川芎嗪对缺血性脑损伤大鼠脑匀浆、血清中TNF-α、IL-10 水平的影响

王维和，赵敬富，张曙光，巩同玉，刘 静

(桓台县人民医院，山东 桓台 256400)

川穹嗪(TMP)具有活血化瘀的作用，其可通过血脑屏障，扩张小动脉、改善微循环和增加脑血流量发挥脑保护作用。近期，我们观察了TMP对缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑匀浆、血清TNF-α、IL-10的水平影响，探讨其脑保护作用的机制。

1 材料与方法

1.1 材料 成年Wistar大鼠135只，7周龄。由滨州医学院实验动物中心提供，本实验室合笼生产;正常哺乳喂养，雌雄不限，体质量(150±3.5)g。盐酸TMP注射液(北京市永康药业有限公司);大鼠TNF-α、IL-10 ELISA试剂盒(美国Biosource公司);Bcl-2抗体(北京中杉生物试剂有限公司);免疫组化SP试剂盒(美国ZYMED公司);高速低温离心机(德国Hares公司);组织脱水机、石蜡包埋机、组织切片机(德国Leica公司);全自动酶标仪(美国Multiskan M.S公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 模型制备及干预 参照Rice等［1］方法。制作脑损伤模型:大鼠行乙醚麻醉，仰卧位固定于手术台上，颈前正中切口，分离右侧颈总动脉并结扎。其中45只大鼠(对照组)缝合皮肤，另90只大鼠于半小时后放入2 L的缺氧密闭容器中，通8%O2与92%N2的混和气体1 h，温度(36.5 ±0.5)℃。制模成功(阻断右侧颈总动脉血流后立即出现左侧肢体活动减少，在桌面爬行时向左转圈，不符合上述标准者弃去不用)随机分为TMP组和生理盐水组各90只。TMP组腹腔注射TMP 30 mg/kg，生理盐水组注射等量生理盐水。模型制备完成后即刻(0 h)及12 h后各注射1次。

1.2.2 TNF-α、IL-10水平检测 各组均于制模后0、6、12、24、48 h 各处死大鼠 9 只。乙醚麻醉，剖胸暴露心脏左心室，取血5 ml，置于预冷的EP管中静置0.5 h，4℃条件3000 r/min 15 min离心取血清，冰箱-20℃保存。用眼科剪剪破右心耳，从左心室用生理盐水将血液冲净，剪开颈后部皮肤向上暴露至颅顶，2把眼科镊由枕骨大孔处向两侧拨开颅骨，取出右脑放入EP离心管称重，减除EP管重计算脑湿重，液氮保存;标本置匀浆器内加生理盐水(按照W/V 为1∶2)，冰水中研磨匀浆约 10 min，移至 1.5 ml EP管中，4℃条件12000 r/min 15min离心取上清，-20℃保存。采用ELISA法检测两组血清和脑匀浆TNF-α、IL-10水平，用全自动酶标仪于450 nm波长下测定吸光度OD值。

1.3 统计学方法 采用SAS8.02统计软件。计量数据以表示，组间比较采用t检验。检验水准α =0.05。

2 结果

各组不同时点TNF-α水平见表1;IL-10水平见表2。

3 讨论

研究证实，神经系统和免疫系统间有复杂的双向调节作用。前者产生神经递质和神经肽等调节因子，对免疫系统发挥功能性调节作用，后者可分泌免疫调节因子如细胞因子等调节特定的神经系统的功能。脑缺血后产生炎症反应［2］，细胞因子表达，脑组织和血清中不同的炎症因子表达有各自的动态变化规律。

表1 各组脑匀浆、血清TNF-α水平比较(n=9，OD值，)

表1 各组脑匀浆、血清TNF-α水平比较(n=9，OD值，)

注:与对照组同时点比较，*P＜0.05;与生理盐水组同时点比较，△P＜0.05

组别0 h 6 h 12 h 24 h 48 h TMP 组血清 8.90 ±0.45＊△ 10.38±0.54＊△ 12.81 ± 0.51＊△ 12.53±0.82＊△ 10.87±0.80＊△脑匀浆 165.34 ±4.59＊△ 218.29±5.50＊△ 238.14 ± 2.70＊△ 207.29±4.41＊△ 202.50±4.72＊△生理盐水组血清 9.81 ±0.66* 12.49 ±0.82* 14.44 ± 0.88* 12.79 ±0.45* 11.56 ±0.48*脑匀浆 172.21 ±4.34* 253.04 ±3.84* 297.01 ±10.11* 267.01 ±2.78* 235.30 ±4.60*对照组血清 7.23 ±0.50 8.57 ±0.36 9.69 ± 0.60 8.05 ±0.28 9.40 ±0.41脑匀浆 146.02 ±3.50 160.45 ±2.74 172.53 ± 3.84 170.22±3.93 159.49 ±3.20

表2 各组脑匀浆、血清IL-10水平比较(n=9，OD值，)

表2 各组脑匀浆、血清IL-10水平比较(n=9，OD值，)

注:与对照组同时点比较，*P＜0.05;与生理盐水组同时点比较，△P＜0.05

组别0 h 6 h 12 h 24 h 48 h TMP 组血清 11.24 ±1.21＊△ 13.14 ±0.92＊△ 15.13 ±0.87＊△ 18.54 ±0.82＊△ 17.21 ±0.96＊△脑匀浆 94.29±1.66＊△ 93.51±3.17＊△ 120.81±4.18＊△ 153.77±4.28＊△ 161.60±2.74＊△生理盐水组血清 16.13 ±1.27* 16.94 ±1.21* 20.27 ±1.15* 22.55 ±1.19* 18.37 ±1.09*脑匀浆 105.73 ±6.79* 129.60 ±7.20* 131.20 ±5.13* 169.21 ±7.55* 176.75 ±5.16*对照组血清 10.31 ±0.46 12.87 ±0.99 13.01 ±0.70 13.29 ±0.72 12.48 ±1.02脑匀浆 88.60 ±2.15 87.70 ±1.33 106.30 ±3.53 135.10 ±6.16 142.35 ±3.64

促炎症细胞因子是启动、诱导或者抑制体内炎症反应的一组细胞因子，包括 TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、IL-10等。TNF-α是一种作用广泛的多功能细胞因子，主要由单核巨噬细胞合成、释放。神经系统中主要由胶质细胞分泌，参与炎症反应和免疫反应［3］。TNF-α可以损伤血管内皮细胞造成血管内皮细胞发生形态结构与功能损伤性改变，如坏死、脱落，细胞间隙增大等而使脑血流减少［4］。TNF-α可通过抗氧化途径保护神经元，增强神经元在再灌注过程中抵抗氧自由基的损伤［5］。IL-10是一种具有抗炎和免疫调节作用的细胞因子，其可抑制许多促炎症细胞因子的合成与分泌，如使IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM、CSF)减少，减轻炎症反应［6］。

TMP又称四甲基吡嗪，其具有抗血小板聚集、扩张小动脉、改善微循环和脑血流的作用。可用于闭塞性血管疾病、脑血栓形成、脉管炎、冠心病、心绞痛等。以往研究表明，TMP可能抑制组胺、5-羟色胺的合成或释放，体外试验表明TMP能直接拮抗组胺、5-羟色胺所致的豚鼠离体回肠的收缩［7］。本研究TMP组、生理盐水组各时点脑匀浆、血清中TNF-α、IL-10水平均高于对照组，TMP组各时点脑匀浆、血清中TNF-α、IL-10水平均低于生理盐水组。提示TMP治疗可减轻缺氧缺血脑损伤后大脑内的炎症反应，具有脑保护作用。

总之，TMP具有脑保护作用，其可能机制为降低脑匀浆及血清中IL-10、TNF-α水平。

［1］Rice JE，Vannucci RC，Brierley JB，et al.The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat［J］.Ann Neurol，1981，9(2):131-141.

［2］Perini F，Mona M，Aleeci M，et al.Temporal profile of serum antiinflammatory and pro-inflammatory interleukins in acute ischemic stroke patients［J］.Neurol Sci，2001，22(4):289-296.

［3］韦立功.新生儿缺氧缺血性脑病细胞因子研究进展［J］.医学综述，2003，9(1):61-63.

［4］刘敬，邱英芬，曹海英，等.新生儿缺氧缺血性脑病时血清IL-6、IL-8、TNF-α变化及其对血流动力学的影响［J］.中国新生儿科杂志，2002，20(1):21-23.

［5］Uno H，Matsuyama T，Akita H，et al.Induction of tumor necrosis factor-α in the mouse hippocampus following transient forebrain ischemia［J］.J Cereb Blood Flow Metab，1997，17(5):491-499.

［6］李明才，何韶衡.白细胞介素10超家族的研究进展［J］.现代免疫学，2004，24(1):83-86.

［7］范治云，罗红，刘玉兰，等.川芎嗪的抗炎作用与组胺、5-羟色胺的关系［J］.中药新药与临床药理，2004，15(2):93-94.