两种副溶血性弧菌显色培养基实际应用效果比较

邓冬云 陈 萍

（广东省佛山市禅城区疾病预防控制中心，广东 佛山 528031）

两种副溶血性弧菌显色培养基实际应用效果比较

邓冬云 陈 萍

（广东省佛山市禅城区疾病预防控制中心，广东 佛山 528031）

目的比较HKC vibrio副溶血性弧菌显色培养基和CHROMagar vibrio副溶血性弧菌显色培养基的实际应用效果。方法两两配对按照国标(GB/T4789.7-2008)进行检验。结果在HKC和CHROMagar两种显色培养基上，副溶血性弧菌（简称VP）均呈现特殊的紫色菌落；通过对112份水产食品检测，HKC 检出VP阳性率为21.43%，CHROMagar检出VP阳性率为23.21%，二者无显著性差异；对于弧菌显色培养基而言，两种培养基假阳性率一致；结论HKM弧菌显色培养基和CHROMagar vibrio弧菌显色培养基在水产品的实际检测中具有相同的检测效果。

弧菌显色培养基；实际应用；比较

副溶血性弧菌（Vibrioparahaemolyticus），又称嗜盐菌，属于弧菌科，弧菌属，是一种重要的食源性致病菌，广泛存在于世界各国的沿海地区。由该菌引起的中毒在细菌性食物中毒中占的比例很高，严重威胁着人类健康[1-3]。为有效控制副溶血性弧菌污染发生和扩散，准确及时的检测手段是关键。目前副溶血性弧菌检测仍以传统方法为主，在检验中选择性平板是分离菌落最重要的培养基。柠檬酸钠-硫代硫酸钠-氯化钠-蔗糖琼脂（TCBS）是目前国内外最常用的分离平板，基于副溶血性弧菌不发酵蔗糖的特点并结合酸碱指示剂对其进行鉴定，副溶血性弧菌在这种平板上呈现绿色菌落。但是TCBS平板存在一定缺陷，当有发酵蔗糖产酸、在TCBS上产生黄色菌落的一类弧菌存在时，由于颜色扩散，副溶血性弧菌往往不容易辨认；而且，TCBS不能有效的区分副溶血性弧菌和与其生化特点相似的创伤弧菌、拟态弧菌等。

利用显色培养基鉴定微生物是近年来开发的新型快速检测技术，通过在分离培养基中加人细菌特异性酶的显色底物，直接根据菌落颜色就可以对菌种做出初步鉴定，减少颜色扩散等其他方面的干扰因素，大大提高了检测效率。目前HKM和CHROMagar弧菌显色培养基为市场上较为常见的产品。

本实验室将HKM和CHROMagar弧菌显色培养基就实际应用效果进行了比较研究，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 培养基及试剂

法国科玛嘉弧菌显色培养基CHROMagar vibrio购自郑州博赛生物科技有限公司，HKC vibrio、3.5%NaCL碱性蛋白胨水、3%NaCL胰蛋白胨大豆琼脂、副溶血性弧菌生化鉴定管、法国生物梅里埃API生化试剂条等购于广东环凯微生物科技有限公司。

1.2 主要仪器设备

生物安全柜、超净工作台、电热恒温培养箱、全自动高压灭菌锅、电子天平、显微镜、冰箱、接种环、培养皿、三角瓶、试管、移液管、涂布棒、剪刀。

1.3 样品

从肉菜市场采集鱼、虾、蟹、贝类等共112份。

1.4 检验方法

鱼类和头足类动物取表面组织、肠或腮；贝壳取全部内容物，包括肉和体液；甲壳类取整个动物，或者动物的中心部分，包括肠和腮。

以无菌操作取样品25g，加入225mL 3.5%NaCL碱性蛋白胨水，36℃培养18h后，分别取1环增菌液划线接种HKC vibrio和Chromagar vibrio平板，36℃培养18～24h，观察。挑取可疑菌落，接种于3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板，36℃进行纯培养18～24h，做氧化酶试验、革兰氏染色镜检、转种3%氯化钠三糖铁琼脂并做嗜盐性试验进行初步鉴定，疑似菌落采用API20E生化鉴定试剂盒，结合传统生化方法进行鉴定后报告结果。

2 结 果

2.1 两种培养基弧菌菌生长状况比较

在CHROMagar弧菌显色平板上，可疑副溶血性弧菌菌落呈圆形、半透明、表面光滑的粉紫色，直径2～3mm。在HKM弧菌显色平板上，疑似副溶血性弧菌与在CHROMagar平板上的菌落形态相似，只是疑似菌落的颜色在HKM vibrio平板上比CHROMagar vibrio略为偏紫。

2.2 两种培养基副溶血性弧菌阳性率比较

两种培养基对样品中副溶血性弧菌阳性率见表1。

表1 两种培养基对样品中副溶血性弧菌阳性率

本次实验共检测水产品112份，CHROMagar弧菌显色培养基检出副溶血性弧菌26份，阳性率为23.21%；HKM弧菌显色培养基检出副溶血性弧菌24份，阳性率为21.43%。按配对试验结果处理，经统计学分析，二者无显著性差异（χ2=0.167，P＞0.05）。

2.3 两种培养基出现针对可疑菌落而言的假阳性情况比较

在应用CHROMagar弧菌显色培养基和HKM弧菌显色培养基对112份样品的检验中，在显色培养基上出现了疑似菌落的样品而最终均鉴定为副溶血性弧菌的，CHROMagar弧菌显色培养基是疑似菌落为27份，最终鉴定阳性份数为26份，假阳性份数1份；HKM弧菌显色培养基是疑似菌落为25份，最终鉴定阳性份数为24份，假阳性份数1份。可见两种培养基检验结果中，对于弧菌显色培养基的疑似阳性而言，其假阳性率一致。

3 讨 论

显色培养基法的原理是使用适当的显色底物，在细菌特异性酶的作用下，发色基团游离并附着于菌落上，使菌落显示一定的颜色。酶的特异性是影响显色培养基的质量关键，好的显色培养基应菌落颜色易识别、不同种微生物差别较大以及较稳定等，显色培养基检测的实用性还与样本中细菌的种类和数量有关，标本中细菌的种类繁杂，非目的菌数量庞大往往会影响目的菌的检出，所以在显色培养基中加入一些特殊的抑菌剂，可以抑制样本中杂菌的生长而不影响目标菌的生长，从而提高检出率。鉴于显色培养基具有快速、灵敏、高效等诸多优点，目前许多国家都在致力于显色培养基的开发，并逐步将之引入到各种国际和国家检验标准中，其作为一种新的微生物快速检测技术已得到了广泛的认可。在GB/T4789.7-2008中，CHROMagar弧菌显色培养基已经被增加为选择性平板之一，在本标准中解释道，如果有其他等效产品具有相同的效果，则可以使用这些等效产品。

本研究中，在HKM弧菌显色培养基和CHROMagar弧菌显色培养基平板上，副溶血性弧菌均呈现特殊的紫色菌落，其他弧菌呈现蓝色或无色菌落；从表1可以看出，对于112份实际样品，HKM弧菌显色培养基和CHROMagar弧菌显色培养基的检出水平一致；对于弧菌显色培养基的疑似阳性而言，其假阳性率一致。

试验中还发现，有部分样品分离在HKCvibrio和Chromagarvibifo两种显色培养基后，都生长了较多的白色菌落，据报道，多为溶藻弧菌，在一定程度上影响了副溶血性弧菌的检出。分析可能是由营养竞争因素造成的，因此，尤其是对多种菌污染的海产品样品，要特别注意溶藻弧菌的干扰作用，这也是在实际样品检测副溶血性弧菌在实验中，需研究和克服的干扰因素之一。

根据GB/T4789.7-2008培养基使用原则，可以使用CHROMagar弧菌显色培养基或HKM弧菌显色培养基作为副溶血性弧菌检验的分离培养基。

[1] 邓至爱,李孝权,张健,等.广州市海产品副溶血性弧菌污染状况调查及PFGE分型研究[J].中国卫生检验杂志,2009,19(5):1130-1132.

[2] 张淑红,吴清平,张菊梅,等.副溶血性弧菌显色培养基检测效果初步评价[J].微生物学通报,2008,35(1):145-148.

[3] GB/T4789.7-2008.食品卫生微生物学检验-副溶血性弧菌检验[S].北京:中国标准出版社,2008:1-2.

R378.3

B

1671-8194（2011）35-0045-02