促泌素在肾上腺原发肿瘤中的表达及其临床意义

王文军 张帆陈玉娟 梅晶晶

(皖南医学院弋矶山医院病理科,安徽芜湖 241000)

促泌素在肾上腺原发肿瘤中的表达及其临床意义

王文军 张帆＊陈玉娟 梅晶晶

(皖南医学院弋矶山医院病理科,安徽芜湖 241000)

目的 比较促泌素(secretagogin,SCGN)与传统神经内分泌标记物在肾上腺原发肿瘤中的表达差异。方法 收集肾上腺原发肿瘤手术标本共37例,其中包括18例皮质腺瘤、3例皮质腺癌、16例嗜铬细胞瘤。同时选取5例正常肾上腺组织,5例肾透明细胞癌作为对照。所有标本均使用SCGN、PGP9.5、CD56、NSE、Syn及CgA进行免疫组织化学SP法染色。结果 SCGN在全部5例正常肾上腺皮质均有表达,而在髓质不表达(P<0.01),其中在皮质的表达明显高于 PGP9.5和CgA的表达(P均<0.01);全部18例皮质腺瘤均表达 SCGN,且明显高于 NSE(P<0.05)、PGP9.5和 CgA(P均 <0.01);肾上腺嗜铬细胞瘤中SCGN的阳性表达率仅为18.8%(3/16),明显低于其它标记物(P均<0.01)。SCGN在皮质腺瘤(18/18)中的表达明显高于嗜铬细胞瘤(3/16)(P<0.01),而PGP9.5和CgA在嗜铬细胞瘤(15/16,16/16)中的表达明显高于皮质腺瘤(3/18,1/18)(P均<0.01);CD56、NSE和Syn在皮质腺瘤、皮质腺癌和嗜铬细胞瘤中均有高表达,但两两组间比较均无统计学差异(P均>0.05)。SCGN在全部5例肾透明细胞癌中均不表达。结论 SCGN对肾上腺皮质腺瘤有较高敏感性,其与嗜铬细胞瘤的标记物CgA和PGP9.5联合可在两者的诊断和鉴别诊断中发挥重要作用。

促泌素; 肾上腺皮质腺瘤; 嗜铬细胞瘤; 免疫组织化学

促泌素(secretagogin,SCGN)首先由 Wagner 等[1、2]克隆,目前作为一种新型的神经内分泌标记物已受到重视。肾上腺原发肿瘤主要包括皮质腺瘤(Adrenal cortical adenoma)和嗜铬细胞瘤(Pheochromocytoma),两者有时很难鉴别,而免疫组织化学标记对其鉴别诊断很有帮助。SCGN能否在肾上腺皮髓质肿瘤中表达,且是否具有鉴别诊断意义?本实验通过对比研究,探讨SCGN在肾上腺原发肿瘤临床病理诊断中的应用价值。

材料和方法

1.材料

收集2002年1月至2008年1月间皖南医学院弋矶山医院病理科存档石蜡包埋组织,均为手术切除标本。实验组共37例肾上腺原发肿瘤标本,包括18例皮质腺瘤、3例皮质腺癌和16例嗜铬细胞瘤。另外选取正常肾上腺、肾透明细胞癌各5例作为对照组。所有病例均由两位高年资病理医师根据WHO2004年新分类标准结合免疫组织化学结果进行病理诊断,术前均未行任何治疗。

2.免疫组织化学染色

上述存档蜡块组织均为4%甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋,4μm厚切片。分别进行促泌素(secretagogin,SCGN)、蛋白基因产物 9.5(protein gene production 9.5,PGP9.5)、CD56 即神经细胞粘附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)、神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolose,NSE)、突触素(synaptophysin,Syn)及嗜铬蛋白 A(chromogranin A,CgA)免疫组织化学SP两步法染色,DAB显色。上述抗体相关信息详见表1,其中SCGN由浙江大学医学院来茂德教授惠赠。所用抗体均采用p H6.0的柠檬酸钠缓冲液高压修复。以PBS代替一抗作空白对照,以已知阳性病例作阳性对照。操作严格按产品说明书进行。

表1 抗体名称、性质、克隆号、来源、工作浓度及阳性部位Table1 The characteristics of all markers

3 结果判断免疫组织化学染色细胞膜、胞质或胞核出现清晰淡黄色至棕褐色颗粒者为阳性表达细胞。结合染色强度和阳性细胞数进行分级[3]。两人双盲法分别观察切片,每人选择10个具有代表性的高倍视野(×400倍),评分后取平均值。染色强度评分标准:不着色为0分,淡黄色为1分,黄褐色为2分,棕褐色为3分。阳性细胞所占整张切片比例评分标准:阳性细胞数<5%为0分,5%-25%为 1分,26%-50%为 2分,51%-75%为 3分,>75%为 4分。两种评分相乘,0分为阴性,≥1分为阳性;阳性率按阳性例数除以总例数计算。若两人观察结果相差3分则重新评定。

4.统计学分析

应用SPSS13.0统计软件对实验数据进行处理,两两间比较采用χ2Fisher精确检验,P<0.05差异有统计学意义。

结 果

1.SCGN等标记在正常肾上腺组织中的表达所有5例正常肾上腺皮质均表达 SCGN(图 1)和CD56,均不表达 PGP9.5和CgA,后两者与 SCGN比较均有显著统计学差异(P<0.01)。SCGN在正常肾上腺髓质均不表达,而 CgA(图 2)和 PGP9.5在全部髓质均为弥漫阳性表达,各标记阳性率均明显高于SCGN(P<0.01)。SCGN仅在皮质表达,而在髓质不表达(P<0.01);相反 PGP9.5和 CgA 仅在髓质表达,而在皮质不表达(P均<0.01);CD56、NSE和Syn在皮质和髓质均可表达,但在两部位间的表达率均无统计学差异(P>0.05)(见表2)。

2 SCGN等标记在肾上腺皮质肿瘤中的表达SCGN(图3)和Syn在肾上腺皮质腺瘤中均全部表达,分别与 PGP9.5阳性率16.7%(3/18)和 CgA 阳性率5.6%(1/18)比较均有显著统计学差异(P<0.01)。皮质腺癌中各标记均有不同程度表达,与SCGN(图4)比较均无统计学差异(P>0.05)(见表3)。

表2 SCGN等标记在正常肾上腺皮质、髓质中的表达Table 2 Expression of SCGN and the other markers in normal adrenal cortex and medulla

3.SCGN等标记在肾上腺嗜铬细胞瘤中的表达

SCGN在肾上腺嗜铬细胞瘤(图5)中的阳性率仅为18.8%(3/16)且呈灶性弱阳性,相反 CgA(图6)和Syn均全部表达,余标记阳性率也明显高于SCGN,均有显著统计学差异(P<0.01)(见表3)。

4.SCGN等标记在肾上腺皮髓质肿瘤间的表达差异

SCGN在皮质腺瘤中的表达明显高于嗜铬细胞瘤(P<0.01),而 PGP9.5和 CgA 在嗜铬细胞瘤中的表达均明显高于皮质腺瘤(P<0.01)。所有标记在皮质腺瘤和皮质腺癌之间的表达均无统计学差异(P>0.05)。除CgA在嗜铬细胞瘤表达高于皮质腺癌有统计学差异(P<0.05)外,余标记在嗜铬细胞瘤与皮质腺癌之间的表达均无统计学差异(P>0.05)。CD56、NSE和Syn在三组肿瘤中均有表达,但两两组间比较均无统计学差异(P>0.05)(见表3)。

5.SCGN等标记在肾透明细胞癌中的表达

SCGN等所有标记在5例肾透明细胞癌中均无表达(表中未列出)。

表3 SCGN等标记在原发性肾上腺肿瘤中的表达Table 3 Expression of SCGN and the other markers in primary adrenal tumors

讨 论

SCGN基因定位于6p22.1-22.3,包含六个并行的EF手型钙结合结构域,属于钙结合蛋白感受器家族。近年的研究显示SCGN在正常神经内分泌细胞和相应肿瘤中均有表达,为一种新型的神经内分泌标记物[4-7]。目前仅有一种称为突触小体相关蛋白-25(25kDa synaptosome-associated protein,SNAP-25)的SCGN结合蛋白被鉴定出来。SCGN的作用机制一方面与其较低的Ca2+亲和力以及在Ca2+诱导下的构型改变有关,另一方面其与SNAP-25结合后可以通过Ca2+信号引发神经内分泌细胞胞吐作用,参与此类细胞的生长和分化[8]。

传统观点认为肾上腺皮质起源于中胚层,不属于神经内分泌系统,而髓质起源于外胚层具有神经内分泌功能。但资料显示肾上腺皮质亦有一定的神经内分泌分化[9],且有临床资料作证[10]。这对传统肾上腺皮质发生学提出挑战,但到目前为止,包括正常及异常肾上腺皮质与神经内分泌分化的关系仍不肯定。本实验显示SCGN仅在正常肾上腺皮质表达,而在髓质不表达,其表达区域与 PGP9.5和CgA正好相反,以上三种标记在皮质与髓质间的差异表达均有显著统计学意义(P<0.01);CD56、NSE和Syn在正常肾上腺皮质和髓质均有不同程度的表达,但三者在皮质与髓质间的表达均无统计学差异(P>0.05)。一方面证实正常肾上腺皮质可伴有神经内分泌分化,同时提示SCGN可作为正常肾上腺皮质特异的免疫组化标记物。

嗜铬细胞瘤属神经内分泌肿瘤是不争的事实,可表达 CgA、Syn、NSE、PGP9.5 和 CD56,其中 CgA是特异性和敏感性兼优的免疫组化标记物[11-14],本研究也充分证实了这一点。本实验尚显示皮质腺瘤和皮质腺癌也可表达 Syn、NSE和 CD56,同时PGP9.5和CgA在个别标本呈小灶性弱阳性,与相关研究结果相似[15-18],证实肾上腺皮质肿瘤也可伴有神经内分泌分化[19-21]。相关实验证实神经内分泌标记物SCGNmRNA及其蛋白在肾上腺皮质腺瘤和嗜铬细胞瘤中均有不同程度表达[2、6、22]。本实验SCGN在18例肾上腺皮质腺瘤中均全部表达,在3例皮质腺癌中有2例表达,而在16例肾上腺嗜铬细胞瘤中仅有3例且均为小灶性弱表达,提示SCGN对皮质肿瘤有较高敏感性和特异性,其与诊断嗜铬细胞瘤的金标准CgA联合可在两者的鉴别中发挥重要作用。

肾上腺和肾脏肿瘤常因相互累犯,造成原发部位和肿瘤类型不能通过普通病理形态学特点进行确诊,而免疫组织化学标记可有助于进一步明确诊断。Kim等[23]研究显示SCGN在肾透明细胞癌中升高,来茂德等[6]免疫组织化学法显示SCGN在3/5例肾透明细胞癌中阳性表达,而本实验SCGN等标记在全部5例肾透明细胞癌中均无表达,故SCGN在肾透明细胞癌和肾上腺肿瘤中是否具有鉴别诊断价值有待进一步大样本的研究。

总之,本研究证实包括SCGN在内的神经内分泌标记物均可用于肾上腺原发肿瘤的临床病理诊断。尤其是SCGN、PGP9.5和CgA可主要用于肾上腺皮质腺瘤和嗜铬细胞瘤的鉴别诊断,即若SCGN阳性、PGP9.5和 CgA阴性,多考虑为皮质腺瘤;若 SCGN阴性,PGP9.5和 CgA 阳性,则考虑为嗜铬细胞瘤。限于CD56、NSE和Syn在两者中均高表达,故鉴别意义不大。而SCGN在肾上腺正常皮髓质及其原发肿瘤中表达差异的机制值得进一步探讨。

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图 版 说 明

图1 SCGN在正常肾上腺皮质表达,而在髓质不表达。SP两步法 ×40

图2 CgA在正常肾上腺皮质不表达,而在髓质强阳性表达。SP两步法 ×40

图3 SCGN在肾上腺皮质腺瘤中弥漫强阳性表达。SP两步法 ×100

图4 SCGN在肾上腺皮质腺癌中弥漫强阳性表达。SP两步法 ×100

图5 SCGN在肾上腺嗜铬细胞瘤中不表达,而在其残留的皮质表达。SP两步法 ×100

图6 CgA在肾上腺嗜铬细胞瘤中强阳性表达。SP两步法×100

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 The positive expression of SCGN protein in normal adrenal cortex,but not in medulla. SP method ×40

Fig.2 The positive expression of CgA protein in normal adrenal medulla,but not in cortex.SP method ×40

Fig.3 The diffusely positive expression of SCGN protein in adrenal cortical adenoma.SP method ×100

Fig.4 The diffusely positive expression of SCGN protein in adrenal cortical adenocarcinoma. SP method ×100

Fig.5 The negative expression of SCGN protein in adrenal pheochromocytoma,but positive among normal adrenal cortex. SP method ×100

Fig.6 The strongly positive expression of CgA protein in adrenal pheochromocytoma. SP method ×100

Expression and significance of secretagogin in primary adrenal tumors

Wang Wenjun,Zhang Fan＊,Chen Yujuan,Mei Jingjing

(Department ofPathology,Yijishan Hospital of Wannan Medical College,W uhu241000,China)

Objective To investigate the expression of secretagogin(SCGN)and traditional neuroendocrine markers and to explore the significance of SCGN in primary adrenal tumors.Methods Thirty-seven samples of primary adrenal tumors were collected,including 18 cases of adrenal cortical adenoma,3 adrenal cortical adenocarcinoma and 16 pheochromocytoma.At the same time,5 cases of normal adrenal and 5 cases of clear cell carcinoma in kidney were selected as controls.All specimens were detected by immunohistochemistry. Using the specific antibody for SCGN and 5 conventional neuroendocrine markers PGP9.5,CD56,NSE,Syn and CgA.Results SCGN staining was positive in all 5 cases of normal adrenal cortex,but not in medulla(P<0.01),more frequently than PGP9.5 and CgA(P<0.01). SCGN showed positive staining in all 18 cases of adrenal cortical adenoma,which was obviously higher than those of NSE(P<0.05),PGP9.5 and CgA(P<0.01). The positive rate of SCGN in pheochromocytoma was only 18.8%(3/16)less than those of the other markers(P<0.01). The positive rate of SCGN was significantly different between adrenal cortical adenoma(18/18)and pheochromocytoma(3/16)(P<0.01).Also,significant differences were seen in the positive rates of PGP9.5 and CgA between pheochromocytoma(15/16,16/16)and adrenal cortical adenoma(3/18,1/18)(P<0.01).Although the positive rates of CD56,NSE and Syn were higher in all primary adrenal tumors,there was no significant difference in pairwise comparison(P>0.05). All 5 cases of clear cell carcinoma in kidney did not express SCGN.Conclusion SCGN is a novel marker that may be useful in the diagnosis of adrenal cortical adenoma.A combination of SCGN,PGP9.5 and CgA could serve as diagnostic markers for distinguishing adrenal cortical adenoma from pheochromocytoma.

Secretagogin; Adrenal cortical adenoma; Pheochromocytoma; Immunohistochemistry

R736.6

A

10.3870/zgzzhx.2011.02.014

2010-10-10

2011-02-27

王文军,男(1976年),汉族,主治医师。

＊通讯作者(To whom correspondence should be addressed)