艾灸对大负荷训练期间男子中长跑运动员T淋巴细胞亚群的影响

高明 吴瑛 李国强

1 上海体育学院（上海 200438） 2 上海中医药大学针灸推拿学院

国内外研究表明［1，2］，大负荷运动训练可引发运动员免疫系统机能失衡。中长跑运动员4周赛前高强度大负荷训练使CD8+细胞进一步升高，CD4+/CD8+比值倒置［3］，优秀男子古典式摔跤运动员冬训大负荷训练期4周后，CD4+细胞含量及CD4+/CD8+比值明显下降［4］，提示T淋巴细胞亚群发生变化，表明运动员免疫功能紊乱，感染疾病的几率增大。

艾灸疗法能增强机体非特异性和特异性免疫功能的作用，在预防保健、治疗免疫系统疾病和调节机体免疫机能方面有肯定作用。艾灸有利于运动员恢复血清CK活性，促进血乳酸消除，降低体内血乳酸水平［5，6］，减轻运动性疲劳，提高机体运动能力。有研究表明，艾灸能明显改善慢性疲劳综合征（CFS）患者症状、提高临床疗效［7］；化脓灸足三里穴、悬钟穴，可增加感冒易感患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值［8］，提高免疫机能 ；隔盐艾灸神阙穴后，CD3+、CD4+、CD8+均明显上升［9］，提示艾灸可调节T淋巴细胞亚群平衡。这些报道均提示艾灸对T淋巴细胞亚群有调节作用，可提高患者免疫功能及抗病能力。近年来提出的针灸良性预应激假说［10］和开展的艾灸预处理相关实验研究［11，12］，也证实了艾灸对心脏、脑保护作用与启动机体内源性保护机制密切相关。基于此，本研究以中长跑运动员为研究对象，将中医艾灸疗法和“治未病”理论相结合，制定与运动训练相适应的防治方案，在大负荷训练早期阶段开始干预，研究艾灸对CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的调节作用，并为艾灸方法在竞技体育运动训练中的应用和推广提供实验依据。

1 对象和方法

1.1 研究对象

上海体育学院训练中心男子中长跑运动员12名，年龄16～21岁，训练年限3～6年，一级运动员3名，二级运动员9名，均身体健康，采用SAS软件进行完全随机化分组，分为对照组（6名）和实验组（6名），两组年龄、身高、体重、训练年限、运动等级等基线情况相比，差异均无统计学意义（P> 0.05），具有可比性。

实验组和对照组实验期间均正常生活，按相同计划训练。每天下午训练后，实验组使用艾灸进行预防性治疗，对照组无艾灸干预治疗。实验前一周内患病者如感冒、肺炎等，实验期间外出比赛不能继续实验者，均不纳入实验。

1.2 训练计划

根据主教练制订的全年训练计划，在准备期的大负荷阶段训练进行实验。具体安排如下：第1周为适应训练周，第2～4周为大负荷训练期，第5周为调整训练周。大负荷训练期每天训练2次，每周训练6天，周日休息，共12次，其中，大负荷强度课3次，中负荷强度课5～6次，小负荷强度课3～4次；一次训练课准备活动20～30分钟，正式训练80～90分钟，整理活动20～30分钟；训练内容包括一般耐力（负荷强度65～75%、心率150～165次/分钟、10次/周）、专项耐力（负荷强度85～90%、心率175次/分钟以上、2次/周）、速度耐力（负荷强度85～95%、心率175～180次/ 分钟、4～5次/周）、绝对速度（负荷强度95～100%、心率180次/分钟以上、2～3次/周）、专项速度（负荷强度95～105%、心率185次/分钟以上、1次/周）、速度（负荷强度95～105%、心率190次/分钟以上、1次/周）、中长跑专项身体素质（力量、柔韧性、灵敏性、弹跳力）等，训练中交替安排有氧耐力训练、混氧训练、耐酸训练、专项抗酸训练。

1.3 艾灸方法

1.3.1 穴位处方：（1）关元穴（RN4）、足三里穴（ST36）（双）；（2）关元穴（RN4）、三阴交穴（SP6）（双）［13］。

1.3.2 操作方法：实验组每天下午训练后，6:30～7:30进行穴位艾灸预防治疗，上述（1）和（2）两组穴位交替治疗，每天灸一组；运用3个艾灸器，内置Φ20×33 mm纯艾条，分别置于上述穴位上温和灸刺激；治疗过程中，调节艾灸器的调温螺丝，使艾灸温度以患者感觉舒适为度，灸后穴位局部皮肤成淡红色红斑为佳；每天1次，每次30 min，每周治疗6次，星期日休息；从大负荷训练开始至调整训练周结束，共灸治4周。

1.4 测试指标与方法

分别在第1周末（大负荷运动训练前）、第4周末（大负荷运动训练3周后）、第5周末（调整训练1周后），均在清晨6:30～7:00，运动员空腹、安静状态下取静脉血4 ml，2 ml不抗凝，3000 r/min离心10 min分离血清，检测血睾酮（T）和皮质醇（Cort）；2 ml加入肝素钠抗凝检测CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群含量。

采用GC-911放射免疫计数器以放免法检测T和Cort，按试剂盒说明书操作。

肝素抗凝静脉血分离100 µl血样，加入流式管中，加入 20 µl CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5抗体，避光孵育15 min，加入0.5 ml全血红细胞裂解液，10 min后，加入0.5 ml的流式专用鞘液，以前向散射（FSC）和侧向散射（SSC）的dot-plot二维图区分细胞群，开窗于淋巴细胞群，使用流式细胞仪作双荧光检测，测定血T 细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+）相对含量。

1.5 实验仪器和试剂

EPICS-XL流式细胞仪和Q-Prep流式细胞仪标本制备仪（美国BECKMAN COULTER公司）；放射免疫计数器（GC-911，科大创新股份有限公司）；可调式微烟艾灸器（广西桂林市绿竹生物科技有限公司）；纯艾条（Φ20×33 mm，广西桂林市绿竹生物科技有限公司）；CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5，全血红细胞裂解液，试剂及抗体均购自美国BECKMAN COULTER公司；碘［125I］睾酮放射免疫分析药盒、皮质醇放射免疫分析药盒（北京北方生物技术研究所）。

1.6 统计学分析

2 结果

2.1 T、Cort及T/C比值

表1显示，大负荷训练3周后，对照组和实验组分别与同组大负荷训练前相比，T明显降低（P< 0.05），Cort明显增高（P < 0.01），T/C比值明显降低（P < 0.01）；调整训练后，对照组和实验组T、Cort及其比值均恢复，但对照组T、T/C比值仍低于大负荷训练前（P < 0.05）。对照组和实验组两组间相比无统计学意义（P > 0.05）。

2.2 T淋巴细胞亚群含量

表2显示，实验组大负荷运动训练后CD3+T细胞比大负荷训练前明显增加（P < 0.01），且比同期对照组明显增高（P < 0.05）；调整训练1周后，对照组和实验组CD3+T细胞与同组大负荷运动训练后相比显著降低（P < 0.05，P < 0.05），且实验组明显高于同期对照组（P < 0.05）。

实验组大负荷运动训练后CD4+T细胞比同组大负荷训练前明显增加（P < 0.05），调整训练1周后，实验组和对照组CD4+T细胞较同组大负荷训练后均显著降低（P < 0.05，P < 0.01）。

实验组大负荷运动训练后CD8+T细胞比同组大负荷训练前明显增加（P < 0.05）；调整训练1周后，对照组和实验组CD8+T细胞与同组大负荷训练后相比均显著降低（P < 0.05，P < 0.05），且实验组显著高于同期对照组（P < 0.05）。

表1 两组运动员T、Cort及其比值比较

表2 两组运动员T淋巴细胞亚群含量比较

对照组大负荷训练后CD4+/CD8+比值较同组大负荷训练前明显上升（P < 0.05），调整训练1周后仍继续上升，但无统计学意义（P > 0.05）；实验组CD4+/CD8+大负荷训练后升高，调整训练1周后恢复趋势，且3次检测值差异均无统计学意义（P> 0.05）。

3 讨论

本研究在训练第1周小强度、小运动量的适应性训练之后，即大负荷训练前，空腹安静状态取肘静脉血，并检测相关指标作为基础值。结果显示：T、Cort及其比值，CD3+、CD4+、CD8+T细胞含量及其CD4+/CD8+比值，对照组和实验组两组间差异均无统计学意义，且均在运动员正常值范围内，故两组有可比性。

本实验结果表明，3周大负荷运动训练后，T明显下降，Cort明显上升，对照组和实验组T/C下降幅度分别达到（48.4±11.5）%和（55.6±8.58）%，当运动员T/C比原来水平下降25～30%，或持续下降则为疲劳或过度疲劳表现［14］，表明本研究的3周大负荷训练造成了运动员疲劳，训练负荷已达到大负荷的要求。调整1周后，对照组和实验组分别恢复至（75.2±15.7）%和（78.2±26.2）%，表明1周调整使运动员机能有所恢复，但未完全恢复到训练前水平，对照组T、T/C比值仍低于大负荷训练前，实验组大负荷训练前后相比差异无统计学意义，提示艾灸对运动员T、C有一定调节作用，有利于运动员对大负荷训练的适应。

T淋巴细胞直接反映特异性免疫功能，训练监控中常作为反映运动员机能状况和免疫功能的有效指标［14］，CD3+表示T细胞总数，CD4+T细胞具有辅助和调节免疫应答的作用，发挥正反馈调节作用，CD8+T细胞亚群有免疫杀伤或抑制作用，发挥负反馈调节作用，这两个功能相互拮抗的T细胞亚群在免疫应答中相互协调，保持免疫系统功能的平衡。两种T细胞亚群比例失调产生免疫功能障碍，进而导致机体抵抗力下降，对各种疾病易感性增加。本研究中，对照组3周大负荷训练后CD3+、CD4+、CD8+T细胞含量上升，与大负荷训练前相比无统计学意义，调整训练后恢复并下降，CD3+、CD4+、CD8+T细胞与同组大负荷训练后相比均明显降低，且CD3+、CD4+、CD8+T细胞低于运动员正常值范围（58.6～83.1%、27.1～49.8%、19.4～41.1%），表明本实验的大负荷训练导致男子中长跑运动员T淋巴细胞免疫机能低下。经艾灸防治的实验组大负荷运动训练后CD3+、CD4+、CD8+T细胞上升且较大负荷训练前明显增加，调整训练后，实验组CD3+、CD4+、CD8+T细胞较大负荷训练后降低，且实验组大负荷训练后CD3+、调整后CD3+和CD8+与同期对照组相比，均明显增高；实验组CD3+、CD4+、CD8+T细胞均在正常范围，表明艾灸对男子中长跑运动员T淋巴细胞有调节作用，提高其大负荷运动训练期间CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群含量，预防CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群低下。这与其它临床报道［7-9］一致。

本研究中，实验组CD4+/CD8+比值变化无统计学意义，表现为动态平衡；对照组CD4+/CD8+持续上升趋势，且大负荷训练后与同组大负荷前相比明显上升，对照组调整训练后仍继续上升，与以往相关报道［3，4，14］不相符。分析原因，本研究中，对照组调整训练后CD4+和CD8+明显下降，低于正常值范围，CD8+下降更甚，导致CD4+/CD8+比值上升。理论上分析，运动训练中，常使用CD4+/CD8+比值对运动员免疫机能评估，CD4+与CD8+T细胞相互协调，相互制约，维持机体免疫系统机能的相对平衡，大负荷训练后上升或下降，经过一定时间调整或休息后，CD4+和CD8+应恢复至大负荷训练前水平或变化不大，其比值也应恢复至大负荷训练前水平或变化不大，即保持动态平衡，经过平衡－失衡－新平衡建立的变化，再进行下一周期的大负荷训练。如果在机体免疫系统机能尚未完全恢复时进入下一周期大负荷运动，则加深对它的抑制。如此反复，会造成运动性免疫机能抑制。临床上分析，实验组变化在正常范围内波动，对照组调整1周后CD3+、CD4+、CD8+T细胞含量均下降且低于正常范围，CD4+/CD8+比值调整1周后并未恢复到大负荷训练前水平，综合分析，进一步表现失调趋势。

综上，艾灸能提高男子中长跑运动员大负荷运动训练期间CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群含量，防止CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群低下，预防CD4+/CD8+失衡。艾灸对大负荷运动训练阶段运动员T淋巴细胞亚群有良性调节作用，有助于提高运动员对大负荷训练应激的适应。

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