转录抑制基因TBX2在甲状腺癌中的表达及其临床病理意义

宋晓环 李 伟 孙冬梅 甘 卉 王建伟 (长春医学高等专科学校，吉林 长春 3003)

甲状腺是人体重要的内分泌腺，在调节机体新陈代谢方面具有非常重要的作用。甲状腺癌虽只占甲状腺肿瘤的5%，但却居内分泌及头颈部恶性肿瘤的第一位，是近年来发病率增长最快的恶性肿瘤之一，已严重危害人类身体健康。因此对甲状腺癌进行有效的预防和治疗已成为当务之急，尤其是早期能否做出正确的诊断和鉴别诊断将直接影响随后的临床治疗。因此迫切需要寻找甲状腺癌特异性分子标志物以便作为能够早期正确诊断、指导临床治疗，或判断甲状腺癌预后的可靠指标。TBX2(T-box gene2)是T-BOX基因家族成员之一，属于发育调控相关转录因子基因。研究发现TBX2在多种肿瘤组织中表达上调，可视为新的肿瘤分子标志物。但TBX2在甲状腺癌组织中的表达情况，尚未见相关研究报道。本研究采用免疫组织化学技术检测甲状腺癌组织中TBX2的表达，并探讨其表达的临床意义，为临床甲状腺癌的诊断及治疗提供指导与靶点。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选取吉林大学第一临床医院2007～2009年甲状腺肿瘤手术切除标本80例，另选正常甲状腺组织标本9例。所有标本整理标记好后进行石蜡包埋固定组织切片制作，用于免疫组织化学染色。甲状腺肿瘤石蜡包埋组织切片经HE染色后，由两位临床病理专家进行双盲阅片区分组织类型，结果为甲状腺腺瘤13例，甲状腺乳头状癌(PTC)28例，甲状腺滤泡癌(FTC)23例，甲状腺髓样癌(MTC)14例，甲状腺未分化癌(UTC)2例。

1.2 免疫组织化学染色 实验用组织经常规甲醛固定、石蜡包埋后，切成4 μm厚切片。兔抗TBX2多克隆抗体购于北京博奥森生物技术有限公司，SP免疫组化试剂盒购于北京中山生物技术有限公司。采用SP染色方法，具体步骤严格按试剂盒上的说明进行。DAB发色。以PBS缓冲液代替一抗做阴性对照，用已知的TBX2阳性的乳腺癌病理切片作阳性对照。

1.3 结果判定 TBX2阳性表达定位于细胞质及细胞核。以细胞质和/或细胞核呈棕黄色为阳性表达。400倍视野下选取3～5个阳性视野计数，综合染色强度和阳性率进行评分:染色强度按下列标准评分:阴性0分，染色弱但明显强于阴性对照者为1分，染色清晰者为2分;染色强者为3分;阳性率按下列标准评分:无阳性细胞或阳性率＜10%计0分，11～30%计1分，31～60%计2分;＞60%计3分。上述两种评分相加＜3分为阴性(－)，≥3分为阳性〔1〕:其中3～4分为弱阳性(+～)，5～6分为强阳性()。

1.4 统计学处理 应用SPSS11.5统计软件进行χ2检验。

2 结果

2.1 TBX2在正常甲状腺、甲状腺腺瘤及甲状腺癌组织中的表达 TBX2蛋白在正常甲状腺组织中阳性表达定位于细胞质及细胞核，而在甲状腺肿瘤中阳性表达定位于细胞质。见表1、图1。

2.2 TBX2在不同分化程度及不同类型甲状腺癌组织中的表达 TBX2在不同分化程度及不同组织学分型甲状腺癌组织中的表达有统计学差异(P＜0.05)。见表2。

表1 TBX2在各种甲状腺组织中的表达

表2 TBX2在不同分化程度及类型甲状腺癌组织中的表达

图1 TBX2在各种甲状腺组织中的表达(SP，×400)

3 讨论

TBX2基因是T-BOX基因家族成员之一，通过其特有的TBOX区域参与多种生物的发育调控，属于发育调控相关转录因子基因，且是T-BOX基因家族成员中仅有的两个转录抑制基因之一〔2，3〕。人 TBX2基因位于 17号染色体长臂 2区 3带(17q23)。其编码蛋白TBX2至少有两个结构域，一个为与靶基因DNA特异性结合域(T结构域)，另一为结合转录抑制物或激活物结构域(C末端结构域，功能域)，主要通过功能域发挥转录抑制作用〔4〕。TBX2在胚胎发育的各种组织和器官中广泛表达并起重要的调控作用。研究发现，TBX2在多种肿瘤中高表达，并与细胞凋亡、细胞恶性转化以及肿瘤细胞增殖等有关〔5〕。

本研究发现TBX2在9例正常甲状腺组织、13例甲状腺腺瘤组织及67例甲状腺癌组织中均有阳性表达，阳性率分别为22.2%、53.8%及88.1%，与陈平等〔6〕在检测13例正常胰腺组织和49例胰腺癌组织中TBX2表达的阳性率(17.7%、69.4%)相比偏高，与刘长民等〔7〕检测TBX2在20例癌旁正常组织、60例大肠癌组织中表达的阳性率(45.0%，70.0%)相接近，这可能是由于TBX2在不同组织中的特异性不同所致。TBX2在甲状腺癌组织中的阳性表达与其在正常甲状腺及在甲状腺腺瘤组织中的阳性表达相比较，差异有显著性(均P＜0.05);与陈平等、刘长民等检测的TBX2表达结果性质一致，提示TBX2同样也参与了甲状腺癌的发生发展过程。

TBX2在不同分化程度及不同组织学类型甲状腺癌组织中均显著高表达，阳性率比较，差异无显著性。TBX2在高中分化及低分化甲状腺癌组织中的阳性表达强度〔即强阳性()与弱阳性(+～)〕比较，差异有显著性;因未分化癌标本例数太少而无法进行统计学比较，比较乳头状癌、滤泡癌及髓样癌组织中TBX2阳性表达强度，差异有显著性。说明TBX2的阳性表达强度与甲状腺癌组织的分化程度及组织学分型有关:随甲状腺癌组织分化程度的降低，恶性程度的增加，TBX2阳性表达强度逐渐增强。陈平等〔6〕在胰腺癌组织中检测TBX2阳性表达结果也显示TBX2阳性表达与肿瘤组织的分化程度相关。

综上所述，本研究认为，TBX2在甲状腺癌的发生、发展中起着重要的作用，TBX2在甲状腺癌组织中阳性表达增强可能是甲状腺癌恶性程度高，增殖迅速的原因之一。检测甲状腺癌中TBX2的表达，可为临床甲状腺癌的诊断、治疗方案的选择及预后评估提供参考指标，同时也为甲状腺癌的治疗提供新靶点，具有重要的临床意义。

1 Kim JJ，Wang J，Bambra C，et al.Expression of cyclooxygenase-1 and-2 in the baboon endometrium during the menstrual cycle and pregnancy〔J〕.Endocrinology，1999;140(6):2672-8.

2 Papaioannou VE.T-box genes in development:From hydra to humans〔J〕.Int Rev Cytol，2001;207:1-70.

3 Wilson V，Conlon FL.The T-BOX family〔J〕.Genome Biol，2002;3(6):1-7.

4 Minguillon C，Logan M.The comparative genomics of T-box genes〔J〕.Brief Funct Genomic Proteomic，2003;2(3):224-33.

5 Vance KW，Carreira S，Brosch G，et al.Tbx2 is overexpressed and plays an important role in maintaining proliferation and suppression of senescence in melanomas〔J〕.Cancer Res，2005;65(6):2260-8.

6 陈 平，田德安，刘 梅，等.Tbx2蛋白在胰腺癌组织和细胞中的表达及其意义〔J〕.临床内科杂志，2007;24(5):341-3.

7 刘长民.大肠癌中TBX-2的表达与P14ARF、E2F因子的相关性及对预后的影响〔D〕.苏州:苏州大学，2009.