甲状腺乳头状癌患者血液p53基因表达及与淋巴结转移、临床分期的关系

尹凤媛，焦淑贤，迟晓云

(1青岛市市立医院，山东 青岛 266011;2青岛市红十字会中心血站)

甲状腺癌是一种常见的、病因未明的内分泌性恶性肿瘤，其中甲状腺乳头状癌(PTC)占60% ～80%。遗传物质突变是导致肿瘤发生的主要原因［1］，其中抑癌基因p53失活将导致细胞增殖周期失去控制，或同时引起其他肿瘤抑制因子损失及癌基因激活，从而引发肿瘤。2011年3月，我们对118例PTC患者血液p53基因表达情况进行了检测，探讨其在PTC发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 我院近2 a收治的原发性PTC患者118例(PTC组)，男30例、女88例，年龄(36.5±14.1)岁;伴淋巴结转移的甲状腺癌患者38例(转移组)，男 11 例、女 27 例，年龄(40.2 ±13.6)岁。上述两组均经病理组织学与免疫组化检查确诊，其中PTC组临床分期为Ⅰ～Ⅱ期81例、Ⅲ～Ⅳ期37例。对照组为122例健康体检者，男40例，女82例;年龄(33.8±20.2)岁。三组一般资料具有可比性。

1.2 血液p53基因表达检测 三组均抽取空腹静脉血4 ml，EDTA-K2抗凝，-20℃保存待测。①PCR扩增:PCR反应体系为50 μl，p53基因点突变(主要发生在外显子5、6、7、8中)四对引物设计参见国内外文献［2～4］。②单链构象多态分析:取10 μl PCR反应产物，加入等体积95%甲酰胺染料(20 mmol/L EDTA，0.1%溴酚兰)，95 ℃保温7 min后立即置于冰浴中7 min;行8%聚丙烯酰胺凝胶电泳，4℃下电泳3 h、至溴酚兰接近凝胶底部。③硝酸银染色判断结果:通过与对照样品条带比较判断待分析样品p53基因表达情况。

1.3 统计学方法 采用SPSS10.0软件行统计学处理。率的比较行χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

三组血液p53基因表达情况见表1。

表1 三组血液p53基因表达情况比较

3 讨论

p53基因是迄今发现的与人类肿瘤相关性最高的基因，临床对其的认识经历了癌蛋白抗原、癌基因、抑癌基因三个转变。人类p53基因位于17q31，含有11个外显子和10个内含子，其编码的p53蛋白是一条由393个氨基酸组成的控制细胞增殖的核磷酸蛋白，为细胞周期C1期DNA损伤的监控点，在维持细胞正常生长、抑制恶性增殖过程中起重要作用。突变型p53基因编码是一种异常蛋白，其突变好发部位为外显子5～8，能与进入组织的各种病毒蛋白、热休克蛋白结合成稳定的复合物。目前认为，引起肿瘤形成或细胞转化的p53蛋白是p53基因突变的产物，是一种肿瘤促进因子，可消除p53基因的正常功能。Kouvaraki等［5］利用免疫组化法对54例甲状腺癌组织中p53蛋白表达情况，结果显示23例p53蛋白表达阳性(42.6%)，认为p53蛋白过表达可作为PTC独立的生存预后检测指标;另有研究显示，甲状腺癌组织中p53蛋白表达与肿瘤浸润程度及淋巴结转移有关。本研究显示，PTC组和转移组血液p53基因表达阳性率均显著高于对照组，其中转移组显著高于PTC组，PTC组Ⅲ～Ⅳ期者显著高于Ⅰ～Ⅱ期者。提示甲状腺癌患者确实存在p53基因过表达，且其表达水平与临床分期及淋巴结转移存在密切关系。可能机制:p53突变可在转录水平上调控端粒酶逆转录酶基因表达、激活端粒酶，进而促进甲状腺癌发生、发展;突变的p53基因可上调Survivin，使肿瘤细胞在G2/M期停滞而不出现凋亡。

综上所述，p53基因突变可促进PTC的发生和转移;可为PTC的诊治及预后判定提供依据。

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［5］Kouvaraki MA，Shapiro SE，Pettier ND.RET protoancngene:a review and of genotype-phenotype corralationsin hereditary medullary thyroidⅢcer and associated endocrinetumors［J］.Thyroid，2005，15(6):531-544.