浅析中药注射剂的检测现状

陈光勇，陈旭冰，刘光明，邓 杰

（1.大理学院药学与化学学院，云南大理 671000；2.重庆医药工业研究院，重庆 400061）

浅析中药注射剂的检测现状

陈光勇1，陈旭冰1，刘光明1，邓 杰2

（1.大理学院药学与化学学院，云南大理 671000；2.重庆医药工业研究院，重庆 400061）

目的：综述中药注射剂的检测状况。方法：查阅、分析、归纳有关文献。结果：中药注射剂的检测方法包括拉曼光谱法、红外光谱法、三维荧光法、气相色谱法、高效液相色谱法、气质联用技术和液质联用技术。在所有检测方法中，高效液相色谱法使用最为广泛，由于单一检测手段的局限性，联用技术已成为检测的一种必然趋势。结论：随着先进检测手段的推广，中药注射剂的质量将会上一个新的台阶。

中药；注射剂；检测

近年来，已报道的中药注射剂不良反应在数量上增幅较大，品种较多〔1〕，鱼腥草事件、刺五加事件、茵栀黄事件、双黄连事件等曾一度引起社会的广泛关注。根据《药品不良反应信息通报》资料，国家药品不良反应监测中心曾先后通报了清开灵、双黄连、葛根素、穿琥宁、参麦、鱼腥草、莲必治等注射液的不良反应，并对葛根素注射液的说明书作了修订。2007年，国家出台了《中药、天然药物注射剂基本技术要求》，针对新申报的中药注射液首次要求明确量化成分，与以往中药注射液净药材入药可测成分达20%～25%、有效部位入药可测成分达70%～80%的相关规定相比，要求有效成分制成的注射液，其单一成分的含量应不少于90%；多成分制成的注射液，总固体中结构明确成分的含量应不少于60%。另外，明确结构的成分，应当在指纹图谱中得到体现，一般不低于已明确成分的90%，对于不能体现的成分应有充分合理的理由。要提高中药注射剂的质量，对其进行合理、科学的检测是必不可少的。本文将针对中药注射剂中化学成分的检测进行综述。

1 运用拉曼光谱检测中药注射剂

拉曼光谱可提供快速、简单、可重复且更重要的是无损伤的定性定量分析，它无需样品准备，样品可直接通过光纤探头或者通过玻璃、石英和光纤测量。周殿凤〔2〕运用拉曼光谱检测了中药灯盏花素注射剂和红花注射剂，并对其拉曼谱图进行了分析。实验结果表明，灯盏花素注射剂和红花注射剂的拉曼谱图中虽然荧光背景很强，但依然包含了不少有用信息，可见，利用拉曼光谱鉴定中药注射剂是可行的，但是测量技术和技巧还有待进一步提高。

2 运用红外光谱检测中药注射剂

红外光谱分析特征性强，气体、液体、固体样品都可测定，并具有用量少，分析速度快，不破坏样品的特点，能进行定性和定量分析，而且是鉴定化合物和测定分子结构的有效方法之一。周殿凤〔3〕测定了中药灯盏花注射剂、刺五加注射剂和香丹注射剂的红外谱图，这些中药注射剂的红外谱图在2 000 cm-1以上波数段非常相似，2 000 cm-1以下波数段差异较大。通过对注射剂众多谱线的分析，推断出中药灯盏花、刺五加和香丹的主要成分是多环芳香烃衍生物，并且含有大量的—OH，刺五加中含有—COOH，灯盏花的化学结构式里有含氧环这个官能团。上述结果与目前中药注射剂的主要研究方法高效液相色谱法（HPLC）得出的结论一致。

3 运用三维荧光等高线图识别程序检测中药注射剂

三维荧光检测法具有灵敏度高、选择性强、试样量少和测定简单的特点。徐永群等〔4〕用统计模式识别法设计了中药注射剂三维荧光指纹图谱的识别程序，对刺五加、红花、血栓通和香丹4种注射剂进行了识别。测试结果表明，4种中药注射剂的谱图具有指纹性，相同注射剂有相似的形状，谱图之间的差异较小，不同注射剂之间的差异较大，谱图的位置和形状有明显的差异，凭借这些差异，就可实现对各种注射剂的识别，包括不同种类注射剂和同种不同批次和不同生产厂家的辨认。

4 运用气相色谱（GC）检测中药注射剂

气相色谱具有高柱效、高选择性、高灵敏度、用样量少、分析速度快的特点，可用来检测中药注射剂。王俊等〔5〕采用气相色谱检测复尔康注射液中所含挥发性化学成分，以樟脑为参照物，按“中药注射剂指纹图谱研究的技术要求”，计算相对保留时间及峰面积比值，标定共有指纹峰。在全面方法学研究的基础上，先后对10批复尔康注射液供试品进行检测分析，建立了该药品的GC指纹图谱。实验结果表明，GC指纹图谱中共有11个共有峰，其相对保留时间及峰面积比值可作为复尔康注射液质量控制的方法之一。

冯文宇等〔6〕采用GC-HPLC色谱法，分别检测青银注射液所含挥发性及非挥发性化学成分，以樟脑、绿原酸对照品为参照物，按“中药注射剂指纹图谱的技术要求”，计算相对保留时间及峰面积比值，标定共有指纹峰。在全面方法学研究的基础上，先后对13批注射液供试品进行检测分析，从而建立了该注射液的GC-HPLC指纹图谱。实验结果表明，GC指纹图15个共有峰、HPLC指纹图6个共有峰的相对保留时间及峰面积比值，可作为青银注射液质量评价的重要依据之一。

萧伟等〔7〕采用毛细管气相色谱法测定热毒宁注射液的挥发性成分，采用氢火焰检测器及质谱进行检测分析。实验结果：测定热毒宁注射液挥发性成分，标出其中8个共有峰，说明了其药材归属，并采用GC/MS对主要色谱峰进行了初步定性。该方法准确、重现性好，为热毒宁注射液挥发性成分的质量控制提供了依据。

5 运用高效液相（HPLC）色谱法检测中药注射剂

高效液相色谱法分离效率高、速度快、灵敏度高，是中药注射剂检测中用得最多的一种方法。徐金玲等〔8〕采用HPLC建立复方半边莲注射液原药材（即半边莲、半枝莲、白花蛇舌草）、注射液半成品、成品的标准指纹图谱；运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版软件进行分析，对中药材、中间体和注射剂10批次以上的供试品进行相似度评价。为了确保制备工艺的科学性和稳定性，根据中药材、中间体和注射剂的指纹图谱，标定出了各图谱之间的相关性。实验结果：通过对提取溶剂及方法、流动相、色谱柱、柱温、检测波长等色谱条件的考察，确定了复方半边莲注射液原药材、半成品及成品的HPLC指纹图谱色谱条件。该方法操作简便，稳定性、重现性、精密度均较好，具有广泛的适用性。所用的实验方法科学、可靠，可用于对复方半边莲注射液的定性定量研究。

沈洁等〔9〕建立了丹参注射液7种酚酸类成分的HPLC-UV分析方法，选用了280、326、286 nm 3种吸收波长，实现了对丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、丹酚酸D、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A等7种有效成分的同时测定，检测限达到0.008～0.16 μg/ mL。此法灵敏度高，快速准确，可用于丹参注射液及其生产过程的质量分析。

Yu ZG等〔10〕用高效液相色谱法测定了脑得生注射液中红花黄色素A、葛根素、阿魏酸、人参皂苷Rg1和Rb1。

唐旭利等〔11〕运用高效液相法检测丹红注射剂。建立了相同条件下丹红注射剂、中间体和药材的HPLC指纹图谱。所建立的指纹图谱个峰分离度较好，指纹信息完整，符合指纹图谱技术规范。进一步利用相似度分析软件进行了指纹图谱相关性分析，揭示了丹红注射剂与中间体和药材具有较好的相关性。共有峰的相对保留时间及相对峰面积参数，可作为中药注射剂质量控制的重要依据。

娄子洋等〔12〕利用HPLC-DAD、HPLC-TOFMS、HPLC-MSn三种分离分析技术，以HPLC-DAD为主，HPLC-TOF-MS、HPLC-MSn为辅检测注射用双参（丹参和人参）药材、中间体和制剂的化学成分，HPLC-TOF-MS、HPLC-MSn两种技术用于各成分的定性鉴别，确定其共有峰所代表的化学物质，以HPLC-DAD为主，制作指纹图谱。利用HPLC分别建立了丹参与人参药材不同批次的指纹图谱，中间体与注射剂不同批次的指纹图谱，为中药注射剂的指纹图谱研究与全程质量控制提供示范性的研究工作。

注射用广炎灵粉针是由木犀科丁香属植物紫丁香、朝鲜丁香以及洋丁香的干燥叶为原药材，提取精制而成的广谱抗菌粉针剂。崔淑霞等〔13〕采用HPLC法对注射用广炎灵粉针及其原料药材和中间体进行了指纹图谱的研究，建立了指纹图谱的检测方法和相似度评价方法。结果表明，该方法成本低、直观、快速、准确、易于推广。

6 运用高效液相色谱/蒸发光散射检测器（HPLC/ELSD）检测中药注射剂

蒸发光散射检测器一定程度上弥补了HPLC传统检测器的不足，特别是无紫外或紫外末端吸收弱的大分子有机化合物的检测，显示出极大的优越性。其响应值不依赖于样品的光学性质，不论它具有何种官能团。对所有样品的检测几乎具有相同的响应因子，对未知物和纯度的测定要比UV检测更容易更准确。随着蒸发光散射检测器技术的不断改进和完善，将在中药分析领域广泛的应用〔14〕。曹进等〔15〕运用高效液相色谱/蒸发光散射检测器建立了复方清开灵注射液的指纹图谱。他们对复方清开灵注射液7种有效成分进行了定量测定，方法学考察结果良好；通过指纹图谱相似度评价软件，对10批清开灵注射液的HPLC/ELSD指纹图谱进行了相似度计算，结果表明：10批样品相似度很好。采用HPLC/ELSD法所建立的复方清开灵注射液指纹图谱可以在一个色谱、检测条件下，同时实现整体定性、多指标成分定量的功能，用于质量控制。可以为中药的质量控制和评价提供新的方法模式。

7 运用气质联用（GC-MS）技术检测中药注射剂

气质联用仪（GC-MS）具有高选择性、高灵敏度、高分辨率、可同时进行定性定量分析等特点，是进行复杂化合物的分离和鉴定的重要工具。沈洁等〔9〕对痰热清注射液处方中的山羊角进行了分析研究，建立了同时测定山羊角提取物中12种游离氨基酸的GC-MS分析方法，能够快速鉴定未知氨基酸，准确检测出各种氨基酸的含量，并且对氨基酸衍生化条件进行了较为全面的优化以确保方法的有效性。此法可用于山羊角提取物的质量控制，完善了痰热清注射液生产过程中间体的质控方法。

8 运用液质联用（LC/MS）技术检测中药注射剂

液质联用体现了色谱和质谱优势的互补，将色谱对复杂样品的高分离能力，与质谱具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来，在中药注射剂的检测中得到了一定的应用。Zhang HY等〔16〕采用液相色谱-飞行时间质谱（LC/TOF-MS）联用技术和液相色谱-离子肼质谱法（LC/ion trap MSn）检测清开灵注射液，33种化学成分完全被检测出来。该实验为检测复杂的中药体系提供了一种行之有效的方法。Lai CM等〔17〕采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱（HPLC-ESIMS/MS）法检测血塞通注射液，检测出27种皂角苷，并对其中的9种成分（三七皂苷R1；人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Tf和Rg1）作了定量分析。实验对10种血塞通注射液进行了比较，结果显示，对于不同的样品，分析结果变动较大。该研究为血塞通注射液中皂角苷的定性、定量分析提供了一种快速准确、灵敏度高的方法。仇熙等〔18〕运用液相色谱-质谱联用仪对人参的药材、中间体和注射液进行检测，检测结果具有很好的重现性和稳定性。从而得出结论，液相色谱-质谱联用技术是复方人参注射液指纹图谱分析的重要且非常好的分析手段，并可以用于其它中成药的指纹图谱分析。

综上所述，随着现代色谱、光谱技术的发展，一些先进的技术正逐渐运用于中药注射剂的原料、中间体、制剂的检测中。一些传统的中药注射剂已经建立了指纹图谱。在所有检测手段中，高效液相色谱法使用最为广泛，由于单一检测手段的局限性，联用技术已成为检测的一种必然趋势。相信在不久的将来，随着先进检测技术的推广，中药注射剂的质量将会上一个新的台阶。

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Detection Method of Traditional Chinese Medicinal Injection

CHEN Guangyong1,CHEN Xubing1,LIU Guangming1,DENG Jie2
（1.School of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China; 2.Chongqing Pharmaceutical Research Institute,Chongqing 400061,China）

Objective:The detection method of traditional Chinese medicinal injection was discussed.Methods:To study,analyze and review the related literatures.Results:The injections of traditional Chinese medicine were detected by Raman spectrum,infrared spectrum,3-D fluorometric method,Gas chromatography,high performance liquid chromatography,gas chromatography mass spectrometry and liquid chromatography mass spectrometry.Among the detection methods,high performance liquid chromatography was most widely applied.And because of the limitations of a single detection means,multiple techniques are an inevitable trend. Conclusion:With the development of new technology,the quality of traditional Chinese medicinal injection will be improved.

traditional Chinese medicine;injection;detection

R951.2 ［文献标志码］A ［文章编号］1672-2345（2011）08-0017-04

大理学院科研基金资助项目（2008X59）

2011-04-08

2011-06-13

陈光勇，副教授，主要从事药物化学的研究.

（责任编辑 毛本勇）