猪肺炎支原体对白细胞介素（IL－1β）的影响

刘朋军

（石楼县动物疫病预防控制中心，山西 石楼032500）

因此，研究猪肺炎支原体侵染后机体细胞免疫系统的变化将有助于对猪支原体肺炎致病性的诊断，有助于在现有基础上对药物、疫苗的研制和开发，为临床治疗猪支原体肺炎提供理论依据。白细胞介素（IL－1β）是参与细胞免疫的重要的细胞因子，通过对猪肺炎支原体感染后机体血清中白细胞介素（IL－1β）的测定，可以测定机体细胞免疫的情况，从而进一步诊断猪支原体肺炎。

1 材料与方法

1．1 试验动物

试验用无支原体肺炎长白猪8只，由山西省太谷县振兴养猪场提供的断奶仔猪，体重为6．28～8．54kg，健康状况良好，饲料由实验中心自配。

1．2 主要试剂

JM109型猪肺炎支原体，小鼠重组IL－1β冻干标准品，样品稀释液，生物素标记抗小鼠IL－1β，抗体稀释液，亲和素－过氧化物酶复合物（ABC），ABC稀释液，TMB显色液，TMB终止液等试剂由北京博奥深公司提供。0．01mol·L－1PBS，猪肺炎支原体特异性抗体自制。

在猪60日龄时随机分成2组，每组4头，分别是空白对照组、攻毒组，每头猪都注射5头份。

1．3 试验方法

1．3．1 样本的采集与处理

在攻毒前采集血液，不作抗凝处理，以备血清学检测用。分别于攻毒后第7d、14d、21d时，腹腔静脉采血，编号，血液不作抗凝处理，2000r·min－1离心10min，将血清装入EP管，置于－20℃冰箱保存备用。

1．3．2 检测指标及方法

1．3．2．1 攻毒前血清中猪肺炎支原体的检测

用定性玻片凝集试验进行检测。取猪肺炎支原体特异性抗体和攻毒前所采血清0．03mL，于载玻片上充分混合，放置3min后判定结果。

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1．3．2．2 血清中IL－1β含量的测定

将 500．0ng·L－1，250．0ng·L－1，以 及125．0ng·L－1，62．5ng·L－1，31．3ng·L－1，15．6ng·L－1，7．8ng·L－1的标准品各0．1mL一次加入一排七孔中，最后一孔只加样品稀释液的作为零孔。将准备好的生物素抗小鼠IL－1β抗体工作液按每孔0．1mL依次加入。37℃反应60 min。

将准备好的ABC工作液按每孔0．1mL依次加入。37℃反应30min。按每孔90μL依次加入已在37℃平衡30min的TMB显色液，37℃避光反应20min。按每孔加入0．1mL依次加入TMB终止液，用酶标仪在450nm测定OD值。

1．4 数据处理

测定结果用spass16．0进行统计分析。

2 结果与分析

2．1 攻毒前血清中猪肺炎支原体的检测结果

攻毒前血清中未发生凝集，说明攻毒前猪体内不含猪肺炎支原体。

2．2 各组猪血清白细胞介素（IL－1β）含量测定结果

统计结果显示，攻毒组在三个时间点血清IL－1β含量都高于对照组，攻毒7d、14d、21d后血清IL－1β含量与对照组血清IL－1β含量相比较，差异显著（P＜0．05）。攻毒组在攻毒14d后血清IL－1β含量高于攻毒7d后血清IL－1β含量，二者差异显著（P＜0．05）。攻毒组在攻毒14d后血清IL－1β含量高于攻毒21d后血清IL－1β含量，二者差异显著（P＜0．05）（见表1）。

表1 各组猪血清IL－1β含量测定值／ng·L－1Table 1 Contents of IL－1βin serum in pigs／ng·L－1

3 讨论

白细胞介素－1（interleukin－1，IL－1）包括三个氨基酸序列高度同源的蛋白质：IL－1α、IL－1β和IL－1Ra（或IL－1γ）。它是由多种细胞产生、有多方面生物学功能的细胞因子，在调节免疫应答和炎症反应中有重要作用。众多的生物学效应使其在免疫系统中成为一种起中心作用的细胞因子。最近的研究进一步从基因水平上揭示出了IL－1与疾病发生、发展的关系［4］。

Mhp感染的一个特征是大量的免疫粒细胞在肺组织积聚［5］。一些细胞因子，包括IL－1，TNF－α和IL－6，已经在Mhp感染的猪的呼吸道灌洗液中检测到［6，7］。TNF－α和IL－1能刺激几乎所有的炎症反应。由其产生的IL－6是致热原，能诱导急性期反应物的产生。在猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和 Mhp共感染中，IL－1α、IL－1β、IL－8和TNF的增加表明，细胞因子诱导的炎症反应在支原体肺炎中起重要作用［8，9］。白细胞介素1与其特异受体结合后，通过某些调节蛋白作用，激活胞膜上或胞浆内的多种磷脂酶，产生多种信使类物质。此外，近年来还发现白细胞介素1可激活多种蛋白激酶和转录调节因子。不同传导途径的细胞信号与白细胞介素1导致的炎症效应密切相关［10］。

本实验结果说明猪肺炎支原体感染后机体的IL－1β的含量在攻毒后第二周左右达到最大值，攻毒后到第二周之前IL－1β的含量逐渐升高，第二周之后IL－1β的含量逐渐降低。IL－1β是介导细胞免疫的重要因子，随着Mhp感染的加剧而增加含量，从而进一步可预测其他细胞因子的含量也会提高，可预测在猪肺炎支原体侵染机体后，细胞免疫系统激活，与体液免疫、黏膜免疫共同作用，提高机体的抵抗能力。

4 结论

猪肺炎支原体使白细胞介素（IL－1β）的含量显著增强，可以通过检测IL－1β来判断是否患有猪肺炎支原体，从而为快速地检测和诊断猪肺炎支原体提供了理论基础和实验基础。

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