验(Chi-square test)进行率之间的比较,检验水准为α=0.05。
本次调查在河南省商丘某县采集的273份猪肉样本,全部来自农村的圈养猪。对273份肌肉样本应用压片镜检法检验时未发现旋毛虫幼虫;应用人工消化法检验时,旋毛虫幼虫的检出率为 3.30%(9/273),消化法的检出率明显高于镜检法(χ2=7.230,P<0.05)。消化法对3个采样点肉样的旋毛虫检出率分别为7.96%(9/113)、0(0/73)和0(0/87);消化法检出的阳性肉样每g肌肉虫荷(larvae per gram,lpg)为0.10~ 1.58,平均 lpg 为 0.48,见表1。
表1 2010-2011年河南商丘某县猪膈肌的旋毛虫感染度
本次调查结果表明,河南省商丘地区存在有猪的旋毛虫自然感染,感染率为3.3%,但感染度较低,平均lpg为0.48,已低于旋毛虫对公共卫生构成威胁的最低水平(lpg≥1)[7]。另据河南省人群旋毛虫病血清学流行病学调查结果,河南省东部地区人体血清旋毛虫抗体阳性率为2.5%~4.9%[3,8],但在河南东部地区(商丘、开封、周口等)一直未发现旋毛虫病患者,也未发生旋毛虫病的暴发,可能与当地猪的旋毛虫感染度低有关。河南省东部为平原地区,农民饲养生猪均为圈养,加上颗粒食料的应用与饲养周期的缩短,可能是当地猪旋毛虫感染度低的主要原因[9]。
肌肉压片镜检法是我国国家标准(GB/T18642-2000)中规定的猪肉中旋毛虫的检验方法[10],该方法是检验肉类中旋毛虫的经典方法,由于操作简便,在国内生猪屠宰场与肉类检疫机构普遍应用,但其敏感性较低,尤其是在感染度低时常有漏检现象发生,如每克猪肉含有6条或6条以下幼虫时漏检率达52%[11]。本研究结果表明,每克猪肉含0.10~
1.58条幼虫时镜检法的漏检率达100%(9/9),其中2份肉样的lpg(1.06与1.58)已高于旋毛虫对公共卫生构成威胁的最低水平,因此,镜检法阴性的猪肉亦有可能导致旋毛虫病的暴发。人工消化法是国际旋毛虫病委员会(International Commission on Trichinellosis,ICT)推荐使用的肉类旋毛虫检验方法,特别是对消化法进行改良后,每克肉样含0.10~1条幼虫时消化法的敏感性也可达100%[6,12]。因此,在旋毛虫病低度流行区,应推广使用消化法对肉类进行旋毛虫检验,以保证肉类及肉类食品的安全。
[1]Wang ZQ,Cui J,Shen LJ.The epidemiology of animal trichinellosis in China[J].Vet J,2007,173(2):391-398.
[2]王中全,崔晶.我国旋毛虫病的流行趋势[J].国际医学寄生虫病杂志,2009,36(5):343-347.
[3]许汴利,杜尊伟,赵旭东,等.我国部分省市旋毛虫病的血清学调查研究[J].中国人兽共患病学报,2009,25(10):1021-1024.
[4]Wang ZQ,Cui J.The epidemiology of human trichinellosis in China during 1964-1999[J].Parasite,2001,8(2 Suppl):S63-S66.
[5]Wang ZQ,Cui J,Xu BL.The epidemiology of human trichinellosis in China during 2000-2003[J].Acta T rop,2006,97(3):247-251
[6]Li F,Cui J,Wang ZQ,et al.Sensitivity and optimization of artificial digestion in the inspection of meat forTrichinella spiralis[J].Foodborne Pathog Dis,2010,7(8):879-885.
[7]Gamble HR,Bessonov AS,Cuperlovic K,et al.International Commission on T richinellosis:recommendations on methods for the control ofTrichinellain domestic and wild animals intended for human consumption[J].Vet Parasitol,2000,93(3-4):393-408.
[8]Cui J,Wang ZQ,Zhu W,et al.Seroepidemiologicl study ofTrichinella spiralisinfection in central China.Helminthologia,1999,36(4):235-239.
[9]Cui J,Wang ZQ.An epidemiological overview of swine trichinellosis in China[J].Vet J,2011(3).
[10]中华人民共和国国家标准-猪旋毛虫病诊断技术(GB/T18642-2000)[S].2000.
[11]Beck R,Mihaljevic Z,Marinculic A.Comparison of trichinelloscopy with a digestion method for the detection ofTrichinellalarvae in muscle tissue from naturally infected pigs with low level infections[J].Vet Parasitol,2005,132(122):97-100.
[12]李峰,王莉,王中全,等.人工消化法对肉类中旋毛虫检疫敏感性的研究[J].热带病与寄生虫学,2008,6(3):133-135.