复方降脂胶囊对实验性血栓形成的影响

江苏省苏州市立医院(215001) 席与斌 徐 蓉 吴允孚

本文观察复方降脂胶囊对实验性血栓形成的影响。

1 实验试剂和仪器

1.1 受试药物 复方降脂胶囊浸膏粉,由南京中医药大学提供,每克含生药 8.9g,为棕褐色粉末。

1.2 试剂 ADP:美国 sigma公司;曲克芦丁:天津药业焦作有限公司;盐酸肾上腺素注射液:天津金耀氨基酸有限公司。

1.3 实验动物 SD大鼠 40只,体重 200～250g。浙江省实验动物中心提供。ICR小鼠50只,体重 18～22g,扬州大学实验动物中心。

1.4 实验仪器 实验性体内血栓形成测定仪:包头医学院心血管研究室 型号:BT8723;普力菲尔超纯水机:上海富诗特仪器设备有限公司 型号:FS7-LH-20;电子天平(体重)电子计重秤 :中国-凯丰集团型号:ACS-H 1;分析天平 :SHIMADZU CORPORATION JAPAN型号:AY120。

2 实验方法

2.1 复方降脂胶囊对电流损伤大鼠颈总动脉后混合血栓形成的影响[1-2]。2.1.1取雄性 SD大鼠 10只,体重 200～250g,按体重随机分为 5组,每组 10只,即空白对照组(生理盐水),阳性组 (曲克芦丁48mg/kg),复方降脂胶囊高(40.00g/kg)、中剂量组(26.67g/kg)、低剂量组(13.33g/kg)。灌胃给药 5天,给药体积为 10mL/kg,于末次给药后 30分钟开始刺激。空白对照组给予等体积生理盐水。

2.1.2 方法 受试药物临用前用蒸馏水配成所需浓度,各组均灌胃给药(空白对照组给予等体积生理盐水),容积为 10mL/kg。

2.1.3 模型制备 造模时,大鼠经腹腔注射 10%水合氯醛(350mg/kg,静注)麻醉后,仰卧位固定。颈部正中线切口,分离右侧颈总动脉,近心端放置BT87-3型实验性体内血栓形成测定仪的刺激电极,远心端放置温度探头,于末次给药后 30分钟开始刺激。刺激的电流强度为 2 mA,连续刺激 7分钟。当刺激电极接通电流后,由于电流的热效应引起血管损伤,激活凝血系统及血小板,管腔内逐渐形成混合血栓。由于血栓的形成,管腔内血流逐渐被阻断,当血流被完全阻断时,远心端温度骤降。此时温度探头能测定其温度骤降,故仪器报警,此即为血管栓闭时间。从开始刺激到温度骤降所需的时间作为动脉血栓形成时间 OT(s)。

2.2 复方降脂胶囊对 ADP混合致栓剂致小鼠肺栓塞的影响[3-4]

2.2.1 混合致栓剂的配制 取 0.2mLADP(浓度为0.731mg/mL),0.67m L(1mL∶1mg)肾上腺素 ,用生理盐水定容至 10mL,配制成混合致栓剂。

2.2.2 小鼠肺栓塞模型的复制 取雄性 ICR小鼠 50只,体重 18～22g,按照体重随机分为 5组,即空白对照组(生理盐水),阳性组(曲克芦丁 48mg/kg),复方降脂胶囊高剂量组(40.00g/kg)、中剂量组(26.67g/kg)、低剂量组(13.33g/kg)。灌胃给药 5天,给药体积为 10mL/kg,空白对照组给予等体积生理盐水。末次给药后 30分钟,按 0.075m/10g尾静脉注射 ADP混合致栓剂,形成小鼠肺栓塞(即呼吸急促,无法自主活动),记录小鼠自注射 ADP混合致栓剂后至恢复自主活动的时间。

3 测量指标

3.1 血栓形成时间(OT)的测定 记录从开始刺激至动脉远端温度骤降的时间,此时间段即作为动脉血栓形成时间。

3.2 小鼠自主活动时间 记录注射 ADP混合致栓剂后至小鼠恢复自主活动时间。

4 统计学处理

所有数据均采用 SPSS16.0进行统计,以均数 ±标准差表示,方差齐性使用单因数方差分析,方差不齐性使用秩和检验。P＜0.05为差异有显著性。

5 结 果

5.1 复方降脂胶囊对电流损伤大鼠颈动脉内膜血栓形成的影响 实验结果表明,复方降脂胶囊低、中、高剂量组和阳性组均能显著延长电流损伤大鼠颈动脉内膜血栓形成的时间,与空白对照组比较,具有显著性差异(P＜0.05或 P＜0.01)。结果见表 1。

表1 复方降脂胶囊对电流损伤大鼠颈动脉内膜血栓形成的影响

表1 复方降脂胶囊对电流损伤大鼠颈动脉内膜血栓形成的影响

与空白组对比,**P＜0.01,*P＜0.05。

动物数(n)给药剂量(g/kg)OT(s)空白对照组 10 0 576.56±90.81阳性组 10 48mg 766.11±142.41**低剂量组 10 13.33 682.78±118.97*中剂量组 10 26.67 718.60±167.67*高剂量组 10 40.00 747.6±203.03*

5.2 复方降脂胶囊对 ADP混合致栓剂致小鼠肺栓塞模型的影响 实验结果表明,复方降脂高剂量组和阳性组对小鼠急性肺血栓有抑制作用,能显著缩短 ADP混合致栓剂致肺栓塞模型小鼠的喘促持续时间,与空白对照组组比较具有显著性差异(P＜0.05或 P＜0.01)。结果见表 2。

表2 复方降脂胶囊对ADP混合致栓剂致小鼠肺栓塞模型的影响

表2 复方降脂胶囊对ADP混合致栓剂致小鼠肺栓塞模型的影响

与空白组对比,**P＜0.01,*P＜0.05。

动物数(n)给药剂量(g/kg)喘促持续时间(s)空白对照组 10 0 219.3±40.31阳性组 10 48mg 170.28±27.22**低剂量组 10 13.33 204.85±42.85中剂量组 10 26.67 190.25±24.45高剂量组 10 40.00 180.89±35.71*

6 讨 论

大多数心脑血管疾病发生的前提都是动脉粥样硬化血栓的形成,而血小板的活化在血栓形成过程中起着重要的作用[5]。血栓的形成主要取决于血管内膜受损、血流异常以及血液成分改变 3个因素。脂质增加、血脂比例改变或(和)脂质质量异常都可能引起血管内皮的损伤。脂质沉积在血管内膜,同时单核-巨噬细胞在病变部位移行堆积,大量吞噬脂质后转变为泡沫细胞,最后形成动脉粥样硬化(AS)斑块。另一方面,血脂异常也可引起血管内皮细胞以及血白细胞、血小板功能的异常,增强凝血活性。故血脂异常可通过多种途径促进血栓的形成,并进一步损伤血管内皮,进而释放生长因子,促进血管平滑肌增殖,从而加重 AS过程。血栓按照其发生的部位可分为动脉血栓和静脉血栓[6]。静脉血栓主要是由于血流缓慢或者瘀滞,导致凝血因子聚集而引起血液凝固,此种血栓因富含纤维蛋白和红细胞,故又被称为红血栓。本实验通过电流损伤动脉内膜所致的血栓主要是混合血栓,红白血栓兼有之。实验结果显示,复方降脂胶囊能延长内膜损伤后混合血栓引起的血管堵塞时间(OT),缩短 ADP混合致栓剂诱发急性肺栓塞后小鼠恢复自主活动的时间,表明其抗血栓的作用可能与抑制血小板聚集有关。ADP混合致栓剂使纤维蛋白原与相应位点结合,释放血小板内储存的钙,进而促进内源性花生四烯酸(AA)释放,使血小板聚集。本实验表明,复方降脂胶囊能减弱血小板聚集,降低血浆黏度,增强纤溶系统,使血小板处于解聚状态,而达到抑制血栓形成的作用。

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[3] 李圣青,张艰,戚好文,等 .小鼠肺栓塞模型的诱导及比较[J].第四军医大学学报,2004,25(15):1379

[4] 马世平,刘保林,周素娣,等.西红花总苷的药理学研究(对血凝、血小板聚集及血栓形成的影响[J].中草药,1999,30(3):196

[5] Steinhubl SR,Moliterno DJ.The role of the platelet in the pathogenes is of atherothrombosis[J].Am JCard Iovasc Drugs,2005,5(6):399

[6] 汪钟,郑植荃.现代血栓病学[M].北京:北京医科大学协和医科大学联合出版社,1997:462