结合珠蛋白遗传多态性与肥胖的关系

刘国栋，李艳波，徐 莹，毛 楠，李 敏

(哈尔滨医科大学附属第一医院内分泌科，哈尔滨 150001)

肥胖症是由于遗传和环境因素的相互作用所造成的代谢紊乱性疾病，有研究认为肥胖是一种慢性全身性轻度炎症状态［1］。Hannerz等［2］的研究指出，结合珠蛋白(haptoglobin，Hp)可能作为肥胖症一种新的标志物。Hp作为一种重要的脂肪细胞因子，在肥胖及与肥胖相关的各种疾病中扮演着重要的角色。本研究旨在于检测肥胖患者血中Hp表型和Hp基因频率的分布，并分析其与肥胖症之间的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选自在哈尔滨医科大学附属第一医院体检中心及门诊进行体检的人群，年龄20～62岁，共180例，均为黑龙江地区居住的汉族人。排除标准:①患有可能影响糖脂代谢的其他内分泌疾病者。②应激、感染，肝、肾功能异常者。③肿瘤、心肌梗死、皮肤病、支气管哮喘等病理状态。④受试前接受过降糖、调脂、减肥治疗者。根据2003年4月卫生部疾病控制司公布的《中国成人超重和肥胖症预防控制指南》，成人体质量指数≥24 kg/m2为超重，体质量指数≥28 kg/m2为肥胖，将试验人群分为两组:正常对照组60例(男性和女性各30例)、肥胖组120例(男性和女性各60例)。正常对照组和肥胖组的年龄分别为(39.85 ±12.11)岁和(38.85±11.48)岁;体质量指数分别为(22.12 ± 1.17)kg/m2和(28.10 ±1.37)kg/m2;腰围分别为(78.26 ±6.24)cm和(91.71 ±6.53)cm。

1.2 实验室检查 所有受试者禁食10 h后，第2天清晨抽取外周静脉血标本5 mL静置30 min，然后以每3000 r/min离心 15 min，吸取血清于 1.5 mL Eppendorf管中，标记后置于－80℃冰箱内保存备用。

1.3 试验方法

1.3.1 样本的制备 取外周静脉血，自然凝血后取血清，在－70℃ 低温下保存备用。

1.3.2 10%(100 g/L)血红蛋白的制备 移取新鲜抗凝血液，离心后去血浆，以10倍体积的生理盐水洗涤红细胞3～4次，最后一次 3000 r/min离心20 min，尽量移去盐水成分，然后以等体积蒸馏水及0.5倍体积的四氯化碳混合，剧烈振荡5 min后，离心20 min(2500 r/min)，吸取上层血红蛋白溶液，测定其浓度，并精确稀释成100 g/L，－20℃ 保存。

1.3.3 样品的制备 取待检血清100 μL，加入10%血红蛋白5 μL，10 min后加入20μL凝胶上样缓冲液混匀备用。

1.3.4 凝胶的制备 积层胶:5%聚丙烯酰胺凝胶，分离胶:9%聚丙烯酰胺凝胶。

1.3.5 上样及电泳 将5 μL样品加样于凝胶梳孔60 V，10 mA电泳40 min，然后换90 V，10 mA 电泳12 h，电泳槽缓冲液为pH 8.3的Tris-Gly缓冲液。电泳结束后，取出胶板用考马斯亮蓝染色液染2 h，然后用蒸馏水漂洗多次，再用脱色液脱色直到蛋白质区条带清晰。

1.4 结果判读 根据Smithies方法，依据带谱的分布情况，判断Hp的分型。游离血红蛋白的相对分子质量小，其迁移率最快，在阳极端出现一条粗带，每个样品均有。阳极端游离血红蛋白带之后，仅有一条粗带者为Hp1-1型。在阴极端有多条带，而阳极端无带者为Hp2-2型。在两者中间多一条带者为Hp2-1型(图1)。

图1 血清Hp电泳分型

1.5 统计学方法 采用SAS 9.1.3统计学软件，两组年龄、体质量指数、腰围的差异比较，采用t检验;两组间基因表型和基因频率的差异比较，采用χ2检验，组间两两比较采用 χ2分割法，检验水准为0.05/3=0.017。

2 结果

正常对照组与肥胖组基因表型分布差异有统计学意义(χ2=7.0214，P=0.0299)(表 1)。肥胖组的Hp2基因频率高于正常对照组(χ2=9.5100，P=0.0020)，差异有统计学意义(表2)。

表1 正常对照组与肥胖组基因表型比较 ［例(%)］

表2 正常对照组与肥胖组基因频率比较 (%)

3 讨论

Hp是血清遗传学的一个重要标志物，Hp的分子结构类似免疫球蛋白，是受遗传支配的多形性蛋白，由两条轻链(α链)和两条重链(β链)组成四聚体，Hp的多态性主要是α链的遗传变异造成α链有α1和α2两种，α1又有α1F和α1S两种遗传变异体，呈共显性遗传，因此可以形成最常见的三种基因型Hp1-1、Hp2-1 和 Hp2-2［3］。由位于16 号染色体长臂上的Hp1和Hp2两个等位基因所决定，具有遗传多态现象。已有研究证实，Hp1基因被认为在许多疾病，如肝炎、肝癌、肝硬化、肺癌、肺气肿、白血病中有较高的疾病遗传易感性［4，5］。但 Hp1基因的作用机制尚不清楚。有研究认为Hp1基因与机体免疫功能有关，对淋巴细胞和巨噬细胞的功能有调节作用，在炎性反应中可能有控制组织损伤的功能。

肥胖个体往往伴有高胰岛素血症和胰岛素抵抗［6］。目前，国外已对Hp基因多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)的关系进行了广泛的研究［7-9］，并取得了众多Hp基因多态性与冠心病发生发展的研究证据，如Hp2-2基因是冠心病发生的促进因素，特别是在糖尿病、阻塞性睡眠呼吸暂停综合征等高危人群中，Hp2-2基因也是冠心病患者转归及预后的不利因素，同时也影响着抗氧化药物预防冠心病的疗效等。而肥胖是冠心病发生的主要危险因素之一，认为Hp表型可能与肥胖症的发生有关，肥胖的发生具有遗传易感性。本研究结果表明，肥胖组Hp2-2基因型高于正常对照组，表明以Hp2-2基因型为主的人群可能对肥胖有遗传易感性。研究结果表明，与正常对照组相比，肥胖组患者Hp2基因频率明显增高，表明Hp2基因肥胖患者中有聚集现象。肥胖症的遗传易感性增加与Hp2基因有某种内在联系，Hp2基因可能在肥胖症的发生中起一定作用。

［1］ Abderrahim-Ferkoune A，Bezy O，Chiellini C，et al.Characterization of the long pentraxin PTX3 as a TNF-induced secreted protein of adipose cells［J］.J Lipid Res，2003，44(5):994-1000.

［2］ Hannerz J，Greitz D，Ericson K.Is there a relationship between obesity and intracranial hypertension［J］.Int J Obes Relat Metab Disord，1995，19(4):240-244.

［3］ Langlois MR，Delanghe JR.Biological and clinical significance of haptoglobin polymorphism in humans［J］.Clin Chem，1996，42(10):1589-1600.

［4］ 赵会全，张贵寅，段玉琴，等.结合珠蛋白的遗传多态性及其与疾病的关系［J］.遗传与疾病，1988，5(2):69.

［5］ 罗佳滨，王维人，吕学冼，等.乙型肝炎群体中结合珠蛋白表型的分布特点［J］.遗传与疾病，1988，5(4):218.

［6］ Alvarez-Blasco F，Botella-Carretero JI，San Millan JL，et al.Prevalence and characteristics of the polycystic ovary syndrome in overweight and obese women［J］.Arch Intern Med，2006，166(19):2081-2086.

［7］ Langlois MR，Delanghe JR.Biological and clinical significance of haptoglobin polymorphism in humans［J］.Clin Chem，1996，42(10):1589-1600.

［8］ Hochberg I，Roguin A，Nikolsky E，et al.Haptoglobin phenotype and coronary artery collaterals in diabetic patients［J］.Atherosclerosis，2002，161(2):441-446.

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